靶向erbb2分子不同表位的双特异性抗体的抗肿瘤作用及其机理

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1、第二军医大学硕士学位论文靶向ErbB2分子不同表位的双特异性抗体的抗肿瘤作用及其机理EffectiveSuppressionofBreastTumorGrowthbyaBispecificAntibodyTargetingDistinctErbB2Epitopes专业名称：肿瘤学研究生：孟艳春导师：李博华研究员培养单位：第二军医大学肿瘤研究所导师组成员：王皓研究员戴建新教授赵健研究员李威研究员论文工作时间：2009年9月至2013年5月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发

2、表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：刍／渺香日期：冽多年∥月／日学位论文版权使用授权声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，第二军医大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阕。本人授权第二军医大学可以将学位论文全文或部分内容编入《中国学位论文全文数据库》、《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》等数据库进行检索。可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位

3、论文作者签名：蝴日期：如房年I【月fE1导师签名：彩新日期：伽，弓年‘月IEi摘要ABSTRACT⋯缩略词表⋯⋯前言目录第一部分双特异性抗体的构建、表达及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯一、实验材料⋯⋯二、实验方法⋯⋯三、实验结果⋯⋯四、讨论第二部分双特异性抗体体外抗肿瘤功能研究一、实验材料⋯⋯⋯．二、实验方法三、实验结果四、讨论。第三部分双特异性抗体体内抗肿瘤功能研究⋯．一、实验材料。二、实验方法三、实验结果四、讨论⋯全文小结⋯参考文献文献综述⋯⋯⋯⋯⋯肿瘤分子靶向治疗抗体研究进展在读期间发表论文和参加科研工作情况说明一、在读期间发表论文。参加科研工作情况说明谢．16．．19．．

4、21．．26-．37--．-．-．钟柚鸵祀“帖钞的∞o∞“-．_．靶向ErbB2分子不同表位的双特异性抗体的抗肿瘤作用及其机理卅削贡乳腺癌是威胁女性健康的主要恶性肿瘤之一，ErbB2(HER2)基因为乳腺癌的主要致病相关基因，其产物在20％．30％的患者中有过表达现象，ErbB2过度表达患者提示预后不良，并对细胞毒性化疗药产生抵抗。曲妥珠单抗(Trastuzumab，商品名Herceptin)是美国Genentech公司研制的针对ErbB2受体的人源化单克隆抗体，已于1998年获得美国FDA批准用于ErbB2高表达转移性乳腺癌的治疗。但Trastuzumab对Er

5、bB2低表达的转移性乳腺癌不能显示出抗肿瘤活性，即使对ErbB2高表达的转移性乳腺癌，Trastuzumab单药一线治疗的客观反应率在30％．50％。研制更为有效的ErbB2靶向治疗性抗体是临床上的迫切需求。人类表皮生长因子受体(humanepidermalgrowthfactorreceptor，HER／ErbB)家族有4个成员：EGFR／HERl、ErbB2／HER2、ErbB3／HER3和ErbB4／HER4。ErbB2是具有酪氨酸激酶活性的跨膜蛋白，它没有天然配体，在单体状态下无活性。ErbB2可与ErbB家族的其他3个成员(EGFR、ErbB3、ErbB

6、4)形成配体非依赖或配体依赖的异源二聚体而活化，导致下游信号通路MAPK和P13K／Akt激活，最终导致肿瘤细胞增殖和存活。研究表明Trastuzumab不能完全抑制ErbB2异源二聚体激活途径，这可能是Trastuzumab耐药产生的重要原因。在本研究中，我ffJ*O用基因工程技术构建了一种靶向ErbB2分子不同表位的双特异性抗体TPL，这个双特异性抗体由Trastuzumab和Pertuzumab(帕妥珠单抗)组成。Pertuzumab也是一株抗ErbB2人源化抗体，它与ErbB2分子的细胞外II区结合，而Trastuzumab所针对的抗原表位位于ErbB2受

7、体的细胞外IV区。竞争结合实验表明TPL可有效竞争抑制Trastuzumab和Pertuzumab与ErbB2分子的结合，即TPL具有Trastuzumab和Pertuzumab的双特异性。我们采用ELISA方法测定TPI．的亲和力，发现其与Trastuzumab的亲和力相似但明显高于Pertuzumab的亲和力。药代动力学实验表明TPL的药代动力学参数与传统IgG分子相似，提示其具有高度稳定的结构。与Trastuzumab和Pertuzumab联用相比，TPL能够更为有效地阻断配体非依赖和配体依赖的ErbB2异源二聚体的形成，我们推测其原因可能是由于TPL造成的

8、空间位阻作