重症失血性休克大鼠的外周血血小板线粒体的变化及虎杖苷的干预作用

《重症失血性休克大鼠的外周血血小板线粒体的变化及虎杖苷的干预作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南方医科大学2013级硕士学位论文重症失血性休克大鼠的外周血血小板线粒体的变化及虎杖苷的干预作用Changesofmitochondriainperipheralbloodplateletsofratwithseverehemorrhagicshockandtheinterventioneffectofpolydatin课题来源：国家自然科学基金资助项目(No．30672179，30971202)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院陈云燕赵克森教授病理学与病理生理学学术型硕士研究生基础医学院2013年4月24日

2、硕士学位论文重症失血性休克大鼠的外周血血小板线粒体的变化及虎杖苷的干预作用硕士研究生：陈云燕指导老师：赵克森教授摘要重症难治性休克(Severeirreversibleshock)是指休克的晚期，经过输血补液和各种改善微循环为主的抗休克治疗以后，病情仍然恶化，发生死亡。已有报告线粒体病变参与了休克、感染、脓毒症时多器官功能不全(MODS)的发生。另外在重症休克研究中，已证实平滑肌线粒体发生了损伤，它带来了ATP生成减少。表现为线粒体肿胀，膜嵴排列紊乱，通透性转变孔开放，线粒体膜电位(△甲m)减低，治疗后小动脉血管平滑肌细胞(

3、Arterialsmoothmusclecells，ASMCs)内ATP仍明显减少，线粒体保护剂(CsA、虎杖苷)有一定治疗作用，提示细胞线粒体的功能与休克之间存在着密切的关系。但血小板线粒体功能与脓毒症的转归之间的关系有不同的报道，有人报道血小板线粒体呼吸暂时性增强与脓毒症病人的预后呈负相关，而另有人报道血小板线粒体细胞色素C氧化酶活性在脓毒血症死亡组病人中下降得更为显著。本项研究欲查明重症休克大鼠血小板是否发生线粒体损伤，休克不同时间、程度时线粒体损伤是否存在差别，能否根据线粒体损伤程度推断出休克轻重程度，及保护线粒体后

4、血小板线粒体变化，为临床重症休克的诊断和治疗提出新思路。为此本实验利用重症失血性休克模型，设立休克不同时间，造成不同休克程度，以及休克再输血治疗组，采用ATP含量测定，透射电镜观察，线粒体膜电位检测，线粒体通透性转变孔状态检测，过氧化脂质的检测以及溶酶体稳定性的检测等方法分析线粒体功能状态，探讨休克摘要时间及程度与线粒体功能的关系。方法SPF级Wistar大鼠，由南方医科大学实验动物中心提供，体重(200-&209)随机分六组：假手术组，休克30min，60min，120min组，休克120min+生理盐水+输血组(NS组)

5、，休克120min+虎杖苷+输血组(PD组)。用我室已建立的重症失血性休克模型，大鼠用麻药(由13．3％乌拉坦和0．5％氯醛糖溶于100ml生理盐水中配置而成)肌肉注射(0．65ml／kg)麻醉。双侧动脉及单侧静脉插管，动脉插管用来放血以及监测平均动脉压(MAP)，静脉插管则用来液体回输。假手术组：进行动静脉插管等手术，但不复制休克模型，作为阴性对照。休克组，将大鼠快速放血(10分钟内)使血压降至30mmHg左右分别维持30，60，120min。PD组，为休克维持120min后静脉给虎杖苷(30mg／kg)0．6ml，5mi

6、n后输回全血，观察120min。NS组，为休克维持120min后静脉给与虎杖苷等同体积的生理盐水，5min后输回全血，观察120min。以上各组血液均用注射器收集并用肝素抗凝。模型结束后，各组大鼠均采用腹主动脉插管取血，50UI／ml肝素化。所取血液用Percoll梯度密度离心法分离血小板。各组血小板制作成电镜标本后用透射电镜观察线粒体超微结构变化；用荧光素一荧光素酶试剂盒来检测血小板线粒体ATP水平；用血小板内Calcein荧光强度判断血小板线粒体通透性转变孔状态；采用JC．1探针来检测细胞线粒体跨膜电位(△vm)的变化，

7、用发射的绿色荧光的JC．1单体(低△vm细胞)的细胞百分数(％)来说明血小板线粒体去极化比例；使用过氧化氢脂质(LPO)分析试剂盒检测血小板中的过氧化脂质含量；血小板溶酶体稳定性通过吖啶橙(AcridineOrange，AO)检测，用“苍白”细胞(Palecells)的百分比来说明血小板溶酶体状态以及用细胞红色荧光的强弱判断溶酶体稳定性。结果1．血小板线粒体结构发生肿胀破坏硕士学位论文透射电镜结果显示，随着休克时间的加长，休克程度的加深，线粒体肿胀愈发严重：假手术组，大鼠血小板线粒体双层膜结构完整，基质致密，内部嵴结构完整；

8、休克30min组，线粒体发生部分肿胀，基质电子密度降低；休克60min组，线粒体肿胀加重，嵴断裂，基质电子密度降低；休克120min组线粒体肿胀越发明显，嵴断裂，出现电子透亮区和线粒体空泡；NS治疗组线粒体肿胀明显，嵴断裂，出现线粒体空泡；PD治疗组线粒体有一定程度的肿胀，但嵴结构相对完整