大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢菌素的耐药性与esbls基因分型研究

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1、分类号：R373∽㈡578J㈣煳，．IllIllllllllllllllilrllll密级：不保密WF2814453学校代码：11065茑是大学硕士学位论文大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢菌素的耐药性与ESBLs基因分型研究指导教师学科专业名称论文答辩日期干直f一王笑峰副教授病原生物学2o13年11月26日大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢菌素的耐药性与ESBLs基因分型研究中文摘要目的了解威海市立医院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生的超广谱B．内酰胺酶(ESBLs)的基因型，以及产酶菌的耐药性。方法采用CLSI推荐的表型确证实验来收集产生ESBLs大肠埃希菌(40株)和

2、肺炎克雷伯菌(20株)，碱裂解法提取质粒DNA；分别采用特异性引物扩增TEMSHVCTX．M系列基因，测序后在Genbank进行比对确定基因型；对产生一种基因型ESBLs的菌株采用琼脂稀释法测定头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟的MlC值。结果(1)两种细菌扩增到TEM．1、SHv．1、CTX．M．3、CTX-M．9组基因，未扩增到CTX．M．2组基因，扩增产物经测序检出7种ESBL基因型，100％的大肠埃希菌和80％的肺炎克雷伯菌产生blaCTX-M，25％的肺炎克雷伯菌产生blaSHV-12；最常见的基因型是CTX．M．14和CTX．M一55、CTX—M一15，其中CT

3、X．M．14在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别为45％和35％，CTX．M．55在两种菌的检出率皆为35％，CTX．M．15的检出率分别为20％署D15％；检出少量的CTX-M．3、CTX．M一65、CTX．M．101及CTX—M．123基因型。CTX．M．15、CTX—M．55、CTX．M．101及CTX．M．123四种具有头孢他啶水解活性的CTX．M基因型分别占产ESBL的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的62．5％和55％，共同的突变位点是240位氨基酸发生了D240G替代。(2)常规药敏纸片法表明我院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢噻肟全部耐药，除了一株肺炎克雷伯对

4、亚胺培南中介，其余菌株对亚胺培南和美罗培南敏感，对头孢他啶的耐药率分别30％和65％，环丙沙星的耐药率与左氧氟沙星相同，对两种菌的耐药率分别为62．5％和70％。(3)琼脂稀释法药敏结果显示携带具有D240G突变的基因型菌株对头孢他啶中介或耐药，无D240G突变的单产CTX．M一14，65型ESBLs的菌株对头孢他啶表型敏感，两组耐药率有显著性差异(Fisher精确检验(双侧)，P=-I．41+10-4)。结论CTX．M．14和CTX—M一55是本地区主要流行的ESBL基因型，CTX．M．101及CTX．M-123型ESBLs在山东省为首次检出。产生blaCTX．M-

5、15，55，101，123是导致大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢他啶不敏感的重要原因；产ESBL的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对环丙沙星耐药严重，碳青霉烯类为治疗此类细菌感染的首选。我院产ESBL菌株的耐药特点符合CLSIM100．$20头孢噻肟折点；不符合头孢他啶和头孢吡肟折点。硕士研究生：王喜仁(病原生物学)指导老师：王笑峰副教授关键词：超广谱p．内酰胺酶；大肠埃希茵；肺炎克雷伯菌：基因型lIlllIIIIIIIIIIIIIIIIIlY2445100StudyonCephalosporinResistanceandESBLsGenotyopeinEscherichiac

6、oliandKlebsieilapneumoniaeAbstractObjectiveToinvestigategenotypeanddrugresistanceofESBLsproducingEscherichiacoliandKlebsiellapneumoniaeisolatedfromweihaimuniciplehospital．MethodClinicalisolatesofESBLproducingEscherichiacoli(n=40)andKlebsiellapneumoniaestrains(n=20)werecollectedaccording

7、totheScreeningandConfirmatoryTestsforESBLsrecommendedbytheCISI．PlasmidDNAwasextractedbyalkalinelysismethod．PCRanalysiswasusedtoamplifyTEM，SHV·I，CTX·Mgenes，respectively．GenesequencealignmentWasperformedinGenbanktoidentifytheIMactamasegenotype．AgardilutiontestWasusedtodetectedMIC