ampa受体在癫痫后认知功能损伤大鼠海马中的表达变化

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1、河北医科大学硕士学位论文AMPA受体在癫痫后认知功能损伤大鼠海马中的表达变化姓名：胡华伟申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：王维平20080301河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：厶世纬导师签名：训峰学院领导签名：伊移’年j}月3秒

2、日研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：如鲆{扣导师签名：乏钉峄“年夸月罗口日中文摘要AMPA受体在癫痫后认知功能损伤大鼠海马中的表达变化摘要目的：癫痫(epilepsy，EP)是一组不同病因引起的慢性脑部疾病，以大脑神经元过度放电所致的短暂中枢神经系统功能失常为特征，具有反复发作的倾向。癫痫的发病机制复杂，尚未完全阐明。很多癫痫患者除临床痫性症状发作外，常伴有学习记忆减退，成为影响患者生存质

3、量的一个重要原因。有学者研究认为癫痫患者30％。40％存在认知功能障碍。a．氨基．3．羟基．5．甲基．4．异唑丙酸(a．amino．3．hydroxy一5．met．hyl．4一isoxazolepropionicacid，AMPA)受体是谷氨酸受体的一个亚型，AMPA受体是由GluRl．GluR4(或GluRA～GluRD)组成的异源型4聚体复合物，其中GluRl是AMPA受体的一个重要组成部分。近年来研究认为，GluRl与正常突触传递，突触可塑性以及空间学习记忆均密切相关。迄今为止，GluRl与癫痫后认知功能障碍关系的研究甚少。本试验利用戊四氮(pentylenetraz

4、01e，PTZ)诱导出慢性癫痫动物模型(chronicepilepticgroup，CEP)，通过脑电图(electroencephalogram，EEG)，Morris水迷宫试验(Morriswatermazet)、交替电刺激Y迷宫试验(alternativeelectro—stimulusYmazetest，AESYT)、逆转录多聚酶链反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction，RT—PCR)、免疫组织化学染色技术，观察GluRl在癫痫大鼠海马的表达变化，以探讨其与癫痫后大鼠认知功能改变的关系，为进一步研究癫痫患者记忆中

5、文摘要损害的机制提供线索。方法：1造模1．1分组成年雄性Sprague—Dawley(SD)大鼠50只，体重(200±20)g，经过两次交替电刺激Y迷宫试验筛选，合格者进行模型制备。筛选后获得合格动物48只，将实验动物随机分成两组：慢性癫痫发作组(CEP组)和对照组(NG组)。制模过程中大鼠出现死亡或不符合模型要求者，予以剔除并随机补充，以保证每组动物8只。1．2慢性癫痫动物模型的建立慢性癫痫发作组(CEP组)每日腹腔注射1％PTZ35mg／kg，直到大鼠连续3次注射期间均有RacinelV级或以上的痫性发作被认为完全点燃。对照组(NG组)同时腹腔注射同等容量的生理盐水。2

6、脑电图CEP组大鼠完全点燃后，每组随机取2。3只大鼠，麻醉后固定于脑立体定位仪上，放置双侧皮质和双侧海马电极，待大鼠清醒后，腹腔注射PTZ致大鼠有痫性发作，并描记脑电图，验证点燃效果。3认知功能检测造模成功后第31天，分组进行认知功能检测。分别进行交替电刺激Y迷宫试验和Morris水迷宫试验。4逆转录多聚酶链反应认知功能检测完毕后迅速分离海马。经提取海马总RNA、逆转录合成cDNA、引物扩增后，扩增产物在琼脂糖中文摘要凝胶上电泳，用UVP凝胶图像成像系统扫描定量并摄像电泳条带的灰度。凝胶图像分析系统分析结果。5免疫组织化学染色麻醉状态下经左心室行主动脉插管，4％多聚甲醛溶液

7、进行灌注，取脑固定，常规包埋，标本冠状位石蜡切片。经抗原修复、羊血清封闭后，分别加GluRl多克隆抗体，再经二抗、三抗孵育，DAB显色后置显微镜下观察记录。结果：1癫痫行为学各模型组大鼠均出现不同程度的痫性发作，造模成功。2脑电图改变CEP组大鼠阵发出现大量高幅尖波、棘波、棘慢复合波。NG组大鼠脑电图以a、B波，散在0波即基础波为主，无明显节律。3认知功能检测3．1Morris水迷宫试验3．1．1定位航行试验(Placenavigationtest，PNT)CEP组与NG组相比，第1天无明显差异(P>O．05)，第