高磷对大鼠血管平滑肌细胞胶原表达影响的研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签A-；名：记斗翩芬磊州／、厶学院领导盖章：≯I3年6月午日，河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究

2、成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。耽雌轹弛翩签章绳斗加“年厂月乒’日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文高磷对大鼠血管平滑肌细胞胶原表达影响的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7胃U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯”。7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24结{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29综述胶原蛋白的相关研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32致谓j⋯··⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯··41个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42中文摘要高磷对大鼠血管平滑肌细胞胶原表达影响的研究摘要目的：本研究通过B．甘油磷酸体外处理大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)，观察其对血管平滑肌细胞细胞胶原表达的诱导，进一步探讨高磷对大鼠血管平滑肌钙化的影响。以高磷为切入点，观察大鼠血管平滑肌细胞分化过程的动态变化特点并探讨其相关的分子机制，用不同的实验方法研究高磷刺激下血管平滑肌细胞各胶原的不同表达，从而为慢性肾脏病患者中心血管疾病高发病率原因的研究提供基础理论依据，帮助临床防治尿毒

5、症心血管事件的发生及新药的开发。方法：1选择SD雄性大鼠，无菌条件下取胸主动脉，原代培养血管平滑肌细胞2细胞鉴定2．1双目倒置相差显微镜直接观察细胞形态2．2用SABC法对传代的细胞进行A．平滑肌肌动蛋白免疫细胞化学染色3高磷刺激对平滑肌细胞增殖的影响观察以不同浓度的B一甘油磷酸(10mmol／LB一甘油磷酸、15mmol／LB一甘油磷酸、20mmol／LB一甘油磷酸)处理平滑肌细胞，MTT法测定细胞增殖，与空白对照组比较，观察高磷刺激对平滑肌细胞增殖的影响4高磷刺激对平滑肌细胞胶原表达的影响以B一甘油磷酸(

6、10mmol／L)处理平滑肌细胞，分别留取0、3、6、9天的细胞提取RNA，RT—PCR检测工，II，X型胶原mRNA的表达情况，并与空白对照组进行比较。结果：1血管平滑肌细胞培养1．1血管平滑肌细胞培养结果1．1．1细胞鉴定：双目倒置相差显微镜下，VSMCs为梭形细胞，呈典型的谷一峰状生长。1．1．2用SABC法对传代的细胞进行A一平滑肌肌动蛋白免疫细胞化学染色在高倍镜下可以见到胞核用苏木素复染后呈淡蓝色，卵圆形居中，胞质内有中文摘要大量棕色与细胞长轴平行的平滑肌肌动蛋白丝。1．2不同浓度高磷刺激平滑肌细胞

7、观察其增殖结果(MTT结果)MTT法检测血管平滑肌细胞增殖结果显示，10mmol／LB一甘油磷酸组细胞增殖情况(0．304+0．005)和15mmol／L6．甘油磷酸组细胞增殖情况(0．264+0．005)明显高于空白对照组(0．203+0．010)(P0．05)；10mmol／Lp一甘油磷酸组细胞增殖情况与15mmol／Lp一甘油磷酸组细胞增殖情况相比无统计学意义(P>O．05)。1．3高磷刺

8、激血管平滑肌细胞I型胶原的表达结果PCR电泳高磷组I型胶原表达3d(0．932-4-0．114)、6d(O．715+0．009)、9d(0．652+0．051)高于空白对照组(O．351+0．089)，4组之间比较差异有明显统计学意义(P