牛磺酸对心肌肥厚纤维化大鼠ⅰ、ⅲ型胶原mrna表达的影响

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1、浙江实用医学2010年10月第15卷第5期ZhejiangPracticalMedicineOctober，2010，v01．15，N0．5·345··基础研究·牛磺酸对心肌肥厚纤维化大鼠I、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响王侃严文华吕海涛(1．金华市中心医院，浙江金华321000；2．苏州大学附属儿童医院，江苏苏州321000)【摘要】目的研究牛磺酸对异丙肾上腺素引起的大鼠心肌肥厚纤维化的治疗作用。方法实验分3组，(异丙肾上腺素)Iso组予以皮下注射异丙肾上腺素0．5me／(kg·d)，连续l0天；牛磺酸组(Is0+Tau组)予以牛磺酸灌胃300mg／(kg·d)及异丙肾

2、上腺素皮下注射(同Iso组)；正常对照组皮下注射等量生理盐水。于实验第10、30天处死大鼠取材，测定心重系数、左心室质量指数，RT—PCR对I、Ⅲ型胶原mRNA进行半定量测定。结果d,~tl量异丙肾上腺素可致左心室重量增加，使得I、Ⅲ型胶原mRNA表达升高，而牛磺酸可以减少其表达，并降低心重系数和左心室指数。结论牛磺酸可以缓解异丙肾上腺素引起的大鼠心肌肥厚和纤维化。【关键词】心肌肥厚纤维化I型胶原Ⅲ型胶原mRNA牛磺酸牛磺酸(Taurine，T叫)是可兴奋组织中含量最丰1．3实验方法雄性SD大鼠36只，随机分为Iso富的游离氨基酸之一，是细胞自稳态的重要调节物组、Ta

3、u+Is0组及正常组各12只。Is0组采用异丙质，在多种心血管疾病的临床与实验研究中具有明肾上腺素0．5mg／(kg·d)，皮下注射10天；rrau+Is0显的细胞保护作用，其作用机制广泛，对肝、肾、肺组的异丙肾上腺素用法同前，并于实验第1天起给纤维化的治疗作用已有报道l1I2J，但对心肌纤维化予牛磺酸300mg／(kg·d)，灌胃；正常对照组给予等的治疗作用鲜有报道。作者按Benjamin等¨3J报道量生理盐水皮下注射。于实验第10、3O天分批各6的方法制备了心肌肥厚纤维化大鼠模型，以观察牛只大鼠，用4％水合氯醛麻醉大鼠，从胸骨正中线剪磺酸在抗大鼠心肌纤维化的作用。

4、开，迅速取出心脏，离断大血管，冷生理盐水冲洗，滤纸吸干，称重，计算心重系数及左室指数(LVMI)，1材料与方法取左心室游离壁小块，快速放入液氮冷冻保存，后1．1实验动物雄性sD大鼠36只，体质量180～移入一70~C冰箱存放，用以测定左室心肌工和Ⅲ型200g，由苏州大学实验动物中心提供。胶原mRNA的表达。1．2药物与主要试剂牛磺酸纯度99．99％，由浙1．4指标检测江康恩贝制药公司提供。异丙肾上腺素(Isopre—1．4．1重量系数测定(1)心脏质量／体质量比；naline，Iso)购自上海禾丰制药有限公司[批号：沪卫(2)左室质量指数(1eftventricula

5、rlllassindex，LVMI)=药准字(1995)第010025号]。主要试剂：RT—PCRLVM(rag)／体质量(g)：左室重量(LVM)以左室与室试剂盒、引物及相关试剂由GIBCO／BRL公司合成及间隔的质量总和(用上海天平仪器厂制造的微量天提供。I型胶原上游引物序列：5一TGCCGTGACCT—平称取)；(3)左右心室比=左心室质量／右心室CAAGATGTG一3；下游引物序列：5一CACAAGCGT质量。GCTGTAGGTGA一3；扩增产物为462bp。I11型胶1．4．2I、Ⅲ型胶原mRNA测定采用半定量RT原上游引物序列：5一AGATCATGTCTF

6、CACTCAAGTC一3；下游引物序列：5一TrTACATYGCCA—PCR法_4J进行工、Ⅲ型胶原mRNA测定：心肌组TFGGCCTGA一3；扩增产物为480bp。J3一actin上织匀浆后，以酚一氯仿一步法提取总RNA。取2g游引物序列：5一AGGCCGCCTTCGCGGGCGAC一3；RNA进行逆转反应，分别取RT产物5止进行l、Ⅲ下游引物序列：5一CTCGGGAGCCACACGCAG型胶原的PCR扩增(PCR反应条件为：94cc5分钟，CTC一3；扩增产物为265bp。94℃30秒，60℃30秒，721分钟，30次循环，72~C·346·浙江实用医学2010年

7、lO月第15卷第5期ZhejiangPracticalMedicineOctober，2010，Vo1．15，No．5延伸7分钟)。取PCR产物1．5，经2％琼脂糖凝Is0组和Is0+Tau组的LVMI和心脏／体质量、左右胶电泳，电压降4V，电流20mA，电泳0．5小时。凝心室比均显著高于正常对照组(均P<0．01)，Iso组胶在紫外透射分析仪下观察结果，以I3一actin为内以上三个指标显著高于Iso+Tau组(P<0．01)。在参照进行半定量分析。实验第3O天时，各组大鼠体重均有显著增加(组内1．5统计学处理应用SPSS11．0软件进行统计学P<