干扰素γ对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122302HebeiMedicalUniversity硕士学位论文科学学位干扰素Y对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响研究研究生：钱玥彤导师：徐金升教授专业：内科学二级学院：第四医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责

2、任研究生签名导师>士年、月4日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。2月彳曰目录中文摘要………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………4英文缩写………………………………………………………………………8研究论文干扰素γ对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响研究前言…………………………………………………….………….…..10材料与方法…………

3、…………………………………………………11结果……………………………………………………………………20附图……………………………………………………………………23附表……………………………………………………………………28讨论……………………………………………………………………29结论……………………………………………………………………30参考文献………………………………………………………………31综述慢性肾脏病患者血管钙化与干扰素γ关系的探讨……………….33致谢………………………………………………………………………38个人简历……………………………………………………………………39中文摘

4、要干扰素γ对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响研究摘要目的：慢性肾脏病（Chronickidneydisease,CKD）患者心血管疾病（Cardiovasculardisease,CVD）发病率及死亡率较普通人群明显升高，其主要原因可能是CVD构成了慢性肾脏病患者死亡的主要危险因素，约占总其死亡率的50%以上，更有研究表明，心血管事件中，冠状动脉钙化约占20%。而与传统的冠脉钙化不同，CKD患者的血管钙化主要发生在中膜，主要由血管平滑肌构成，目前已有大量研究表明，随着CKD患者肾功能丧失，对磷清除减少，进而血清磷升高，促进了CKD血管钙化，血清磷是促进CKD患者血管钙化的独立危险因素。大

5、量基础研究表明，高磷环境促进了血管平滑肌细胞（Vascularsmoothmusclecells,VSMCs）表型向成骨/成软骨样转化、促使核心结合因子α1（Cbfα1）、骨形成蛋白BMP-2表达上调而诱导钙化，高磷诱导VSMCs表型转化是血管钙化发生的中心环节，同时还涉及凋亡等其他多种因素，其具体机制目前仍未明确。而目前现实中对血管钙化的预防与治疗方面尚无行之有效的方法及措施。研究显示干扰素γ对成骨细胞和破骨细胞的生成有一定的调节作用，而VSMCs发生表型转化的过程恰恰与此过程相似。本研究旨在研究高磷诱导血管钙化的基础上增加干扰素γ，观察干扰素γ能否抑制或减轻血管钙化程度。方法：1采取大鼠

6、主动脉组织块贴壁法原代培养并获取VSMCs，并应用形态学及细胞免疫学的方法对VSMCs进行鉴定。2实验分组及干预处理：将VSMCs应用随机分组方法分为阴性对照组、高磷组及干扰素γ干预组，阴性对照组采用低糖的DMEM加10%胎牛血清作为正常培养基进行培养，高磷组是在正常培养基的基础上加入浓度为10mmol/Lβ-甘油磷酸配制成的高磷培养基培养，干扰素γ干预组在上述高磷培养基的基础上加入干扰素γ，使干扰素γ的最终浓度为100u/mL，各组共刺激VSMCs共3d。3钙化检测：各组VSMCs培养14d后分别用茜素红（Alizarinred1中文摘要stain）钙化染色和比色法测定细胞的钙含量。4碱性

7、磷酸酶（ALP）活性测定：取3~4代细胞接种于6孔板，细胞5密度大约为2×10/孔，干预时间为7d，弃去培养基，PBS液洗涤细胞2-3次，每孔加入500μL0.1％TritonX～100置于4℃环境中约12～24h，然后反复吹打裂解细胞，并置于离心管中离心，应用化学发光法检测ALP的活性。5采用RT-PCR方法研究高磷、干扰素γ干预组对VSMCs中Cbfα1、BMP-2、Smad1、Smad7mRNA水平表达