罗格列酮对angⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞ctgf表达影响

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1、罗格列酮对AngⅡ诱导大鼠血管平滑肌细胞CTGF表达影响(西安交通大学医学院第二附属医院心内科陕西西安710004)��【摘要】目的：探讨体外条件下罗格列酮(Rosiglitazone)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(RASMC)增殖及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法：原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞，静息48h后，分为对照组（Controlgroup）、AngⅡ刺激组（AngⅡgroup）、AngⅡ＋Rosiglitazone组（AngⅡ＋ROS）。MTT法检测细胞增殖情况。实时荧光定量RT-PCR方法检测CTGFmRNA表达；免疫细胞化学法检测CTGF的

2、蛋白表达。结果：(1)RASMC细胞低水平表达CTGFmRNA和蛋白,AngⅡ刺激可增加RASMC细胞CTGFmRNA和蛋白表达；(2)罗格列酮呈剂量依赖性抑制AngⅡ诱导的RASMC细胞CTGFmRNA和蛋白的表达。结论：在体外，罗格列酮可通过激活RASMC细胞PPARγ抑制AngⅡ诱导的RASMC增殖及CTGF转录和表达。�【关键词】过氧化物酶体增殖物激活受体血管紧张素结缔组织生长因子平滑肌细胞罗格列酮�【中图分类号】R5436【文献标识码】A【文章编号】1044-5511(2011)09-0192-02��大量研究证实心血管系统重构在高血压、动脉粥样硬化、经皮冠状动脉腔内成形术后

3、在狭窄等心血管疾病的发生发展中起重要作用，而血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞的增殖和表型的变化是导致血管重塑的主要病理基础。CTGF是一种新发现的促增生、促细胞外机制合成（致纤维化因子）。研究表明，AngⅡ－CTGF途径在血管重构中起重要作用。�过氧化物酶体增殖物激活受体gamma（peroxisomeprolixferator-activitedreceptorgamma，PPAR-gamma）属II型核受体超家族成员，被配体激活后作用于特异的DNA反应元件（peroxisomeproliferatorresponsiveelement，PPRE

4、）调控多种基因转录。研究表明，血管平滑肌组织中存在PPARgamma表达，PPAR-gamma激动剂Rosiglitazone及Pioglitazone具有抗血管平滑肌细胞增殖等作用，但其具体机制不明。国外学者报道，PPAR-gamma激动剂可抑制TGFβ诱导的CTGF表达，考虑到AngⅡ在调节CTGF表达中，与TGFβ存在不同途径，本研究旨在研究PPAR-gamma是否可抑制AngⅡ诱导的CTGF表达及意义。�1材料与方法：�1.1主要试剂及仪器� 6DMEM/F12培养基及胎牛血清（GIBCO），6孔板和25cm2细胞培养瓶（NUNC），BCA蛋白定量试剂盒（PIERCE），TRI

5、zolreagent（Invitogen），SuperScriptTMⅢPlatinum?两步法RT-qPCR试剂盒,兔抗大鼠CTGF抗体（abcam）,兔抗大鼠ColⅢ抗体（santacruz），生物素标记山羊抗兔IgG（PIERCE），BCA蛋白定量试剂盒（pierce），SupersignalTMWESTPico化学发光试剂盒（PIERCE），AngiotensinⅡ(Sigma),GW9662（Sigma），BADGE（Sigma），pioglitazone（Cayman）,15d-PGJ2(sigma)，ABIPRISM7000实时定量PCR仪(ABI)，高通量多功能微板测试

6、系统（BMG）。�1.2方法�1.2.1大鼠主动脉平滑肌细胞的原代培养及传代�参见文献[5]。颈椎拉脱处死大鼠后，无菌条件下开胸取胸主动脉，长约1.5cm，仔细剥离血管周围结缔组织，分离外膜，刮除血管内皮组织，剪成0.5cm×0.5cm的小块，D-Hank’s液冲洗，平贴于一次性培养瓶中，缓慢加入含10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的F12/DMEM培养基，置5％CO2、37℃孵箱培养，待细胞长至单层后0.25%胰酶消化传代（3～7代）。实验用细胞在生长至亚融合状态时，以含0.4%血清的DMEM培养48ｈ，使其同步化。� 61.2.2细胞预处理�药物干预细胞分为

7、4组，即对照组（Control）；AngⅡ刺激组（AngⅡ）（10-7mol/Ｌ的AngⅡ刺激24h）；Rosiglitazone预处理组（AngⅡ＋Ros），即罗格列酮(10-5，5×10-6，10-6mol/L)预孵育2ｈ后，加入10-7mol/Ｌ的AngⅡ继续培养24ｈ；阳性对照组，即Pioglitazone（50μmol/L）、15d-PGJ2(5μmol/L)预处理2h后，加入10-7mol/Ｌ的AngⅡ继续培养24ｈ；PPAR-ga