尿毒症患者血清对血管平滑肌细胞钙化及ⅰ型胶原表达的影响

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1、学位论文使用授权及知识产权归■承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专研究生签河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立拯研究生签名：斗蟛絮导师签奄彳

2、为}号年目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文尿毒症患者血清对血管平滑肌细胞钙化及I型胶原表达的影响一前言⋯⋯⋯⋯．‰⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8一月O舌⋯⋯⋯⋯．言。．⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8材料与方法⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24附表⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36综述慢性肾脏病患者血管钙化与I型胶原关系的探讨⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48中文摘要尿毒症患者血清对血管平滑肌细胞钙化及I型胶原表达的影响摘要目的：心血管疾病(cardiovasculard

4、isease，CVD)是慢性肾脏病(cllfomckidneydisease，CKD)病人死亡的首要原因，占尿毒症患者死亡率的50％以上。研究表明，血管钙化及其进展又是CVD发生的独立危险因素。近年来研究显示，CKD患者主要表现为中膜钙化，是一个由细胞介导的主动的、高度可调的程序化过程，类似于骨和软骨形成过程中的骨化，而血管中膜以平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells，VSMCs)为主，其发生类成骨／成软骨样表型转化，其中关键的转录因子(如核心结合因子core．bmdmgfactorsubunitalpha-

5、1，Cbfal／Rtmx2)表达增高，进而分泌一些胶原如I型胶原(typeIcollagen，ColI)和非胶原蛋白，在血管钙化中起着极为重要的作用。本研究旨在通过尿毒症患者血清模拟体内尿毒症环境，不同浓度对VSMCs进行干预，观察VSMCs钙化及I型胶原表达情况，进而探讨尿毒症血清对VSMCs钙化的影响，分析I型胶原在此过程中的作用机制，进一步探讨I型胶原在尿毒症血管中膜钙化中的作用及机制。方法：1血清制备：选取自2010年6月至2011年7月于河北医科大学第四医院血液净化中心行维持性血液透析患者12例及正常健康志愿者10例，透析

6、前清晨空腹采静脉血4“离心后(1800rpmX15min)，收集上清置于1．5ml的Eppendof管中，56℃灭活，O．22lam的滤膜过滤除茵，-80"12冷冻保存备用。2应用贴壁法进行血管平滑肌细胞原代培养，构建VSMCs细胞系，并应用形态学及免疫细胞化学方法对其进行鉴定。3实验分组及处理：VSMCs随机分为阴性对照组、健康人血清组及尿毒症血清组，阴性对照组采用含10％牛清的高磷(10mmol／Lt3一甘油磷酸)培养基培养，在此基础上分别给予不同浓度健康人血清及尿毒症患者血清进行干预，根据血清浓度，后两组各设5％、10％、15

7、％(低、中、高)三个亚组，共干预6d，进行钙化测定及Cbfal和ColI检测。中文摘要4运用茜素红(Alizarinredstain)及VonKossa染色方法对VSMCs进行钙化染色；应用邻甲酚酞络合酮比色法测定细胞钙含量。5分别运用RT-PCR及Western．Blot方法研究不同浓度尿毒症患者血清对VSMCs中CbfalmRNA及I型胶原mRNA和蛋白水平表达的影响。6统计学方法：用SPSSl3．0统计学软件对所有数据进行统计学处理，实验结果用均数±标准差(i±s)表示，两组间均数比较用f检验，多组间均数比较采用单因素方差分析

8、(ANOVA)，用S-N．K检验(Student-Newman．Keuls，SNK)作多组间均数两两比较；相关分析符合双变量正态分布作Pearson积差相关分析，不符合双变量正态分布作Spearman秩相关分析。P<0．05为差异有统