灵芝三萜提取及其对α-鹅膏毒肽所致肝损伤保护作用的研究

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1、摘要灵芝是著名的高等药用真菌，在亚洲主要分布于中国、朝鲜半岛、日本等地，早在两千多年前灵芝就被我国人民所熟悉并采集使用。研究表明，灵芝三萜是灵芝中主要活性成分之一。近年来有不少文献报道，灵芝三萜类化合物具有很强的药理活性，如具有保肝、抗肿瘤、抑制组胺释放等作用。而且目前临床上已经利用灵芝作为一种主要的鹅膏中毒的治疗方法，但对其机理尚缺乏研究。本实验用提取出来的灵芝三萜来治疗Q．鹅膏毒肽中毒的小鼠，从自由基和抗氧化活性方面来探讨灵芝解毒的机理。将灵芝子实体粉碎后，先经95％乙醇回流提取，再用氯仿萃取，即得到中性提取物，然后经碱提酸化处

2、理，再用氯仿萃取后，即得到酸性提取物，经薄层层析，硅胶柱层析及高效液相色谱分析等手段获得较纯的灵芝三萜。对灵芝分离纯化各个阶段得到的组分及灵芝三萜进行药理实验，通过设立小鼠鹅膏毒肽中毒组、中毒后灵芝活性成分灌胃组、生理盐水对照组做比较，然后测定处理前后血清中丙氨酸转移酶ALT、天冬氨酸转移酶AST，以及肝脏组织中的超氧化物歧化酶SOD、过氧化氢酶CAT、丙二醛MDA，结果表明分离出的各个组分，尤其是灵芝三萜，对由鹅膏肽类毒素所致肝损伤有保护作用。在用Q．鹅膏毒肽处理小白鼠后，其ALT、AST、MDA都相对正常对照组，有明显的升高，而

3、当用灵芝各组分灌胃后，ALT、AST、IMDA均又有所降低，尤其是灵芝三萜高剂量(Fr．LZA高剂量)灌胃组(200mg／kg)，最接近正常对照组，其次是灵芝水提液灌胃组(Fr．W灌胃组)、灵芝醇提液灌胃组(F．r．E灌胃组)。在用121．鹅膏毒肽处理小白鼠后，其SOD、CAT都相对正常对照组，有明显的降低，而当用灵芝各组分灌胃后，均又有所升高，尤其是灵芝三萜高剂量灌胃组(Fr．弘～高剂量)灌胃组(200mg／kg)，最接近正常对照组，其次是灵芝水提液灌胃组(Fr．W灌胃组)、灵芝醇提液灌胃组(Fr．E灌胃组)。说明灵芝三萜对由鹅膏

4、肽类毒素所致小鼠的这些酶活性的降低，有明显的修复作用。因此，灵芝三萜对鹅膏毒肽所致肝损伤有一定的保护作用。通过观察比较正常对照组，Q．鹅膏毒肽中毒组，中毒后灵芝三萜灌胃组的各小鼠肝细胞超微结构，结果表明，Q．鹅膏毒肽中毒组与正常对照组比较有显著性差异，大的空泡化显而易见，细胞器受到严重破坏。而灵芝三萜的干预则明显减轻了其破坏程度，而且可见肝细胞再生现象，肝细胞超微结构接近正常对照组图。说明灵芝三萜能修复由鹅膏毒肽中毒后小鼠肝细胞超微结构的破坏。因此，灵芝三萜对鹅膏毒肽所致肝损伤有一定的保护作用。关键词：灵芝，灵芝三萜，分离纯化，Q．

5、鹅膏毒肽，肝损伤ⅡABSTRACTGanodermaLucidumisaveryfamousmedicinalfungusinAsia，mainlydistributinginChina，Korea，JapanandSOon，aswellashasbeenknownbyChineseforover2000year．Asitwasshowedintheresearch，triterpenoidsisoneofthechieflyimportantbioactiveconstituentsofGanodermaLucidums，rece

6、ntlyreportedtoelaboratevariouspharmaceuticaleffectsincludinghepatoprotectiveactivity，antitumorandinhibitingthereleaseofanti-histaminesetcetera．Howevermostinvestigationsoftriterpenoidsworldwidehaveconcentratedmainlyonisolationandpurification,astheresultofit，thetoxiceffe

7、ctsoffractionsobtainedateverystepofisolationandpurificationhavenotbeenascertained．Intheinvestigation．G．1ucidumfruitbodieswereextractedwim95％(v／v)ethanolboilinginanimmersionheaterafterbeingpulverized．Theethanolicextractswereconcentratedtodryness，redissovedinhotwaterande

8、xtractedwithchlorofolTn．ThechloroformlayerwasextractedwithsaturatedNaHC03solutionandtheextractwasacidifledtOpH2_3谢th6