灵芝三萜的提取及其对α-鹅膏毒肽所致肝损伤的保护作用研究.pdf

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1、学校代码lQ5垒2密级学号2QQ墨!垒Q2QQ窆垒灵芝三萜的提取及其对Q．鹅膏毒肽所致肝损伤的保护作用研究ExtractionofTriterpenoidsfromGanodermaLucidumandit’SProtectiveEffectonQ—amanitininducedLiverInjury研究生姓名周鏊指导教师姓名、职称堕笠红塾撞学科专业垫堑鲎研究方向廛周真菌湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一一年四月摘要灵芝是著名的高等药用真菌，在亚洲主要分布于中国、朝鲜半岛、日本等地，早在两千多年前

2、灵芝就被我国人民所熟悉并采集使用。研究表明，灵芝三萜是灵芝中主要活性成分之一。近年来有不少文献报道，灵芝三萜类化合物具有很强的药理活性，如具有保肝、抗肿瘤、抑制组胺释放等作用。而且目前临床上已经利用灵芝作为一种主要的鹅膏中毒的治疗方法，但对其机理尚缺乏研究。本实验用提取出来的灵芝三萜来治疗Q．鹅膏毒肽中毒的小鼠，从自由基和抗氧化活性方面来探讨灵芝解毒的机理。将灵芝子实体粉碎后，先经95％乙醇回流提取，再用氯仿萃取，即得到中性提取物，然后经碱提酸化处理，再用氯仿萃取后，即得到酸性提取物，经薄层层析，硅胶

3、柱层析及高效液相色谱分析等手段获得较纯的灵芝三萜。对灵芝分离纯化各个阶段得到的组分及灵芝三萜进行药理实验，通过设立小鼠鹅膏毒肽中毒组、中毒后灵芝活性成分灌胃组、生理盐水对照组做比较，然后测定处理前后血清中丙氨酸转移酶ALT、天冬氨酸转移酶AST，以及肝脏组织中的超氧化物歧化酶SOD、过氧化氢酶CAT、丙二醛MDA，结果表明分离出的各个组分，尤其是灵芝三萜，对由鹅膏肽类毒素所致肝损伤有保护作用。在用Q．鹅膏毒肽处理小白鼠后，其ALT、AST、MDA都相对正常对照组，有明显的升高，而当用灵芝各组分灌胃后，

4、ALT、AST、IMDA均又有所降低，尤其是灵芝三萜高剂量(Fr．LZA高剂量)灌胃组(200mg／kg)，最接近正常对照组，其次是灵芝水提液灌胃组(Fr．W灌胃组)、灵芝醇提液灌胃组(F．r．E灌胃组)。在用121．鹅膏毒肽处理小白鼠后，其SOD、CAT都相对正常对照组，有明显的降低，而当用灵芝各组分灌胃后，均又有所升高，尤其是灵芝三萜高剂量灌胃组(Fr．弘～高剂量)灌胃组(200mg／kg)，最接近正常对照组，其次是灵芝水提液灌胃组(Fr．W灌胃组)、灵芝醇提液灌胃组(Fr．E灌胃组)。说明灵芝三

5、萜对由鹅膏肽类毒素所致小鼠的这些酶活性的降低，有明显的修复作用。因此，灵芝三萜对鹅膏毒肽所致肝损伤有一定的保护作用。通过观察比较正常对照组，Q．鹅膏毒肽中毒组，中毒后灵芝三萜灌胃组的各小鼠肝细胞超微结构，结果表明，Q．鹅膏毒肽中毒组与正常对照组比较有显著性差异，大的空泡化显而易见，细胞器受到严重破坏。而灵芝三萜的干预则明显减轻了其破坏程度，而且可见肝细胞再生现象，肝细胞超微结构接近正常对照组图。说明灵芝三萜能修复由鹅膏毒肽中毒后小鼠肝细胞超微结构的破坏。因此，灵芝三萜对鹅膏毒肽所致肝损伤有一定的保护作

6、用。关键词：灵芝，灵芝三萜，分离纯化，Q．鹅膏毒肽，肝损伤ⅡABSTRACTGanodermaLucidumisaveryfamousmedicinalfungusinAsia，mainlydistributinginChina，Korea，JapanandSOon，aswellashasbeenknownbyChineseforover2000year．Asitwasshowedintheresearch，triterpenoidsisoneofthechieflyimportantbioactiv

7、econstituentsofGanodermaLucidums，recentlyreportedtoelaboratevariouspharmaceuticaleffectsincludinghepatoprotectiveactivity，antitumorandinhibitingthereleaseofanti-histaminesetcetera．Howevermostinvestigationsoftriterpenoidsworldwidehaveconcentratedmainlyon

8、isolationandpurification,astheresultofit，thetoxiceffectsoffractionsobtainedateverystepofisolationandpurificationhavenotbeenascertained．Intheinvestigation．G．1ucidumfruitbodieswereextractedwim95％(v／v)ethanolboilinginanimmersionheat