苦菊提取物对肝损伤的保护作用及其安全性致突变作用的研究.pdf

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1、iJ壁Fu婆jianMe兰d堂Un匿iv2014F⋯ebr⋯uary，⋯v。14⋯8N⋯。7苦菊提取物对肝损伤的保护作用及其安全性致突变作用的研究陈超杰，史蕤。，展丽娟。，魏金锋，靳洪涛，秦海林，王爱平。摘要：目的考察苦菊提取物对肝损伤的影响及其致突变作用。方法通过噻唑蓝(MTT)法和2，7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFH—DA)荧光染色，检测苦菊提取物对2，2’。偶氮一双一(2-脒基丙烷)氯化二氢(AAPH)致HepG2细胞损伤的存活率以及胞内活性氧(ROS)水平的影响；建立四氯化碳(CC1)致小鼠肝急

2、性损伤模型，以观察苦菊提取物对急性肝损伤小鼠的肝组织病理变化和血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平的影响；以鼠伤寒沙门氏菌回复突变(Ames)试验检测苦菊提取物的致突变作用。结果AAPH处理HepG2细胞后，细胞存活率下降，胞内ROS水平上升，而加入不同浓度的苦菊提取物则可明显改善上述结果；苦菊提取物能改善CC1致小鼠肝急性损伤的肝细胞坏死和炎症病变，并可降低血清中ALT和AST水平，呈剂量依赖趋势，提示苦菊提取物具有肝保护的作用；苦菊提取物对鼠伤寒沙门氏菌株无致基因突变作用。

3、结论苦菊提取物具有良好的肝保护作用，并初步判断其毒性不明显，且无致突变作用。关键词：菊花；植物提取物；肝；乙酸盐类；细胞，培养的；疾病模型，动物中图分类号：R282．71；R285；R329．2；R575文献标志码：A文章编号：1672—4194(2014)01-0007-07苦菊又名栽培菊苣、苦苣。研究认为，苦菊含有如下：苦菊干燥全草5．8kg经95乙醇回流提取抗氧化活性的营养成分，因此它一直被认为是一种3次(8OL×2h、70L×1h、68LX1h)，过滤合并健康食品口]。本实验室的前期工作发现，苦菊提

4、取滤液，减压浓缩所得浸膏混悬于7O乙醇溶液中。物不仅具有清除自由基和抗氧化的作用，并且对叔混悬液继续经石油醚萃取4次(2，1．5，1．5，1．5L)，丁基过氧化氢(tert—butylhydroperoxide，t-BHP)所得到的乙醇层经减压浓缩至无醇味，加水混悬约所致的肝损伤具有保护作用，其作用机制可能与抗并经乙酸乙酯萃取3次(1．5，1．2，1．2L)，萃取后氧化作用有关_2。]。本研究拟通过不同的促自由基所得的水层约2．2L，过大孔吸附树脂，其中6O乙生成剂观察苦菊提取物在细胞和动物水平对肝损伤醇部

5、分浓缩后挥干得到重约40g的棕色粉状颗粒，的作用，进一步确证其肝保护的功效；通过鼠伤寒沙即为苦菊提取物，苦菊提取物的化学成分分析参考门氏菌回复突变(Ames)试验检测苦菊提取物的致文献F-3]。用于体外实验时，每次称取适当样品用不突变作用。含血清的培养液稀释成所需浓度，0．22Fm滤膜过滤后使用；用于体内试验时，称取适当样品用生理盐1材料与方法水配至所需浓度后使用。1．1材料1．1．2试剂2，2偶氮一双一(2-脒基丙烷)氯化二1．1．1提取物制备苦菊购自北京新发地蔬菜批氢(AAPH)、噻唑蓝(MTT)、2，

6、7一二氯二氢荧光素发中心，经鉴定为菊科菊苣属植物苦菊。配备过程乙酰乙酸(DCFH—DA)、4-硝基喹啉氮氧化物(4一NQO)、叠氮钠(NaN。)为美国Sigma—Aldrich公收稿日期：2Ol3—11—19司；丝裂霉素C(MMC，瑞士Roche公司)；2-氨基芴基金项目：“重大新药创制”科技重大专项课题(2013ZX09302302)，国家自然基金青年科学基金项目(81302756)，福建省自(2一AF，德国Merck公司)；环磷酰胺(CP，美国Alfa然科学基金青年科技人才创新项目(2o13JO5118

7、)，福建公司)；联苯双酯(批号：09020209，北京协和药厂)；医科大学博士启动基金(201lbsO03)作者单位：1．福建医科大学福建省新药安全性评价中心，福州丙氨酸氨基转移酶测试盒(ALT，南京建成生物工350108；程研究所)，天冬氨酸氨基转移酶试剂盒(AST，南2．中国医学科学院／北京协和医学院新药安全评价研究中心，北京l00050；京建成生物工程研究所)。其他化学试剂皆为国产3．中国医学科学院／北京协和医学院，国家心血管病中心，阜外心血管病医院，中国牛津国际医学研究中心分析纯。心血管疾病国家重点

8、实验室，北京100037；1．1．3动物健康雄性ICR小鼠48只，体质量4．北京协和建昊医药技术开发有限责任公司，北京1OO176：18～20g，清洁级[北京华阜康生物科技股份有限公5．中国医学科学院／北京协和医学院药物研究所，中草司，许可证号：SCXK(京)2009—0007]。健康雄性药物质基础与资源利用教育部重点实验室，北京100050Wistar大鼠180～220g，清洁级[北京华阜康生物作者简介：陈超杰