灵芝三萜单体化合物对鹅膏毒肽中毒小鼠的治疗作用及其机理研究

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1、硕士学位论文灵芝三萜单体化合物对鹅膏毒肽中毒小鼠的治疗作用及其机理研究学科专业植物学学位类型□√科学学位□专业学位研究生姓名吴慧慧导师姓名、职称陈作红教授论文编号湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年六月湖南师范大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所塞交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中泛经注明引用的巧容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作轟成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中从明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位

2、论文作者签杂：年月日《ｇ湖南师范大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者宪全了解学校有关保留、使巧学位论文的规定，研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属湖南师范大学。同意学校保留并向留家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权湖商师范大学可＾义将本学位论文的全部或部分巧容编入有关数据库进行检索，可＾义采用影印、缩印歲扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。作者签名：泉忿扫期谷年食月《曰导师签准曰期钟ｒ年去月《曰作户分类号密级学校代码10542学号灵芝三萜单体化

3、合物对鹅膏毒肽中毒小鼠的治疗作用及其机理研究TreatmentEffectsandMechanismsofActionofTriterpenoidsMonomerfromGanodermalucidumonα-Amanitin-InducedLiverInjuryinMice研究生姓名吴慧慧指导教师姓名、职称陈作红教授学科专业植物学研究方向应用真菌学湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年六月摘要我国的食物中毒死亡事件主要是由毒蘑菇中毒引起的。作为有效的解毒剂，灵芝煎剂已在临床上用于治疗鹅膏菌引起的中毒。作为灵芝的主要药效成分之一，

4、灵芝三萜被证实具有多种药理作用。本文探讨了5种灵芝三萜单体化合物、灵芝总三萜（GLTT）和对照药物水飞蓟宾对α-鹅膏毒肽(α-AMA)中毒小鼠的治疗作用及其机理，获得了以下结果：1.灵芝总三萜的提取、分离纯化：以灵芝子实体粉末：无水乙醇=1:20的比例，80℃水浴浸提4个小时，重复该过程3次，得粗提液，浓缩后得浸膏，经大孔吸附树脂（AB-8）吸附后梯度洗脱（首先用水洗，待流出液无色后，70%、90%乙醇梯度洗脱），收集洗脱液浓缩后冻干，得粗提物，萃取后，以不同比例（98:2、96:4、94:6、92:8、90:10）的氯仿、甲醇为洗脱

5、剂过硅胶柱继续分离纯化，收集氯仿：甲醇=98：2组分，浓缩，冷冻干燥后得到纯度98%左右的灵芝总三萜(GLTT)，经HPLC分析表明至少含有18种以上的灵芝三萜单体化合物，其中含有灵芝酸A、B、G和灵芝烯酸B。2.灵芝三萜单体化合物及灵芝总三萜的体外抗氧化活性：分别采用DPPH自由基清除活性的测定、铁离子螯合能力测定、还原力测定3种方法检测了5种灵芝酸和灵芝总三萜的抗氧化活性，结果表明各物质均具有较强的抗氧化能力，其中灵芝酸C2的抗氧化能力最强，I灵芝酸A的抗氧化能力最弱。3.灵芝三萜单体对α-鹅膏毒肽中毒小鼠的治疗作用：与正常组相比

6、，中毒小鼠血清中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性显著升高，引起严重肝损伤。经灵芝三萜单体、灵芝总三萜和水飞蓟宾治疗后，ALT、AST的活性显著性降低，表明5种灵芝三萜单体化合物和灵芝总三萜具有水飞蓟一样的治疗效果；不同剂量（5-40mg/kg/day）的灵芝酸C2均能明显的降低中毒小鼠的血清ALT、AST活性，并且具有剂量正相关性，剂量为20mg/kg/day时治疗效果最显著；灵芝总三萜、灵芝三萜单体和水飞蓟宾治疗后能降低致死剂量下中毒小鼠死亡率20-40%。4.灵芝三萜单体对α-鹅膏毒肽中毒小鼠抗氧化活

7、性的影响：α-鹅膏毒肽中毒处理后，小鼠肝脏匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）以及过氧化氢酶（CAT）的活性明显降低，而丙二醛（MDA）的含量显著的升高。灵芝三萜单体、灵芝总三萜和水飞蓟宾治疗后，能显著的增加中毒小鼠的SOD和CAT酶活性，并显著降低MDA的含量。不同剂量（5-40mg/kg/day）的灵芝酸C2均能大大增加中毒小鼠肝组织内的SOD和CAT酶活性，并显著降低MDA的含量，并且具有剂量正相关性，剂量为20mg/kg/day时效果最显著；这些结果表明灵芝三萜具有治疗作用的机理之一是其具有抗氧化活性，能清除氧自由基，减少脂质的过氧

8、化。5.灵芝三萜单体对α-鹅膏毒肽中毒小鼠细胞凋亡的影响：α-鹅膏毒肽中毒小鼠的肝组织的DNA琼脂糖凝胶电泳结果可以观察到明显II的DNA梯形带，而不同剂量（5，10，20，40mg/kg/day）灵芝酸C2给药组没有出