寻常型银屑病角质形成细胞及hacat细胞株糖酵解的初步研究

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1、中图分类号盟§昼：鱼圣UDC610博士学位论文学校代码!Q§圣3密级公珏寻常型银屑病角质形成细胞及HaCaT细胞株糖酵解的初步研究ApreliminarystudyonglycolysisinkeratinocytesofpsoriasisvulgarisandHaCaTcellline作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：唐雯临床医学八年制皮肤与性病学科湘雅医院陈翔教授粟娟老师论文答辩日期兰!=!堡三望岁日答辩委员会主席中南大学二O一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作

2、及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：厚宴I日期：竺生年三月竺日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将

3、本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：丝导师签日期：生年立月兰日衷心感谢以下基金资助国家杰出青年科学基金项目号：81225013国家自然科学基金面上项目项目号：81071290资助人：陈翔国家青年科学基金项目项目号：81101193湖南省自然科学基金项目号：11JJ5083资助人：粟娟国家自然科学基金面上项目项目号：81271763资助人：刘双八年制博士学位论文中文摘要寻常型银屑病角质形成细胞及HaCaT细胞株糖酵解的初步研究摘要目的：寻常型银屑病是一种慢性炎症性皮肤病，具有表皮增殖过度、角

4、化不全、真皮浅层毛细血管扩张及淋巴细胞浸润等特征，其表皮与恶性肿瘤存在细胞过度增殖和局域性缺氧等共同特点。缺氧诱导因子．10【(Hypoxia．induciblefactor-la，HIF．10t)在肿瘤中能激活大部分糖酵解相关酶从而促使细胞代谢主要朝糖酵解方向进行。我们的前期研究发现CDl47分子在银屑病患者皮损区及外周血细胞中高表达，并且是银屑病的易感基因之一，我们还发现CDl47在恶性黑素瘤糖酵解过程中发挥重要作用，同时也能在HIF．1仪的调节下介导肿瘤的侵袭转移。本文旨在探讨在寻常型银屑病和人类永生化角质形成细胞HaCaY细胞株中，

5、HIF．1仅、CDl47及糖酵解相关蛋白可能发挥的作用及相互关系，为进一步揭示银屑病的发病机制提供新的理论依据。方法：1、免疫组化法分析HIF—lot、CDl47、葡萄糖转运体l(GlucoseTransporter1，GLUTl)、糖酵解关键酶己糖激酶(Hexokinase2，HK2)、丙酮酸激酶(脚atekinase2，PKM2)在寻常型银屑病皮损区及正常人表皮中的表达及分布，并行相关性分析；2、构建小分子干扰片段RNA(SmallinterferingRNA，siRNA)并在HaCaT细胞中干扰HIF．1Ⅸ蛋白表达，WesternBl

6、ot检测HIF．1Ⅸ、CDl47、GLUTl、HK2、PKM2蛋白表达的变化：3、CoCh诱导HaCaT细胞化学缺氧，WesternBlot检测HIF．1仪、CDl47、GLUTl、HK2、PKM2蛋白表达的变化；4、免疫荧光共聚焦法检测CDl47和GLUTl蛋白在银屑病皮损表皮中表达的共定位；5、siRNA干扰／过表达HaCaT细胞中CDl47蛋白，WesternBlot检测CDl47、GLUTl蛋白表达的变化；6、siRNA干扰／过表达HaCaT细胞中GLUTl蛋白，WesternBlot检测GLUTl、CDl47蛋白表达的变化。III

7、八年制博士学位论文中文摘要结果：1、mF—lot、CDl47、GLUTl、HK2、PKM2蛋白均在寻常型银屑病皮损区较正常人表皮表达增高，差异具有统计学意义(P<0．05)：2、寻常型银屑病皮损中HIF．10t、CDl47与GLUTl蛋白的表达两两存在正相关性(P<0．05)，HK2、PKM2与其它指标均无相关性(夕>O．05)；3、HaCaT细胞中干扰HIF．10t表达后，HIF．10t、CDl47、GLUTl及HK2蛋白表达均显著下降(P<0．05)，PKM2表达无明显差异(P>O．05)；4、CoCl2诱导HaCaT细胞化学缺氧后，H

8、IF．10t、CDl47、GLUTl及HK2蛋白表达均显著上升(P0．05)：5、CDl47和GLUTl蛋白在寻常型银屑病皮损区表达具