探究2型单纯疱疹病毒(HSV-2)对人永生化角质形成细胞株(HaCaT)分泌白细胞介素(IL)-19、IL-20的影响.pdf

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1、数理医药学杂志２０１７年第３０卷第１期＋文章编号：１００４－４３３７（２０１７）０１－０００９－０３中图分类号：Ｒ３７３．１１文献标识码：Ａ·临床科研分析·探究２型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－２）对人永生化角质形成细胞株（ＨａＣａＴ）分泌白细胞介素（ＩＬ）－１９、ＩＬ－２０的影响△朱亦男张杰熊维于波（北京大学深圳医院皮肤科深圳５１８０３６）摘要：目的：分析２型单纯疱疹病毒对人永生化角质形成细胞株分泌白细胞介素（ＩＬ）－１９、ＩＬ－２０的影响，为临床探讨角质形成细胞对２型单纯疱疹病毒感染初期的免疫防御机制提供依据。方法：应用２型单纯疱疹病毒感染人永生

2、化角质形成细胞，并对感染后２４、４８、７２ｈ的ＩＬ－１９、ＩＬ－２０ｍＲＮＡ（信使ＲＮＡ）的表达量使用荧光实时定量ＰＣＲ进行检测，分析ＨＳＶ－２对ＨａＣａＴ细胞分泌白细胞介素（ＩＬ）－１９、ＩＬ－２０的影响。结果：实验组ＨＳＶ－２对ＨａＣａＴ细胞分泌ＩＬ－１９、ＩＬ－２０ｍＲＮＡ表达量显著高于对照组，Ｐ＜０．０５。结论：角质形成细胞经２型单纯疱疹病毒感染后可分泌ＩＬ－１９、ＩＬ－２０，并参与２型单纯疱疹病毒感染初期的免疫防御反应。关键词：２型单纯疱疹病毒；人永生化角质形成细胞；ＩＬ－１９；ＩＬ－２０；影响ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊｉｓｓｎ．１

3、００４－４３３７．２０１７．０１．００４．有研究表明，在原发性生殖器疱疹感染过程初期，角质形盒：Ｔａｋａｒａ公司。成细胞作为第一道防御屏障具有机械性屏障作用和免疫调节１．１．３仪器及器材作用，能分泌多种细胞因子，例如白细胞介素、转化生长因子、使用美国热电３１１１型ＣＯ２孵箱，美国ＷｅａｌｌｔｅｃＤＮＡ凝干扰素、克隆刺激因子、肿瘤坏死因子、趋化性因子等，参与免胶分析系统，日本ＯｌｙｍｐｕｓＣＫＸ４１型倒置相差显微镜，Ｂｉｏ－［１～２］。为分析２型单纯疱疹病毒对人永生化角质疫防御反应ＲＡＤ普通ＰＣＲ仪，Ｂｉｏ－ＲＡＤＣｈｒｏｍｏ４荧光定量ＰＣＲ仪

4、以及形成细胞株分泌白细胞介素（ＩＬ）－１９、ＩＬ－２０的影响，对角质形Ｂｉｏ－ＲＡＤＭｏｄｅｌ６８０型酶标仪。成细胞实施２型单纯疱疹病毒感染干预，现报道如下。１．２方法应用２型单纯疱疹病毒感染人永生化角质形成细胞，并１材料和方法对感染后２４、４８、７２ｈ的ＩＬ－１９、ＩＬ－２０ｍＲＮＡ（信使ＲＮＡ）的表１．１一般材料达量使用荧光实时定量ＰＣＲ进行检测，具体方法如下：１．１．１细胞及人单纯疱疹病毒２型来源１．２．１细胞培养选择美国标准生物品收藏中心提供的人永生化角质形成在ＤＭＥＭ培养液中对ＶＥＲＯ细胞和ＨａＣａＴ细胞进行细胞株ＨａＣａＴ细胞；同

5、时选择由中国疾病预防控制中心病毒培养，向其中加入浓度为１０％的胎牛血清、５０Ｕ／ｍＬ链霉素以病预防控制所段书敏教授提供的非洲绿猴肾细胞（ＶＥＲＯ）以及１００Ｕ／ｍＬ青霉素。将其置于温度为３７℃且二氧化碳浓度及人单纯疱疹病毒２型（ＨＳＶ－２）标准株。为５％的环境下进行细胞培养。待细胞密度达到７０％时，对１．１．２主要试剂其实施传代，并将培养液去除，然后对细胞使用ＤＰＢＳ（杜氏磷胎牛血清、ＤＭＥＭ干粉和ＰＭＩ１６４０、胰蛋白酶和细胞培酸盐缓冲液）进行清洗（１次），再向其中加入浓度为０．２５％胰养用青霉素－链霉素：ＧＩＢＣＯ公司。ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ

6、、Ｔｒｉｚｏｌ：Ｉｎ－蛋白酶，将其置于温度为３７℃且二氧化碳浓度为５％的环境ｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。ｃＤＮＡ反转录试剂盒、ｄＮＴＰ、ｔａｑ酶：Ｆｅｒｍｅｎ－下消化５ｍｉｎ，再按照１∶１０的比例进行传代。ｔａｓ。ＰＣＲ引物：上海生工生物工程股份有限公司；ＷＳＴ１试剂１．２．２ＨＳＶ－２病毒扩增檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪ｔｉｏｎｒａｔｅ，ａｎｄｖａｇｉｎａｌｂｌｅｅｄｉｎｇｏｆｔｗｏｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄａｎｄａｎａｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｔｏｔａｌｅ

7、ｆｆｉｃｉｅｎｃｙｒａｔｅｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｉｎｇｒｏｕｐＡｗａｓ９７．０２％，ａｎｄｔｈａｔｏｆｇｒｏｕｐＢｗａｓ１００％（Ｐ＞０．０５）；Ｔｈｅａｄｖｅｒｓｅｒｅａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｐａ－ｔｉｅｎｔｓｉｎｇｒｏｕｐＡ（４．１７％）ｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｇｒｏｕｐＢ（１８．７５％），Ｐ＜０．０５．Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｄｒｕｇｗｉｔｈｄｒａｗａｌｖａｇｉｎａｌｂｌｅｅｄｉｎｇｔｉｍｅａｎｄｂｌｅｅｄｉｎｇｒａｔｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＞０．０５）；Ｔｈｅｅｎ

8、ｄｏｍｅｔｒｉａｌｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆａｌｌｐａｔｉｅｎｔｓｉｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｗｉｔｈｎｏｓｉｇｎｉｆ