酵母双杂交筛选nlrp3相互作用蛋白质

《酵母双杂交筛选nlrp3相互作用蛋白质》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中图分类号Q2璺UDCSZQ硕士学位论文学校代码!Q533密级公珏一酵母双杂交筛选NLRP3相互作用蛋白质ScreeningofNLItP3interactingproteinsbyYeastTwo-Hybrid作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：徐广生物学细胞生物学生命科学学院李爱玲教授论文答辩日期型!：堕：!z答辩委员会主席弹中南大学二。一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包

2、含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：—缁扛B期：一z赳L年』月卫日学位论文版权使用授权书’本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》

3、，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：—址导师签多乏查叠送日期：塑!≥年』月』日硕士学位论文摘要酵母双杂交筛选NLRP3相互作用蛋白质摘要：在哺乳动物体内，存在多套免疫识别系统，通过维持机体与共生菌群的正常互动以及响应外来病原和刺激的免疫反应，从而维持组织稳态。与主要识别微生物来源病原相关分子模式的、存在于内吞体和细胞膜上的T01l—l设ereceptors(TLRs)不同，定位于胞内的Nod．1浓ereceptors(NLRs)不仅识别胞内病原相关分子模式，也识别宿主来源的损伤相关分子模式，比如机体因胁

4、迫、组织损伤和细胞死亡而产生的内源危险信号。NLRs是重要的胞质内模式识别受体，研究发现其大多数成员能构成一个大的分子平台f11，如最初发现由NLRPl、ASC、caspase一1和caspase．5构成，这个大的复合物被定义为“inflammasome”，即炎症小体，它被证明是促炎细胞因子lL—l

5、3(Interleukin一1

6、3)活化所必需的。之后，许多NLRs{2‘51家族和PYHINsm2l家族的感受蛋白也相续被证明能在各种Damage-associatedmolecularpa弛『ns(DAMPs)和

7、Pathogen—associatedmolecuIarpa船ms(PAMPs)刺激下形成功能性炎症小体。现在，炎症小体的提出己被公认为细胞内免疫监视系统里程碑式的发现。机体内，炎症小体广泛参与了抗微生物感染的先天性免疫反应，其中研究得最广泛、最深入f131的就是NLRP3(NLRfamily，pyrindomaincontaining3)炎症小体。基于NLRP3炎症小体的分子靶向治疗目前也正在研究当中。因此，深入发掘NLRP3信号通路分子调控机制，有可能为揭示炎症、免疫及疾病之间的相互关系提供重要依据，同时为某

8、些疾病治疗提供新的靶点。近年来，通过对NI尺P3炎症小体及其相互作用蛋白质【14，”1的研究，增加了人们对NLRP3功能调控的认识。因此，为进一步探索关于炎症小体的信号调控机拳I及其生物学功能提供基础，本项研究通过酵母双杂交的技术手段筛选与NLRP3相互作用的蛋白质。以NLRP3三个基本结构域PYD、NAcHT、LRR为诱饵，在人白细胞cDNA文库中筛选其相互作用蛋白质。经过酵母细胞内进一步验证，我们从87个初步阳性lI硕士学位论文摘要克隆中筛选出了4个与NLRP3相互作用的候选阳性克隆，即ECHSl(enoyl

9、CoAhydratase，shortchain，1)、UBE2I(ubiquitinconjugatingenzymeE2I)、RPL34(ribosomalproteinL34)以及pXN(paxillin)。进一步在真核细胞内验证了这些候选蛋白质与NLl冲3的相互作用，免疫共沉淀实验(co—IP)表明ECHSl能够结合NLRP3。本项研究发现NLRP3和ECHSl的相互作用可能是一个新的NLRP3调控因素，进一步深入研究有可能发现一个关于NLRP3功能调控的新机制。图15幅，表3个，参考文献58篇关键词：固有

10、免疫；NLRP3；炎症小体；酵母双杂交分类号：Q28硕士学位论文ABSTRACTScreeningofNLI之P3interactingproteinsbyYeastTwo-HybridAbstract：MultiplerecognitionsystemshavecOev01vedinmammalssOastomaintaint}lenonnalinteractionsw