三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能、血液生理生化指标和肠组织形态的影响

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分类号密级UDC单位代码硕士学位论文三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能、血液生理生化指标和肠组织形态的影响EffectsofTributyrinontheGrowthPerformance,BloodPhysiologicalandBiochemicalIndexesandIntestinalMorphologyofWeaningPiglets研究生姓名齐波指导教师李文立教授黄保华研究员学科专业动物营养与饲料科学研究方向单胃动物营养与饲料中国.青岛二0一八年六月 EffectsofTributyrinontheGrowthPerformance,BloodPhysiologicalandBiochemicalIndexesandIntestinalMorphologyofWeaningPigletsThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyQiBo（AnimalNutritionandHealthCare）Mentor:LiWen-liHuangBao-HuaQingdao.ChinaJune,2018 学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。如不实，本人负全部责任。学位论文作者签名：签字日期：年月日---------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日 青岛农业大学硕士学位论文摘要三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能、血液生理生化指标和肠组织形态的影响摘要本试验以200头健康的21日龄杜×长×大三元杂交（DIY）断奶仔猪为研究对象，随机分为5个处理组，每个处理组5个重复，每个重复8头。参照NRC（2012）第11版猪营养需要配制基础饲粮。以饲喂添加40mg/kg杆菌肽锌饲粮的Ⅰ组为对照组，试验组（Ⅱ-Ⅴ组）在基础饲粮基础上分别添加0.05%、0.1%、0.15%和0.2%三丁酸甘油酯（TB），研究三丁酸甘油酯对断奶仔猪的生长性能、养分消化率、血常生理生化指标、肠内容物消化酶活性和肠道组织形态的影响，为研究三丁酸甘油酯对仔猪断奶应激的作用，以及是否可作为抗生素替代品提供技术支持和参考。1三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能、养分消化率的影响1）21～35日龄，与对照组相比，饲粮中添加三丁酸甘油酯提高了ADG（Averagedailygain），降低了ADFI（AverageDailyFeedIntake）和F/G。饲粮中添加0.1%、0.15%TB组ADG分别显著提高14.7%、13.9%（P＜0.05），饲粮中添加0.1%TB组ADFI和F/G最低，分别降低9%、24.9%。35～70日龄，饲粮中添加三丁酸甘油酯比对照组提高了ADG，降低了ADFI和F/G，饲粮中添加0.2%TB组ADG提高9.6%，ADFI降低16.9%，F/G降低24.5%。21～70日龄，饲粮中添加三丁酸甘油酯比对照组提高了ADG，降低了ADFI和F/G，饲粮中添加0.2%TB组ADG提高6.5%，ADFI降低16.8%，F/G降低15.6%。2）与对照组相比，饲粮中添加TB试验组提高饲粮粗蛋白、粗脂肪、钙和磷的表观消化率，其中饲粮中添加0.1%TB组饲粮粗蛋白、粗脂肪、钙的表观消化率提高最多，分别显著提高9.8%、34.2%、14%（P＜0.05），0.2%TB组饲粮磷的表观消化率提高最多，显著提高23.9%（P＜0.05）。2三丁酸甘油酯对断奶仔猪血夜生理生化指标的影响1）28日龄，饲粮中添加0.1%TB组提高了红细胞数和白细胞数，血红蛋白显著提高10.4%（P<0.05），血小板含量显著提高24.3%（P<0.05）。35日龄，饲粮中添加三丁酸甘油酯比对照组白细胞降低，0.2%TB组白细胞显著降低23.6%（P<0.05），添加三丁酸甘油酯对血小板和血红蛋白含量影响不显著，添加0.1%TB组红细胞数显著提高8.6%（P<0.05）。70日龄，添加三丁酸甘油酯白细胞数较对照组降低，0.1%TB、0.15%1 青岛农业大学硕士学位论文摘要TB组显著降低9.6%、12.9%（P<0.05），饲粮中添加0.2%TB红细胞数和血红蛋白含量分别显著提高8.3%、5.8%（P<0.05）。2）28日龄，饲粮中添加0.1%TB组血清总蛋白显著提高49%（P＜0.05），白蛋白提高24.1%，0.1%TB组血清尿素氮显著提高22.6%（P＜0.05）；0.1%TB组葡萄糖显著提高37.5%（P＜0.05）；0.1%TB、0.15%TB组血清IgA分别显著升高33.9%、29.6%（P＜0.05），TB试验组IgG含量显著提高（P＜0.05），0.1%TB组IgG显著升高84.1%；TB试验组ALT和AST活性降低，0.2%TB组ALT活性显著降低25.2%（P＜0.05），AST活性显著降低28.7%（P＜0.05）；0.15%TB、0.2%TB组DAO活性分别显著降低32.1%、33.3%（P＜0.05）。35日龄，TB试验组总蛋白和白蛋白较对照组差异不显著，0.2%TB组血清尿素氮含量显著降低31.2%（P＜0.05）；0.1%TB组血清葡萄糖升高22.7%，0.1%TB、0.15%TB组总胆固醇分别显著提高22.4%、19.2%（P＜0.05），甘油三脂分别显著提高52.2%、47.8%（P＜0.05）；0.1%TB组血清IgA含量显著降低51.6%（P＜0.05），血清IgG、IgM含量差异不显著；TB试验组AST、DAO活性升高。70日龄，0.2%TB组血清尿素氮含量显著升高31.2%（P＜0.05）；0.1%TB、0.15%TB组葡萄糖分别显著升高35.1%、46.7%（P＜0.05）；0.2%TB组IgA显著升高55.8%（P＜0.05），IgM显著升高26.5%（P＜0.05）；0.2%TB组AST、DAO活性分别显著降低39.2%、43%（P＜0.05）。3三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响1）28日龄，0.05%TB、0.1%TB组麦芽糖酶活性升高，0.1%TB组蔗糖酶活性升高11.2%，TB试验组乳糖酶、胰蛋白酶活性均降低，0.1%TB组胰蛋白酶活性显著降低24.9%（P＜0.05），TB试验组脂肪酶活性显著降低（P＜0.05）。35日龄，TB试验组麦芽糖酶和蔗糖酶活性均升高，0.1%TB、0.15%TB组升高最大，0.1%TB、0.15%TB组乳糖酶活性分别显著升高57.8%、47.3%（P＜0.05），TB试验组胰蛋白酶活性降低。2）28日龄，十二指肠，TB试验组绒毛长度显著降低（P＜0.05），隐窝深度升高，绒毛/隐窝比显著降低（P＜0.05）；0.15%TB、0.2%TB组黏膜厚度升高；TB试验组淋巴细胞数显著降低（P＜0.05），0.1%TB组显著降低46%；0.2%TB组杯状细胞数升高42%。空肠和回肠，TB试验组空肠和回肠绒毛长度显著提高（P＜0.05），0.1%TB组空肠绒毛长度显著升高28%（P＜0.05），回肠绒毛长度显著升高25.4%（P＜0.05）；TB试验组空肠和回肠隐窝深度显著降低（P＜0.05），0.1%TB、0.15%TB组空肠隐窝深度分别显著降低21.1%、23.1%（P＜0.05），0.15%TB组回肠隐窝深度显著降低19.9%（P＜0.05）；0.1%TB组空肠绒毛/隐窝比显著提高68.1%（P＜0.05），0.1%TB组回2 青岛农业大学硕士学位论文摘要肠绒毛/隐窝比显著提高31.4%（P＜0.05）；0.1%TB组空肠和回肠黏膜厚度分别显著升高34.3%、21.6%（P＜0.05）；0.1%TB组空肠淋巴细胞和杯状细胞数分别显著升高37.3%、43.9%（P＜0.05），0.1%TB组回肠淋巴细胞和杯状细胞分别升高26.9%、12.7%。35日龄，十二指肠，0.1%TB组绒毛长度显著升高19.6%（P＜0.05），0.1%TB、0.15%TB组绒毛/隐窝比分别升高9.3%、17.1%；TB试验组黏膜厚度显著提高（P＜0.05）；TB试验组淋巴细胞和杯状细胞数升高，0.1%TB、0.15%TB组淋巴细胞分别升高34.4%、26%，0.2%TB组杯状细胞数显著升高42.9%（P＜0.05）。空肠和回肠，TB试验组空肠和回肠绒毛长度升高，差异不显著；TB试验组空肠和回肠隐窝深度降低，0.2%TB组空肠隐窝深度显著降低16.9%（P＜0.05），0.1%TB组回肠隐窝深度显著降低18.9%（P＜0.05）；0.1%TB组空肠和回肠绒毛/隐窝比分别升高21.3%、33.3%；0.15%TB组空肠和回肠黏膜厚度分别显著降低16.6%、21.7%（P＜0.05）；TB试验组空肠淋巴细胞显著升高（P＜0.05），0.1%TB组空肠淋巴细胞显著升高33.1%（P＜0.05），0.1%TB组、0.15%TB组回肠淋巴细胞数分别显著降低21.4%、37.6%（P＜0.05）；0.2%TB组空肠杯状细胞数显著升高46.7%（P＜0.05），0.1%TB、0.15%TB和0.2%TB组回肠杯状细胞分别显著升高52.5%、49.1%、36.6%（P＜0.05）。关键词：断奶仔猪；三丁酸甘油酯；生长性能；肠组织形态3 青岛农业大学硕士学位论文AbstractEffectsofTributyrinontheGrowthPerformance,BloodPhysiologicalandBiochemicalIndexesandIntestinalMorphologyofWeaningPigletsAbstractAt21dafterbirth,thepiglets(Duroc×Landrace×LargeWhite;7.66±0.06kgofBW)wererandomlyallocatedto5experimentaldietarygroups(5pens/dietwith8piglets/pen)accordingtotheirinitialBW,sex(femalesandcastratedmales),andwerefedadlibitumthefollowingexperimentaldietspreparedaccordingtotheNRC(2012)version11pignutrition:1)thecontrolgroupdietsupplementedwith40mg/kgbacitracinzinc;2)treatmentgroupsⅡ-Ⅴwererespectivelysupplementedwith0.05%,0.1%,0.15%and0.2%tributyrin(TB)withoutantibiotics,researcheffectsoftributyrinonthegrowthperformance,nutrientdigestibility,bloodroutineindexes,bloodbiochemicalindexes,intestinalcontentsdigestiveenzymesandintestinalmorphologyofweaningpiglets,inordertostudytheeffectoftributyrinontheweaningstressofpiglets,andwhetheritcanprovidetechnicalsupportandreferenceasanalternativetoantibiotics.1.EffectsofTBonthegrowthperformanceandnutrientdigestibilityofweaningpiglets.1)21~35-days-old,theadditionoftributyrintothedietsincreasedADG（Averagedailygain）,decreasedADFI（AverageDailyFeedIntake）andF/Gthancontrolgroup,ADGof0.1%、0.15%TBgroupsignificantlyincreased14.7%、13.9%(P<0.05),ADFIandF/Gof0.1%TBgroupwerelowest,respectivelydecreased9%、24.9%.35~70-days-old,theadditionoftributyrintothedietsincreasedADG,decreasedADFIandF/Gthancontrolgroup,ADGof0.2%TBgroupincreased9.6%,ADFIdecreased16.9%,F/Gdecreased24.5%.21~70-days-old,theadditionoftributyrintothedietsincreasedADG,decreasedADFIandF/Gthancontrolgroup,ADGof0.2%TBgroupincreased6.5%,ADFIdecreased16.8%,F/Gdecreased15.6%.2)Comparedwithcontrolgroup,theadditionoftributyrintothedietssignificantlyincreasedtheapparentdigestibilityofcrudeprotein、crudefat、calciumandphosphorusofdiets(P<0.05),andtheincreaseofcrudeprotein、crudefat、calciumapparentdigestibilityof0.1%TBgroupincreasedthebiggest,significantlyincreased9.8%、34.2%、14%(P<0.05),theapparentdigestibilityofphosphorusof0.2%TBgroupincreasedthebiggest,significantlyincreased23.9%(P<0.05).4 青岛农业大学硕士学位论文Abstract2.EffectsofTBonthebloodphysiologicalandbiochemicalindexesofweaningpiglets.1)28-days-old,theadditionof0.1%TBtothedietsincreasedthenumberofredbloodcellsandwhitebloodcellsthancontrolgroup,thecontentofhemoglobinsignificantlyincreased10.4%(P<0.05),thecontentofplateletssignificantlyincreased24.3%(P<0.05).35-days-old,thewhitebloodcellsofTBgroupdecreasedthancontrolgroup,whitebloodcellsof0.2%TBgroupsignificantlydecreased23.6%(P<0.05),effectsoftributyrinonplateletandhemoglobincontentwasnotsignificant,theredbloodcellsof0.1%TBgroupsignificantlyincreased8.6%(P<0.05).70-days-old,thenumberofwhitebloodcellsoftributyringroupdecreasedthancontrolgroup,thewhitebloodcellsof0.1%TBand0.15%TBgroupsignificantlydecreased9.6%、12.9%(P<0.05),Theredbloodcellsandhemoglobinof0.2%TBgroupsignificantlyincreased8.3%、5.8%(P<0.05).2)28-days-old,serumtotalproteinof0.1%TBgroupsignificantlyincreased49%(P<0.05),albuminincreased24.1%,serumureanitrogenof0.1%TBgroupsignificantlyincreased22.6%;Glucoseof0.1%TBgroupsignificantlyincreased37.5%(P<0.05);SerumIgAof0.1%TB、0.15%TBgroupsignificantlyincreased33.9%、29.6%(P<0.05),IgGofTBgroupsignificantlyincreased(P<0.05),IgGof0.1%TBgroupsignificantlyincreased84.1%(P<0.05);TheactivityofALTandASTofTBtestgroupdecreased,theactivityofALTof0.2%TBgroupsignificantlydecreased25.2%(P<0.05),theactivityofASTsignificantlydecreased28.7%(P<0.05);TheactivityofDAOof0.15%TBand0.2%TBgroupsignificantlydecreased32.1%、33.3%(P<0.05);35-days-old,thetotalproteinandalbuminofTBtestgroupwerenotsignificantdifferencewithcontrolgroup,serumureanitrogencontentof0.2%TBgroupsignificantlydecreased31.2%(P<0.05);Serumglucoseof0.1%TBgroupincreased22.7%,serumtotalcholesterolof0.1%TB、0.15%TBgroupsignificantlyincreased22.4%、19.2%(P<0.05),triglyceridessignificantlyincreased52.2%、47.8%(P<0.05);SerumIgAof0.1%TBgroupsignificantlydecreased51.6%(P<0.05),serumIgG,IgMwerenotsignificantdifferencewithcontrolgroup;TheactivityofASTandDAOofTBtestgroupincreased.70-days-old,totalproteinandalbuminofTBtestgroupwerenotsignificantdifferencewithcontrolgroup,serumureanitrogencontentof0.2%TBgroupsignificantlyincreased31.2%(P<0.05);Serumglucoseof0.1%TB、0.15%TBgroupsignificantlyincreased35.1%、46.7%(P<0.05);SerumIgAcontentof0.2%TBgroupsignificantlyincreased55.8%(P<0.05),IgAcontentof0.2%TBgroupsignificantlyincreased26.5%(P<0.05);TheactivityofASTandDAOof0.2%TBtestgroupsignificantlydecreased39.2%、43%(P<0.05).5 青岛农业大学硕士学位论文Abstract3.EffectsofTBondigestiveenzymeactivityandintestinaltissuemorphologyofweaningpiglets.1)28-days-old,theactivityofmaltaseof0.1%TB,0.15%TBgroupincreased,theactivityofsucraseof0.1%TBgroupincreased11.2%,theactivitiesoflactoseenzyme,trypsinofTBtestgroupdecreasedthancontrolgroup,thetrypsinactivityof0.1%TBgroupsignificantlydecreased24.9%(P<0.05),thelipaseactivitiesofTBtestgroupsignificantlydecreased(P<0.05).35-days-old,theactivitiesofmaltaseandsucraseofTBtestgroupincreased,0.1%,0.15%TBgroupincreasedthebiggest,theactivityoflactoseenzymeof0.1%TB,0.15%TBgroupsignificantlyincreased57.8%、47.3%(P<0.05),theactivityoftrypsinofTBtestgroupwaslowerthancontrolgroup.2)28-days-old,duodenum,villilengthofTBtestgroupsignificantlydecreased(P<0.05),cryptdepthincreased,villouscryptratiosignificantlydecreased(P<0.05);Themucosathicknessof0.15%TB,0.2%TBgroupincreased;ThenumberoflymphocytesofTBtestgroupsignificantlydecreased(P<0.05),thelymphocytesof0.1%TBgroupsignificantlydecreased46%(P<0.05),Thenumberofgobletcellsincreased46%.Jejunumandileum,villilengthofTBtestgroupsignificantlyincreased(P<0.05),thejejunumvillilengthof0.1%TBgroupsignificantlyincreased28%(P<0.05),theileumvillilengthof0.1%TBgroupsignificantlyincreased25.4%(P<0.05);CryptdepthofTBtestgroupsignificantlydecreased(P<0.05),thejejunumcryptdepthof0.1%TB、0.15%TBgroupsignificantlydecreased21.1%、23.1%(P<0.05),theileumcryptdepthof0.15%TBgroupsignificantlydecreased19.9%(P<0.05);Thejejunumvillouscryptratioof0.1%TBgroupsignificantlyincreased68.1%(P<0.05),theileumvillouscryptratioof0.1%TBgroupsignificantlyincreased31.4%(P<0.05);Themucosathicknessof0.1%TBgroupsignificantlyincreased34.3%、21.6%(P<0.05);C0.1%TBgroupsignificantlyincreased37.3%、43.9%(P<0.05),theileumlymphocytesandgobletcellsof0.1%TBgrouprespectivelyincreased26.9%、12.7%.35-days-old,duodenum,villilengthof0.1%TBgroupsignificantlyincreased19.6%(P<0.05),villouscryptratioof0.1%TB、0.15%TBgrouprespectivelyincreased9.3%、17.1%;ThemucosathicknessofTBtestgroupsignificantlyincreased(P<0.05);ThelymphocytesandgobletcellsofTBtestgroupincreased,lymphocytesof0.1%TB、0.15%TBgrouprespectivelyincreased34.4%、26%,thegobletcellsof0.2%TBgroupsignificantlyincreased42.9%(P<0.05).Jejunumandileum,villilengthofTBtestgroupincreased;cryptdepthofTBtestgroupdecreased,jejunumcryptdepthof0.2%TBgroupsignificantlydecreased16.9%(P<0.05),ileumcryptdepthof0.1%TBgroupsignificantlydecreased18.9%(P<0.05);Thejejunumandileumvillouscryptratioof0.1%TBgrouprespectivelyincreased21.3%、33.3%;Themucosa6 青岛农业大学硕士学位论文Abstractthicknessof0.15%TBgroupsignificantlydecreased16.6%、21.7%(P<0.05);ThejejunumlymphocytesofTBtestgroupsignificantlyincreased(P<0.05),thejejunumlymphocytesof0.1%TBgroupsignificantlyincreased33.1%(P<0.05),theileumlymphocytesof0.1%TB、0.15%TBgroupsignificantlydecreased21.4%、37.6%(P<0.05);Thejejunumgobletcellsof0.2%TBgroupsignificantlyincreased46.7%(P<0.05),theileumgobletcellsof0.1%TB、0.15%TBand0.2%TBgroupsignificantlyincreased52.5%、49.1%、36.6%(P<0.05).Keywords:WeaningPiglets;Tributyrin;GrowthPerformance;IntestinalMorphology7 青岛农业大学硕士学位论文目录目录前言...................................................................................................................................................1文献综述.............................................................................................................................................21仔猪的生理特征.............................................................................................................................21.1仔猪生长发育快，新陈代谢旺盛.............................................................................................21.2仔猪消化系统不完全.................................................................................................................21.3仔猪先天免疫力低下.................................................................................................................21.4仔猪体温调节能力差.................................................................................................................22断奶对仔猪的影响.........................................................................................................................32.1断奶对仔猪生长性能的影响.....................................................................................................32.2断奶对仔猪血液生理生化指标的影响.....................................................................................32.3断奶对仔猪肠道组织形态的影响.............................................................................................42.4断奶对仔猪免疫功能的影响.....................................................................................................53三丁酸甘油酯的生物学作用........................................................................................................53.1三丁酸甘油酯的理化特性及消化与吸收.................................................................................53.2三丁酸甘油酯可为肠黏膜细胞供能..........................................................................................63.3三丁酸甘油酯有利于改善小肠形态结构.................................................................................63.4三丁酸甘油酯有利于维持肠黏膜屏障完整性.........................................................................63.5三丁酸甘油酯有利于维持肠道微生物菌群.............................................................................74三丁酸甘油酯在畜禽生产上的应用............................................................................................74.1在猪生产上的应用效果..............................................................................................................74.2在鸡生产上的应用效果..............................................................................................................84.3在反刍动物生产上的应用效果..................................................................................................85研究目的和意义.............................................................................................................................9试验一三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能、养分表观消化率的影响...................................101材料与方法....................................................................................................................................101.1试验材料.....................................................................................................................................106 青岛农业大学硕士学位论文目录1.2试验动物和饲粮设计................................................................................................................101.3饲养管理.....................................................................................................................................111.4测定指标及方法.........................................................................................................................111.4.1生长性能指标测定..................................................................................................................111.4.2饲粮养分表观消化率测定......................................................................................................111.5数据处理与统计分析................................................................................................................122结果与分析....................................................................................................................................122.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能的影响............................................................................122.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪养分表观消化率的影响...............................................................133讨论................................................................................................................................................143.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能的影响............................................................................143.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪养分表观消化率的影响................................................................154小结................................................................................................................................................15试验二三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理生化指标的影响....................................................161材料与方法....................................................................................................................................161.1试验材料.....................................................................................................................................161.2试验动物和饲粮设计................................................................................................................161.3饲养管理.....................................................................................................................................161.4屠宰与样本采集.........................................................................................................................161.5测定指标及方法.........................................................................................................................161.5.1血液生理指标测定.................................................................................................................171.5.2血清生化指标测定.................................................................................................................171.6数据处理与统计分析................................................................................................................172结果与分析....................................................................................................................................172.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理指标的影响....................................................................172.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪血清生化指标的影响....................................................................183讨论................................................................................................................................................213.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理指标的影响....................................................................213.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪血清生化指标的影响....................................................................217 青岛农业大学硕士学位论文目录4小结................................................................................................................................................23试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和小肠组织形态的影响...................................241材料与方法....................................................................................................................................241.1试验材料.....................................................................................................................................241.2试验动物和饲粮设计................................................................................................................241.3饲养管理.....................................................................................................................................241.4屠宰与样本采集.........................................................................................................................241.5测定指标及方法.........................................................................................................................241.5.1肠内容物消化酶活性测定.....................................................................................................241.5.2小肠组织形态测定.................................................................................................................251.6数据处理与统计分析................................................................................................................252结果与分析....................................................................................................................................252.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪肠内容物消化酶活性的影响........................................................252.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪小肠组织形态的影响....................................................................262.3肠黏膜光镜观察.........................................................................................................................293讨论................................................................................................................................................323.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪肠内容物消化酶活性的影响........................................................323.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪小肠组织形态的影响....................................................................334小结................................................................................................................................................34全文结论...........................................................................................................................................36参考文献...........................................................................................................................................37英文缩写词表...................................................................................................................................42致谢...................................................................................................................................................44作者简介...........................................................................................................................................458 青岛农业大学硕士学位论文ContentsContentsPreface................................................................................................................................................1Literaturereview...............................................................................................................................21Physiologicalcharacteristicsofpiglets.........................................................................................21.1Pigletsgrowfastandhavehighmetabolism............................................................................21.2Thedigestivesystemofpigletsisnotcomplete........................................................................21.3Theinnateimmunityofpigletsislow.......................................................................................21.4Lowtemperatureregulationabilityofpiglets..........................................................................22Effectsofweaningonpiglets.........................................................................................................32.1Effectsofweaningongrowthperformanceofpiglets.............................................................32.2Effectsofweaningonbloodphysiologicalandbiochemicalindexesofpiglets....................32.3Effectsofweaningontheintestinaltissuemorphologyofpiglets..........................................42.4Effectsofweaningontheimmunefunctionofpiglets.............................................................53Thebiologicalfunctionoftributyrin............................................................................................53.1Thephysicochemicalpropertiesanddigestionandabsorptionoftributyrin.......................53.2Tributyrincanprovideenergyforintestinalmucosalcells....................................................63.3Tributyrinishelpfulforimprovingthemorphologyofsmallintestine................................63.4Tributyrinishelpfultomaintaintheintegrityofintestinalmucosalbarrier.......................63.5Tributyrinishelpfultomaintainintestinalmicrobialflora...................................................74Applicationoftributyrininlivestockproduction.......................................................................74.1Applicationeffectonpigproduction.........................................................................................74.2Applicationeffectonchickenproduction.................................................................................84.3Applicationeffectonruminantsproduction............................................................................85Researchpurposeandsignificance...............................................................................................9Experiment1Effectsoftriglycerideonthegrowthperformanceandnutrientapparentdigestibilityofweaningpiglets............................................................................................................................101Materialsandmethods................................................................................................................101.1Testmaterials.............................................................................................................................108 青岛农业大学硕士学位论文Contents1.2Experimentalanimalsanddietsdesign..................................................................................101.3Raisingmanagement.................................................................................................................111.4Determinationindexesandmethods.......................................................................................111.4.1Thedeterminationofgrowthperformanceindexes...........................................................111.4.2Thedeterminationofdigestibilityofdiets...........................................................................111.5Dataprocessingandstatisticalanalysis..................................................................................122Resultsandanalysis.....................................................................................................................122.1Effectsoftributyrinonthegrowthperformanceofweaningpiglets..................................122.2Effectsoftributyrinonnutrientdigestibilityofweaningpiglets.........................................133Discussions....................................................................................................................................143.1Effectsoftributyrinonthegrowthperformanceofweaningpiglets..................................143.2Effectsoftributyrinonnutrientdigestibilityofweaningpiglets.........................................154Conclusions...................................................................................................................................15Experiment2Effectsoftributyrinonbloodphysiologicalandbiochemicalindexesofweaningpiglets...........................................................................................................................................................161Materialsandmethods................................................................................................................161.1Testmaterials.............................................................................................................................161.2Experimentalanimalsanddietsdesign..................................................................................161.3Raisingmanagement.................................................................................................................161.4Slaughterandsamplecollection..............................................................................................161.5Determinationindexesandmethods.......................................................................................161.5.1Thedeterminationofbloodphysiologicalindexes..............................................................171.5.2Thedeterminationofserumbiochemicalindexes..............................................................171.6Dataprocessingandstatisticalanalysis..................................................................................172Resultsandanalysis.....................................................................................................................172.1Effectsoftributyrinonbloodphysiologicalindexesofweaningpiglets.............................172.2Effectsoftributyrinonserumbiochemicalindexesofweaningpiglets..............................183Discussions....................................................................................................................................213.1Effectsoftributyrinonbloodphysiologicalindexesofweaningpiglets.............................219 青岛农业大学硕士学位论文Contents3.2Effectsoftributyrinonserumbiochemicalindexesofweaningpiglets..............................214Conclusions...................................................................................................................................23Experiment3Effectsoftributyrinondigestiveenzymeactivityandintestinaltissuemorphologyofweaningpiglets............................................................................................................................241Materialsandmethods................................................................................................................241.1Testmaterials.............................................................................................................................241.2Experimentalanimalsanddietsdesign..................................................................................241.3Raisingmanagement.................................................................................................................241.4Slaughterandsamplecollection..............................................................................................241.5Determinationindexesandmethods.......................................................................................241.5.1Determinationofdigestiveenzymeactivityofintestinalcontents....................................241.5.2Determinationofintestinaltissuemorphology...................................................................251.6Dataprocessingandstatisticalanalysis..................................................................................252Resultsandanalysis.....................................................................................................................252.1Effectsoftributyrinondigestiveenzymeactivityofweaningpiglets.................................252.2Effectsoftributyrinonintestinaltissuemorphologyofweaningpiglets............................262.3Intestinalmucosallightmicroscopeobservation...................................................................293Discussions....................................................................................................................................323.1Effectsoftributyrinondigestiveenzymeactivityofweaningpiglets.................................323.2Effectsoftributyrinonintestinaltissuemorphologyofweaningpiglets............................334Conclusions...................................................................................................................................34GeneralConclusion.........................................................................................................................36References........................................................................................................................................37Listofabbreviations.......................................................................................................................42Acknowledgements..........................................................................................................................44Abriefintroductiontotheauthor.................................................................................................4510 青岛农业大学硕士学位论文前言前言为提高母猪生产力，降低饲养成本，现代集约化、规模化养殖将仔猪断奶日龄提前至3～4周龄。3～4周龄仔猪自身消化系统和免疫系统发育不完善，断奶后饲料、环境等因素的变化，造成断奶仔猪体重和采食量等生长性能指标明显下降，而且时常伴有腹泻，易感染疾病。仔猪断奶期间影响最大的是肠道，断奶后肠道结构、形态和功能都会发生变化，而肠道又是机体消化吸收营养物质的关键场所。因此，为缓解断奶对仔猪造成的应激，需研究促进肠组织发育和增强其功能的添加剂，以期从根本上缓解仔猪断奶应激造成的生长性能的下降。研究表明，饲粮中长期应用或不当使用抗生素会产生抗药性和药物残留，造成严重的食品安全问题。随着抗生素的禁用，在畜牧业养殖中使用无污染、无残留、不产生耐药性的饲料添加剂已经成为国内外近年研究的热点。目前研究较多的饲料添加剂有酶制剂、益生素（菌）、乳化剂和酸化剂、寡糖等。其中，酸化剂因其具有在体内迅速吸收、参与代谢且无污染、无残留等优点，同时又可与抗生素、铜、无机盐等起到协同作用，故而被广泛利用。丁酸属于有机酸的一种，它是肠道中存在的一种短链脂肪酸。丁酸及其盐类作为绿色环保的饲料添加剂，被认为是抗生素类饲料添加剂的潜在替代品，具有使用安全、利于提高动物生产性能、维持肠道结构完整性等特点。然而，丁酸的液体形态、易挥发性、特殊臭味及较短半衰期都限制了其在生产中的应用。而三丁酸甘油酯弥补了丁酸的不足，它作为丁酸的前体物，较丁酸不宜于挥发、无臭味、半衰期长且安全无毒副作用，可作为稳定的饲料添加剂。三丁酸甘油酯已在养猪生产上逐步得到应用，利用三丁酸甘油酯的乳化性能、油脂特性、对肠道的调节作用等，相继开展了三丁酸甘油酯在对肠道功能的改进、替代抗生素和乳糖醇、益生素等复合使用的效果等几个方面的试探性试验。但是在三丁酸甘油酯在饲粮中添加的时间跨度、添加剂量，对肠粘膜的作用机理及对机体免疫功能的调节作用等方面还有待于研究。本试验以断奶仔猪为研究对象，饲粮中添加不同水平的三丁酸甘油酯，旨在探讨三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能和养分表观消化率、血液生化指标、肠道形态结构的影响，以期为三丁酸甘油酯的实际应用提供理论依据。1 青岛农业大学硕士学位论文文献综述文献综述1仔猪的生理特征仔猪又叫保育猪或断奶猪，仔猪的饲养和管理水平在现代规模化养猪生产过程中至关重要。仔猪时期是生长发育最快，饲料利用效率最高，最适合定向选育的阶段[1]。同时，仔猪消化机能发育不完善，抵抗力较低，容易患病，成活率低，饲养比较困难，对后期的生长发育及猪群的发展将会产生重要的影响[2]。1.1仔猪生长发育快，新陈代谢旺盛刚出生的仔猪体重较小，不到成年猪体重的百分之一，但仔猪生长速度极快，能够在很短的时间内长到一定的体量，这主要是与其自身的生长代谢有关，仔猪新陈代谢旺盛，物质交换速度快，尤其是蛋白质代谢以及钙和磷的代谢[3]。因此仔猪需要养分多，仔猪对营养的需求极高，只有为其提供足够的所需要的营养物质，才能实现仔猪的快速生长发育[4]。1.2仔猪消化系统不完全猪的消化器官在胚胎期就已形成，但仔猪出生时消化器官重量和体积都较小，导致消化机能不完善，消化腺分泌活动弱，进而导致新生仔猪消化酶分泌不足，消化酶活性低，胃蛋白酶没有活性，不能消化蛋白质[5]，特别是植物性蛋白质，因而新生仔猪可以利用母乳而不能利用植物性饲料。随着日龄的增长和食物对胃壁的刺激促进盐酸的分泌，胃蛋白酶才具有消化功能，仔猪才可利用母乳以外的多种饲料。但是仔猪乳糖酶活性较高，仔猪时期是乳糖酶的分泌量和活性最高的阶段。1.3仔猪先天免疫力低下仔猪的免疫主要包括主动免疫和被动免疫两种形式。初生仔猪缺乏先天免疫力，容易患病，只能通过母乳获得被动免疫，母乳可不经转化即能直接被吸收到血液中，使仔猪血清γ-球蛋白的水平得到提高，免疫力迅速增加。在仔猪3日龄时从母乳中获得的抗体达到最高水平，到仔猪21日龄时抗体水平降至最低。一般情况下，仔猪在10日龄后，开始获得主动免疫的能力，2～4周龄时其体内的免疫球蛋白逐渐增多，免疫系统由被动免疫向主动免疫过渡[6]。1.4仔猪体温调节能力差2 青岛农业大学硕士学位论文文献综述初生仔猪控制适应外界环境作用的下丘脑、垂体前叶和肾上腺皮质等系统的机能虽已相当完善，但大脑皮层未发育健全，神经系统调节体温能力差，仔猪对外界环境的应激适应力弱。此外，仔猪机体内部贮存的能源较少，遇到寒冷天气血糖骤降，如果不能及时吃到母乳，存活率就比较低。特别是１周龄内要特别注意保温，尤其是冬季，仔猪不易维持正常体温，易被冻僵、冻死。当环境温度降低时仔猪体温也会随之下降，降到一定范围便开始回升。仔猪出生后体温下降的幅度及恢复所用时间取决于环境温度，环境温度越低则体温下降的幅度越大，进而恢复所用的时间就越长。2断奶对仔猪的影响现代规模化、集约化养猪场多采用3～4周龄断奶生产技术，其目的是提高母猪的生产效率、栏舍利用率和仔猪出栏率，降低饲养成本[7]。早期断奶后，由于仔猪过早离开母猪转移到新的栏舍、重新合群，仔猪本身消化器官发育不完全、消化机能不完善、免疫力低下，受外部环境、饲养管理和饲料营养突变等方面的影响，易发生仔猪早期断奶综合征，造成仔猪肠道微生物菌群失衡，引起仔猪消化系统功能紊乱，对仔猪产生各种不良影响，给猪场造成重大经济损失[8-10]。2.1断奶对仔猪生长性能的影响仔猪断奶前由消化率高且适口性好的母乳提供全部营养，仔猪消化系统已经完全适应了对母乳的消化和吸收，此时仔猪肠道结构、肠道消化酶种类和数量尚未成熟，断奶后转变成不易消化且适口性差的固态饲料，饲料营养和环境的突变，导致断奶初期仔猪采食量急剧下降，能量摄入量不足，肠道完整性受损，生长速度下降，生长性能随着采食量的降低而降低。通常情况下，仔猪断奶第1d体重将下降100～250g，损失的体重需要约4d的时间才能完全恢复，并与断奶日龄关系不大[11]。Wang等[12]将21日龄断奶仔猪到断奶1周时与哺乳仔猪做对比，研究发现断奶仔猪采食量降低36%，日增重降低47%，小肠重量降低26%。因此，寻找有效的抗应激措施，提高断奶后仔猪采食量，将会大大提高生产力。2.2断奶对仔猪血液生理生化指标的影响血液所包含的化学成分主要来自消化道的消化分解产物和组织细胞释放的代谢产物。断奶引起仔猪产生一系列应激反应，造成机体代谢和内分泌紊乱，细胞膜受损，进而引起血液化学成分变化。因此，可以通过仔猪血液生理生化指标的变化反映机体消化及代谢机能的生理动态。3 青岛农业大学硕士学位论文文献综述蛋白质代谢方面，血清总蛋白（Totalprotein，TP）是动物机体获得蛋白质的一个重要途径，能够为机体提供能量并修补机体组织。总蛋白反映了饲料中的蛋白质水平、动物机体对蛋白质吸收代谢状况以及与体液免疫的关系。白蛋白（Albumin，ALB）能维持血浆胶体渗透压并可作为血液循环中低水溶性物质的转运载体[13]。ALB还能提供各种蛋白质所需的氨基酸，有较高的营养价值[14]。尿素氮（Bloodureanitrogen，BUN）是机体含氮物质分解代谢的终产物，当饲喂含氮物质高的日粮，或机体氨基酸代谢旺盛，血清尿素氮含量就会升高。血清尿素氮含量可以准确反映动物机体蛋白质代谢水平和氨基酸之间的平衡状况[15]，它与体内氮沉积率呈显著负相关。吴金节，龙彩虹等[16]研究发现早期断奶应激造成仔猪血清球蛋白水平降低（P＜0.05）、血清尿素氮水平升高（P＜0.05）；张振斌等[17]对早期断奶发生应激的仔猪血清生化指标进行测定，结果发现在应激仔猪的血清中葡萄糖、血清球蛋白和白蛋白的比率均大幅度下降。糖代谢方面，葡萄糖（Glucose，GLU）作为一种能量物质，为机体各项代谢活动提供能量，能够反映机体利用血糖进行合成代谢的能力。另有研究表明，葡萄糖与蛋白质的合成相关，葡萄糖通过促进胰岛素的释放，从而利于蛋白质合成[18]。脂肪代谢方面，血脂含量的高低直接反映动物机体脂肪代谢情况，血清甘油三酯（Triglycerides，TG）、总胆固醇（Totalcholesterol，TC）是衡量脂肪代谢的重要指标。血清TG水平决定脂肪组织发育和脂肪沉积，TG含量减少表明脂肪沉积降低[19]。TC含量下降说明脂肪代谢加快，可以为仔猪提供充足的能量需要，以满足仔猪的快速生长。天门冬氨酸氨基转移酶（Aspartateaminotransferase，AST）和丙氨酸氨基转移酶（Alanineaminotransferase，ALT）是动物机体重要的转氨酶，参与非必须氨基酸合成和蛋白质分解代谢及糖脂代谢转换过程[20]。正常情况下，AST在心脏和肝脏中的活性最高，血清中AST活性低，当仔猪受到断奶应激刺激，造成仔猪机体损伤，肝脏和心机细胞细胞膜受损，AST进入血清，致使血清AST活性升高，因此常把AST作为反映心脏、肝脏功能的重要指标之一[21]。周向梅等[22]研究表明，在断奶7d后仔猪血清谷草转氨酶、磷酸肌酸激酶、乳酸脱氢酶活性显著升高，血清总蛋白、球蛋白、白蛋白、尿素氮含量显著降低。2.3断奶对仔猪肠道组织形态的影响肠道消化吸收的功能单位是肠绒毛，肠绒毛是位于小肠上皮层的突起，增加了小肠黏膜表面积，有利于营养物质的消化与吸收。隐窝是小肠上皮在绒毛根部下陷至固有层形成的管状腺，肠道隐窝内含有肠干细胞用于肠上皮细胞的再生。绒毛高度和隐窝深度反应了肠道形态功能的完整性。断奶应激导致仔猪肠道形态发生变化，肠壁组织受损，4 青岛农业大学硕士学位论文文献综述绒毛萎缩变短，隐窝加深，从而使仔猪肠道养分消化吸收率降低[23]。任曼等[24]的研究表明，断奶应激可导致仔猪肠道完整性破坏，绒毛萎缩，并出现隐窝深度增加及绒隐比降低等形态变化。Hampson[25]对断奶3～8d仔猪的肠道组织形态进行研究发现，断奶后仔猪肠绒毛长度下降了30%～63%，隐窝深度增加了76%～180%。2.4断奶对仔猪免疫功能的影响断奶应激对仔猪的免疫机能具有广泛的影响[26]。仔猪从母乳中获得被动免疫，可以抵抗外来病原的侵害，在4～5周龄仔猪自身免疫系统才进行主动免疫，分泌大量免疫球蛋白[27]。在3周龄断奶时仔猪免疫力处于最低水平，断奶后采食量下降，导致能量水平和各种营养物质吸收不足，VE、Se2+等与免疫相关的营养物质缺乏，组织屏障受损，损害仔猪机体的免疫功能[28]，造成机体血液抗体（IgG、IgM、IgA）水平下降，肠道黏膜免疫能力受到抑制。3三丁酸甘油酯的生物学作用3.1三丁酸甘油酯的理化特性及消化与吸收三丁酸甘油酯（Tributyrin，TB）是一种短链甘油三酸酯，分子式为C15H26O6，相对分子质量为302.37。TB是由一分子甘油和三分子丁酸酯化而形成，为无色近油状液体，几乎无气味或略带奶油香气味，微苦味，不溶于水，易溶于氯仿、乙醇和乙醚等有机溶剂。三丁酸甘油酯以口服方式添加，化学性质稳定，在胃液中不分解，能够通过胃到达肠道后段，在胰脂肪酶的作用下分解成甘油和丁酸。三丁酸甘油酯半衰期较长，可达40min。三丁酸甘油酯属于脂质，与脂质分解代谢相同，可以在脂肪酶作用下分解代谢。消化道内存在的主要脂肪酶包括胃脂肪酶、胰脂肪酶和肠脂肪酶。胃酸中的胃脂肪酶数量很少，作用效果低[29,30]，因此三丁酸甘油酯可以顺利通过胃到达肠道。小肠中的胰脂肪酶是脂肪消化的关键酶，将三丁酸甘油酯分解，释放出丁酸和甘油。肠液中的少量肠脂肪酶可以补充胰脂肪酶对脂肪的消化不足。后肠段中存在的微生物也具有分解三丁酸甘油酯的能力[31]。三丁酸甘油酯分解释放的甘油具有很强的亲脂性，可以通过被动运输透过细胞膜进入胞内。丁酸是一种短链脂肪酸，具有较好的水溶性，可以直接进入线粒体，直接在体内氧化，迅速地供给机体能量，是动物机体重要的能量来源。Miyoshi等[32]研究发现，大鼠饲喂三丁酸甘油酯1h后，肝门静脉中检测到的丁酸根含量达到最高。5 青岛农业大学硕士学位论文文献综述3.2三丁酸甘油酯可为肠黏膜细胞供能三丁酸甘油酯属于短链脂肪酸酯，作为酸化剂不易在胃内分解，在肠道中经过胰脂肪酶的作用，分解成丁酸和甘油，并通过丁酸来发挥作用。三丁酸甘油酯作为一种良好的丁酸来源，直达肠道，为肠道发育提供能量和养分，促进肠上皮细胞增殖，促进养分吸收利用[33-35]。进入小肠的丁酸，主要以非离子弥散形式（β-羟基丁酸）被肠黏膜上皮细胞吸收作为能源消耗，或通过肝门静脉系统转运至肝脏和外周组织进一步代谢利用[36]。在肝脏中，丁酸代谢分解成乙酰乙酸盐、谷氨酸和谷氨酰胺，作为肠细胞的重要能量来源。在外周组织中，丁酸可通过迅速氧化用于脂肪合成，也可进入乳腺进行乳脂合成。丁酸具有水脂两亲性，在pH值为4～6时很难被分解，丁酸可以直接通过胃和小肠的酸性环境进入结肠和盲肠，是结肠和盲肠的首选能量来源，约占短链脂肪酸供能的70%[37]。体外细胞培养实验表明，酮体、丁酸、葡萄糖和谷氨酰胺作为结肠细胞的能量来源底物时，结肠细胞首先利用丁酸作为呼吸能源[38]，丁酸是结肠上皮细胞比较偏爱的首选能量来源物质[39]。3.3三丁酸甘油酯有利于改善小肠形态结构小肠是消化道最主要的食物消化部位和营养物质吸收场所，小肠消化吸收的功能单位是肠绒毛，肠绒毛高度、隐窝深度、黏膜厚度和绒隐比是衡量小肠形态结构完整性的重要指标。大量试验研究表明，饲粮中添加三丁酸甘油酯可增加肠绒毛高度及绒隐比，降低隐窝深度，从而有效改善肠道形态结构。Hou等[40]在断奶仔猪饲粮中添加0.1%的三丁酸甘油酯，研究发现试验组仔猪肠道隐窝深度明显降低，回肠绒毛高度与隐窝深度的比值增大，提高了肠道对营养物质的吸收功能。Leeson等[41]研究发现，肉鸡饲料中添加丁酸甘油酯提高了肠绒毛高度，维持了肠组织形态结构完整性。3.4三丁酸甘油酯有利于维持肠黏膜屏障完整性肠道能正常的消化吸收和利用营养物质，关键在于肠黏膜细胞的生长以及黏膜上皮细胞结构的完整性。小肠黏膜由黏膜上皮、固有层及黏膜肌层三部分组成，肠黏膜主要由上皮细胞和杯状细胞构成。仔猪肠上皮细胞的屏障功能，采取的重要的连接方式是紧密连接，紧密连接是决定细胞间通透性的重要因素，可以封闭细胞间隙，阻止肠腔内的抗原通过细胞间隙[42]。常见的组成紧密连接的蛋白质包括胞质分子（ZO-1、ZO-2、ZO-3等）、跨膜蛋白（Occludin和Claudin等）。大量研究表明，三丁酸甘油酯可以维持肠黏膜上皮结构完整性，保证肠黏膜机械屏障功能的正常发挥。丁酸作为肠道首选的快速能量来源，可以有效的促进肠黏膜上皮细胞的增殖和成熟。罗佳捷等[43]研究表明，丁酸6 青岛农业大学硕士学位论文文献综述能促进肠上皮杯状细胞和肝细胞增殖以及蛋白质合成，维持肠上皮细胞形态完整性。刘垒等[44]研究发现，丁酸能修复仔猪断奶应激造成的小肠绒毛的损伤，以维持肠黏膜正常的形态结构。Cresci等[45]对小鼠使用酒精诱导肠道损伤后饲喂三丁酸甘油酯，研究结果表明，三丁酸甘油酯能够保证回肠和结肠近端的紧密连接蛋白的正常表达，保护丁酸受体（GPR109A）和载体（SLC5A8）的表达免受短期酒精接触的影响，从而确保肠道上皮细胞的屏障完整性。3.5三丁酸甘油酯有利于维持肠道微生物菌群肠道内微生物菌群构成一个对抗病原体的重要的保护屏障，正常情况下，动物体微生态菌群维持着动态的平衡，在有益菌群占优势的情况下，可抑制肠道内有害菌的增殖与附着，从而利于维持肠道的正常生理功能。但是当饲粮、环境等因素变化对仔猪产生应激后，肠道微生物菌群的动态平衡就会被打破，导致肠道中潜在性病原体（包括条件致病菌）的定植和入侵。动物饲粮中添加三丁酸甘油酯后，通过调节肠道pH、分解产生代谢产物丁酸、促进机体免疫等方式抑制病原微生物对肠道的损伤，调节肠道菌群，维持肠道微生物菌群的动态平衡，提高动物机体的生物屏障功能。三丁酸甘油酯进入机体后通过分解出丁酸发挥作用。Guilloteau等[46]研究发现，丁酸进入细菌细胞后，被分解为丁酸根离子和氢离子，氢离子浓度升高就会抑制沙门氏菌、大肠杆菌等有害菌的生长，促进乳酸杆菌等耐酸有益菌的繁殖。Namkung等[47]研究表明，饲粮中添加正丁酸和50%的丁酸甘油酯可以抑制禽类的鼠伤寒沙门氏杆菌和产气荚膜梭菌。4三丁酸甘油酯在畜禽生产上的应用4.1在猪生产上的应用效果Roediger首先提出结肠细胞的主要能源是短链脂肪酸，特别是丁酸盐。目前丁酸及其衍生物在猪生产上的应用主要集中在断奶仔猪上。郑荷花等[48]在断奶仔猪日粮中分别添加0.05%、0.1%和0.15%的丁酸钾，研究发现，添加0.05%和0.1%的丁酸钾均可以提高仔猪对营养物质的养分消化率，且添加0.05%的丁酸钾还可以提高仔猪的日采食量和日增重，降低仔猪腹泻率。徐振飞[49]研究发现，在断奶仔猪饲粮中添加丁酸钠，可以提高仔猪的生产性能，提高仔猪肠道消化酶活性和改善肠道形态结构。王纯刚等[50]研究发现，在断奶仔猪饲粮中添加0.3%丁酸钠可缓解断奶应激，改善消化道的结构和功能，提高生长性能。在断奶仔猪饲粮中添加丁酸衍生物不仅可提高仔猪的生长性能，还可以改善其肠道黏膜免疫功能和提高机体免疫力。游金明等[51]研究发现，在断奶仔猪饲粮中添加丁酸钠可以提高其生长性能和免疫水平，且0.1%丁酸钠和0.1%甘露寡糖配伍使用7 青岛农业大学硕士学位论文文献综述效果更加。王继凤等[52]在断奶仔猪饲粮中添加0.1%丁酸钠可以促进断奶仔猪小肠杯状细胞的增殖，改善肠道黏膜形态结构，提高仔猪的生长性能，且使用丁酸钠的效果优于使用抗生素。李丹丹等[53]研究发现饲粮中添加丁酸钠能提高断奶仔猪的生长性能，促进其免疫器官发育，提高仔猪血清免疫球蛋白含量，提高其肠道黏膜分泌型免疫球蛋白Ａ分泌细胞的数量。目前，丁酸盐用作饲料添加剂的有效形式大多采用三丁酸甘油酯。三丁酸甘油酯是一种短链甘油三酸酯，可以口服。有关三丁酸甘油酯在养猪生产上的应用，目前国内外有关这方面的报道文献较少，主要集中在对肠道功能的改进、取代抗生素和乳糖醇、益生素等复合使用的效果等几个方面。郭小华等[54]研究结果表明仔猪饲粮中添加丁酸钠可以提高其生长性能，改善饲料转化效率，提高营养物质的表观消化率。李娇龙[55]在仔猪饲粮中添加0.1%三丁酸甘油酯后，发现能显著缓解LPS多次刺激造成的肝细胞和能量损失。4.2在鸡生产上的应用效果三丁酸甘油酯能够提高肠绒毛高度，促进肠道上皮细胞的增殖，使得养分充分吸收，促进肉仔鸡生长，提高肉品质。王玥等[56]研究肉鸡饲粮中添加三丁酸甘油酯对生长效果的影响，结果表明，添加0.2%的三丁酸甘油酯能显著提高肉鸡平均日增重，提高十二指肠、空肠、回肠的绒毛高度及绒隐比，降低料肉比。邱洪仪等[57]研究三丁酸甘油酯和包被丁酸钠对鸡肉品质的影响，研究表明饲粮中添加三丁酸甘油酯，可缓解LPS刺激引起的肉鸡肉质的变化，较好地提高应激下鸡肉的品质。Mahdavi等[58]研究表明，肉鸡饲粮中添加2g/kg丁酸甘油酯可显著提高肉鸡的饲料转化率和体重。可见，三丁酸甘油酯在鸡生产上的应用也取得了显著的效果。4.3在反刍动物生产上的应用效果Araujo等[59]研究了三丁酸甘油酯代替乳汁对乳牛代谢水平的影响，结果发现，饲料中添加3g/kg三丁酸甘油酯可调节犊牛体内葡萄糖和胰岛素的血流动力学，而不影响其生产性能。Guilloteau等[60]研究表明，在犊牛饲粮中添加丁酸钠，采食后1h内脂肪酶分泌量显著增加，在采食3h后，口服丁酸钠减轻了进食后胰腺分泌物减少的生理状况，同时对血浆肠道调节肽浓度也有微调的作用。Gorka等[61]研究表明，在犊牛饲粮中加入丁酸钠，第7天血浆胰高血糖素样肽-2的浓度和第14天血清总蛋白浓度增加，整个试验期的血糖浓度增加。Wilson等[62]在萨福克羊饲粮中添加丁酸盐，和对照组相比，2.5%丁酸盐组能够使其瘤胃短链脂肪酸浓度极显著提高，且动物生长速度增强，有提高饲料转换率的趋势。8 青岛农业大学硕士学位论文文献综述5研究目的和意义仔猪断奶应是一个平缓的、循序渐进的过程，一般应超过17周[63]。随着现代集约化、规模化养殖技术的实施，大多数猪场为了提高母猪生产力，将仔猪断奶日龄提前至3～4周龄。断奶使仔猪的生活环境、摄入饲粮等瞬间发生变化，由此引起的应激使仔猪肠屏障功能受损，采食量降低[64]，肠绒毛萎缩，对传染性疾病的易感率增加。三丁酸甘油酯作为一种良好的丁酸来源，直达肠道，为肠道发育提供能量和养分，促进肠上皮细胞增殖，促进营养物质吸收利用。本研究旨在探讨饲粮中添加不同水平的三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能、养分表观消化率、血液生化指标、消化酶活性和肠道组织形态结构的影响，以期为三丁酸甘油酯在缓解仔猪断奶应激的作用上可以替代抗生素用作饲料添加剂提供理论依据。9 青岛农业大学硕士学位论文试验一三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能、养分表观消化率的影响试验一三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能、养分表观消化率的影响断奶是仔猪出生后面临的一大难题，断奶应激会使仔猪采食量下降，生长发育受阻，严重时可造成仔猪腹泻，给猪场带来重大经济损失。三丁酸甘油酯(TB)是一种良好的丁酸来源，与其他丁酸盐相比，具有半衰期长、无臭味、安全无毒副作用等特点，在胰脂肪酶的作用下分解为丁酸和甘油，而丁酸和甘油进入动物肠道后可为肠道上皮细胞提供能量，维持肠上皮细胞的数量和结构完整性，同时丁酸可降低肠道pH，抑制肠道有害菌的生长，促进肠道微生态平衡，进而改善肠道的健康状况，增加肠道的营养吸收功能，提高饲粮养分消化率[65]，从而缓解仔猪断奶应激，促进仔猪生长[66]。Hou等[42]研究结果表明，18日龄断奶仔猪饲粮中添加0.5%TB可显著提高断奶仔猪平均日增重，降低料重比和腹泻率。杨玲[67]研究发现，21日龄断奶仔猪饲粮中添加0.15%TB可提高断奶仔猪平均日增重、平均日采食量，降低料重比。同时，TB作为一种潜在的抗生素替代品用作饲料添加剂已经得到越来越广泛的关注。本研究旨在探讨饲粮中添加不同水平三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能和养分表观消化率的影响。1材料与方法1.1试验材料三丁酸甘油酯（TB）由济南海华生物科技有限公司提供。三丁酸甘油酯纯度为45%以上，其余部分均为载体。商品名为美来素。1.2试验动物和饲粮设计试验选择体重相近的21日龄杜×长×大三元杂交（DLY）断奶仔猪200头，随机分为5个处理组，每个处理组5个重复，每个重复8头猪。参照NRC（2012）第11版猪营养需要配制基础饲粮。以饲喂添加40mg/kg杆菌肽锌饲粮的Ⅰ组为对照，试验组（Ⅱ-Ⅴ组）分别饲喂添加0.05%、0.1%、0.15%和0.2%三丁酸甘油酯（TB）的无抗生素饲粮。饲粮组成及营养水平见表1.1。10 青岛农业大学硕士学位论文试验一三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能、养分表观消化率的影响表1.1饲粮组成及营养水平Table1.1Compositionandnutritionlevelofdiets%2）原料组成Ingredientcomposiion含量Content营养水平Nutrientlevels含量Content玉米Corn59消化能（MJ/kg）13.20豆粕Soybeanmeal14粗蛋白质CP20.6鱼粉Fishmeal6钙Ca0.47膨化大豆Extrudedsoybean15磷P0.48豆油Soybeanoil2赖氨酸Lys1.471）预混料Premix41）预混料为每千克饲粮提供：VA18-40万IU，VD35.9-12.5IU，VK329mg，VB121.1mg，VB169mg，核黄素riboflavin145mg，烟酸nicotinicacid775mg，D-泛酸D-pantothenicacid240mg，生物素biotin3.3mg，叶酸folicacid36mg，Cu2.5-5.0g，Fe4.8-18g，Zn2.5-3.7g，Mn0.84-2.5g，Ca12-19%，P3%，Lys6.3%，食盐5-12%。2）消化能为计算值，其余为实测值。1.3饲养管理试验开始前对猪舍进行全面消毒，试验期间按猪场常规管理进行饲养，按照常规免疫接种程序进行疫苗接种，试验猪自由采食、饮水。试验期为50d，试验猪饲喂至70日龄结束试验。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能指标测定分别于21日龄断奶当天、35日龄和70日龄时对试验猪空腹称重，以栏为单位统计试验猪耗料量，计算日采食量（ADFI）、日增重（ADG）、料重比（F/G）。日采食量（g/d·头）=耗料量/（试验天数×头数）；日增重（g/d）=（终测体重-开测体重）/测定期天数；料重比=饲料总消耗量/总增重；1.4.2饲粮养分表观消化率测定在70日龄试验结束时，采用内源指示剂法，采集各试验重复组仔猪新鲜粪便，用10%盐酸固氮，混匀待测。同时采集每组饲料样本，密封后冷冻保存待测。样本置于烘箱中65℃烘干，并用微型粉碎机粉碎后过40目筛，制备成风干样，进而分别测定饲料和粪便中的盐酸不溶灰分、粗蛋白、粗脂肪、钙和磷含量，并计算养分消化率。盐酸不溶灰分测定参照GB/T23742-2009，凯氏定氮法测定粗蛋白含量（GB/T6432-1994），乙醚抽提法测定粗脂肪含量（GB/T6433-2006），高锰酸钾滴定法测定钙含量（GB/T6436-2002），钼黄比色法测定总磷含量（GB/T6437-2002）。按下列公式11 青岛农业大学硕士学位论文试验一三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能、养分表观消化率的影响计算各组饲粮养分表观消化率：饲粮中某养分表观消化率（%）=100%-（A1/A2）×（B2/B1）×100A1：饲粮中3mol/L盐酸不溶灰分含量；A2：粪样中3mol/L盐酸不溶灰分含量；B1：粪样中某养分的含量；B2：饲粮中某养分的含量；1.5数据处理与统计分析采用Excel2000和SPSS19.0统计软件对数据进行处理和统计分析，采用SPSS19.0软件的one-wayANOVA程序进行分析，差异显著时采用LSD法进行多重比较。结果均以“平均值±标准差（SD）”表示。2结果与分析2.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能的影响仔猪21～35日龄和35～70日龄的日增重、日采食量、料重比结果见表1.2和表1.3。由表1.2可知，21日龄时各组体重相近，差异不显著。与对照组相比，21～35日龄阶段饲粮中添加TB的试验组ADG提高，ADFI和F/G降低，试验Ⅲ组、Ⅳ组ADG分别显著提高14.7%、13.9%（P＜0.05），ADFI分别降低9%、8.3%，F/G分别降低24.9%、16.2%。由表1.3可知，35～70日龄阶段饲粮中添加TB的试验组ADG提高，ADFI和F/G降低，差异都不显著，其中试验Ⅴ组ADG提高9.6%，ADFI降低16.9%，F/G降低24.5%。由表1.4可知，21～70日龄阶段饲粮中添加TB的试验组ADG提高，ADFI和F/G降低，差异都不显著，其中试验Ⅴ组ADG提高6.5%，ADFI降低16.8%，F/G降低15.6%。表1.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪21～35日龄生长性能的影响Table1.2EffectsofTBongrowthperformanceof21~35daysofweaningpiglets项目ItemsⅠ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组样本数/头404040404021日龄体重kg7.67±1.867.63±1.527.64±1.817.64±1.717.72±1.9535日龄体重kg13.20±2.4313.30±1.8514.10±2.013.86±2.5613.50±1.92日增重ADG/g367±97b389±91b421±82a418±96a400±78b日采食量ADFI/g600±15627±19546±24550±26554±11料重比F/G1.73±0.101.43±0.351.30±0.041.45±0.351.48±0.06同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P<0.05），相同或无字母表示差异不显著（P>0.05）。下表同。Inthesamerow，valueswithdifferentsmalllettersuperscriptsmeansignificantdifference(P<0.05)andwiththesameorno12 青岛农业大学硕士学位论文试验一三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能、养分表观消化率的影响lettersuperscriptsmeannosignificantdifference(P>0.05).Thesameasbelow．表1.3三丁酸甘油酯对断奶仔猪35～70日龄生长性能的影响Table1.3EffectsofTBongrowthperformanceof35~70daysofweaningpiglets项目ItemsⅠ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组样本数/头303030303035日龄体重kg13.20±2.4313.30±1.8514.10±2.013.86±2.5613.50±1.9270日龄体重kg26.10±5.4526.96±4.1726.86±4.1326.69±5.5227.40±4.45日增重ADG/g456±116499±91474±90472±121500±107日采食量ADFI/g856±26770±25753±28774±25711±30料重比F/G1.88±0.121.54±0.211.59±0.161.64±0.141.42±0.09表1.4三丁酸甘油酯对断奶仔猪21～70日龄生长性能的影响Table1.4EffectsofTBongrowthperformanceof21~70daysofweaningpiglets项目ItemsⅠ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组样本数/头404040404021日龄体重kg7.67±1.867.63±1.527.64±1.817.64±1.717.72±1.9570日龄体重kg26.10±5.4526.96±4.1726.86±4.1326.69±5.5227.40±4.45日增重ADG/g383±81391±58405±58399±71408±70日采食量ADFI/g752±42701±35657±32662±30626±29料重比F/G1.86±0.181.79±0.261.72±0.151.62±0.221.57±0.192.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪养分表观消化率的影响三丁酸甘油酯对断奶仔猪养分表观消化率的影响见表1.5。由表1.5可知，与对照组相比，饲粮中添加TB的试验组提高了饲粮粗蛋白、粗脂肪、钙和磷的表观消化率，其中试验Ⅲ组饲粮粗蛋白、粗脂肪、钙的表观消化率提高最多，分别显著提高9.8%、34.2%、14%（P＜0.05），试验Ⅴ组饲粮磷的表观消化率提高最多，显著提高23.9%（P＜0.05）。13 青岛农业大学硕士学位论文试验一三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能、养分表观消化率的影响表1.5三丁酸甘油酯对断奶仔猪养分表观消化率的影响Table1.5EffectsofTBonapparentnutrientdigestibilityofweaningpiglets项目ItemsⅠ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组样本数/头4040404040粗蛋白CP83.96±2.12b90.33±1.19a92.23±0.45a89.98±0.39a89.22±1.06a粗脂肪EE63.98±3.37b81.23±2.90a85.85±0.26a82.73±1.84a84.62±5.24a钙Ca58.86±0.62b61.83±3.85b67.12±3.85a66.17±2.22a66.97±0.71a磷P54.29±2.12b55.89±2.40b64.95±4.14a64.67±3.58a67.24±2.51a3讨论3.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能的影响生长性能可以反映动物机体对饲料的利用效率和机体的健康营养情况[68]。研究表明，仔猪断奶后，由于受到环境和饲料营养的变化，导致断奶初期仔猪采食量下降，肠道组织形态改变，影响仔猪的消化吸收功能，仔猪生长性能下降。三丁酸甘油酯是一种短链甘油三酸酯，通过胃到达肠道后段，被胰脂肪酶分解生成丁酸和甘油，三丁酸甘油酯通过丁酸发挥作用。有关研究表明，动物饲粮中添加三丁酸甘油酯可以改善机体肠道组织形态结构，促进动物肠道消化和吸收功能，有效提高动物生长性能[69]。Manzanilla等[70]以断奶仔猪为研究对象，发现丁酸显著提高仔猪日增重，降低料肉比。陈国顺等[71]研究断奶仔猪饲粮中添加500g/t包膜丁酸，结果表明丁酸显著提高仔猪断奶1周龄平均日增重。本试验结果表明，在仔猪21～35日龄，饲粮中添加TB的试验组比抗生素组提高了日增重，降低了日采食量和料重比，其中添加0.1%和0.15%TB组日增重分别显著提高14.7%、13.9%，日采食量分别降低9%、8.3%，料重比分别降低24.9%、16.2%。刘统等[72]在饲粮中添加0.2%TB，研究发现TB能显著提高断奶仔猪日增重和日采食量，降低料重比。刘小萍等[73]研究表明，饲粮中添加0.2%丁酸甘油酯，仔猪日增重增加14.6%，日采食量升高7.06%，料重比降低9%。这在三丁酸甘油酯提高日增重和降低料重比趋势上与本试验结果一致，但是在日采食量上与本试验结果相反，这是因为本试验对照组是添加了抗生素的基础饲粮，添加抗生素杆菌肽锌日耗料高，添加了三丁酸甘油酯后日采食量降低，这更能说明三丁酸甘油酯在减少日耗料的基础上增加了日增重。由此可见，21～35日龄仔猪饲粮中添加0.1-0.15%三丁酸甘油酯可提高断奶仔猪生长性能，而且可替代抗生素。本试验结果表明，在仔猪35～70日龄，饲粮中添加TB的试验组提高了日增重，降14 青岛农业大学硕士学位论文试验一三丁酸甘油酯对断奶仔猪生长性能、养分表观消化率的影响低了日采食量和料重比，其中添加0.2%TB组日增重提高9.6%，日采食量和料重比分别降低16.9%、24.5%。说明在仔猪35～70日龄，饲粮中添加TB依然提高仔猪的生长性能，并且作用效果高于抗生素，但是添加TB的浓度高于仔猪21～35日龄饲粮中的添加水平，可能是因为随着断奶日龄的增加，仔猪肠道发育逐渐完善，肠道微生物体系完善，可自体产生一定量的丁酸，所以饲粮中三丁酸甘油酯添加水平增加才能凸显效果。3.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪养分表观消化率的影响饲粮养分消化率在很大程度上依赖于动物肠道的健康状况，而丁酸和甘油进入动物肠道后可为肠道上皮细胞提供能量，维持肠上皮细胞数量和结构完整性，同时丁酸可降低肠道pH，抑制肠道有害菌的生长，促进肠道微生态平衡，进而改善肠道的健康状况，增加肠道的营养吸收功能，提高饲粮养分消化率[74]。本试验中，TB试验组提高了饲粮粗蛋白、粗脂肪、钙和总磷的表观消化率，其中饲粮中添加0.1%TB时粗蛋白、粗脂肪和钙的表观消化率提高最多，分别显著提高9.8%、34.2%、14%，同时饲粮总磷的表观消化率也有所提高。添加0.2%TB组总磷的表观消化率提高最多，显著提高23.9%。这与侯改凤等[75]的研究一致。这表明饲粮中添加三丁酸甘油酯可提高饲粮养分表观消化率。这可能是由于三丁酸甘油酯进入仔猪胃肠道后，在胰脂肪酶的作用下释放出丁酸和甘油，起到了调节肠道营养状况的作用。研究表明，丁酸是一种良好的肠道营养调节剂，丁酸及其盐类具有调节肠道微生态平衡、改善肠道黏膜形态、抑制肠道病原菌繁殖和促进肠道对养分的消化吸收功能[76]。4小结饲粮中添加三丁酸甘油酯可提高日增重，降低日采食量和料重比。仔猪21～35日龄，饲粮中添加0.1%TB效果最好；仔猪35～70日龄，饲粮中添加0.2%TB效果最好。饲粮中添加三丁酸甘油酯提高了粗蛋白、粗脂肪、钙、总磷的表观消化率，添加0.1%TB效果最好。由此，建议21～35日龄仔猪饲粮中添加0.1%TB为宜，35～70日龄仔猪饲粮中添加0.2%TB为宜。15 青岛农业大学硕士学位论文试验二三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理生化指标的影响试验二三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理生化指标的影响动物生长是一个复杂且综合的过程，受到饲粮营养、外界环境，动物机体神经、激素等多方面的影响。饲粮营养水平、饲养管理等外界因素的改变将会导致机体产生一系列生理和病理变化。研究表明，断奶引起仔猪产生一系列应激反应，造成机体代谢和内分泌紊乱，细胞膜受损，进而引起血液化学成分变化。Rushen等[77]研究表明，仔猪断奶后血清中生长激素浓度下降。吴金节等[78]的研究表明，断奶3d的仔猪血清中胰岛素、生长激素及三碘甲腺原氨酸的水平显著降低。冷静等[79]研究指出，与持续哺乳的仔猪相比，28日龄仔猪断奶后7d时血清中IgG、IgA、IgM和TP、ALB、GLOB水平迅速下降。血液所包含的化学成分主要来自消化道的消化分解产物和组织细胞释放的代谢产物。因此，可以通过仔猪血液生理生化指标的变化反映机体消化及代谢机能的生理动态。研究表明，三丁酸甘油酯可以缓解仔猪断奶应激，改善仔猪肠黏膜损伤，保证仔猪肠道正常的消化吸收功能。三丁酸甘油酯可通过调控机体炎症反应，调节炎症反应相关的抗炎因子的表达来提高机体的免疫力。本试验旨在研究饲粮中添加不同水平三丁酸甘油酯对血液生理指标和血清生化指标的影响。1材料与方法1.1试验材料试验材料同试验一。1.2试验动物和饲粮设计试验动物和饲粮设计同试验一。1.3饲养管理饲养管理同试验一。1.4屠宰与样本采集分别于断奶仔猪28日龄、35日龄，每组选择5头（每个重复1头），共选择50头进行屠宰，仔猪屠宰前空腹称重，前腔静脉采血，分离血清。70日龄试验期结束，全部试验猪前腔静脉采血，分离血清。试验期间分离制备的血清用于血液常规指标和血清生理生化指标测定。1.5测定指标及方法16 青岛农业大学硕士学位论文试验二三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理生化指标的影响1.5.1血常规指标测定试验猪前腔静脉采集抗凝血2mL，送到济南市迪安医学检验中心，采用全自动血常规分析仪测定以下指标：白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、血小板（PLT）。1.5.2血清生化指标测定试验猪屠宰前前腔静脉采集抗凝血10mL，静置15min，3000r/min离心10min，分离血清，-20℃保存待测。使用日立7100全自动生化分析仪测定甘油三酯（TG）（GPO-PAP法）、总胆固醇（TC）（CHOD-PAP法）、尿素氮（BUN）（UV-GLDH法）、总蛋白（TP）（双缩脲法）、白蛋白（Alb）（溴甲酚绿法）、IgA、IgM、IgG（免疫比浊法）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）（丙氨酸底物法）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）（IFCC法）、二胺氧化酶（DAO）（紫外比色法）。试剂盒购自四川迈克生物科技股份有限公司，操作步骤按照试剂盒说明书进行。1.6数据处理与统计分析采用Excel2000和SPSS19.0统计软件对数据进行处理和统计分析，采用SPSS19.0软件的one-wayANOVA程序进行分析，差异显著时采用LSD法进行多重比较。结果均以“平均值±标准差（SD）”表示。2结果与分析2.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理指标的影响TB对断奶仔猪血常规指标的影响见表2.1、表2.2和表2.3。由表2.1可知，28日龄时，与对照组相比，试验Ⅲ组白细胞数提高5.1%，红细胞数提高3.7%，血红蛋白显著提高10.4%（P<0.05）；试验Ⅳ组白细胞数显著降低30.8%（P<0.05），红细胞显著降低10%（P<0.05）；TB试验组显著提高血小板数量（P<0.05），试验Ⅲ组、Ⅳ组血小板提高最多，分别提高24.3%、25.4%。由表2.2可知，35日龄时，与对照组相比，随着TB添加浓度的增大，血液中的白细胞数有降低的趋势，试验Ⅴ组白细胞显著降低23.6%（P<0.05）；TB组显著提高了血液中红细胞数（P<0.05），试验Ⅲ组显著提高8.6%；添加TB对血液中血红蛋白含量影响不显著；试验Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组血小板数升高，差异不显著。由表2.3可知，70日龄时，与对照组相比，TB试验组白细胞数降低，试验Ⅱ组、Ⅳ组分别显著降低9.6%、12.9%（P<0.05）；TB试验组红细胞数显著提高，试验Ⅴ组显著提高8.3%（P<0.05）；TB试验组血红蛋白含量显著提高，试验Ⅴ组显著提高5.8%17 青岛农业大学硕士学位论文试验二三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理生化指标的影响（P<0.05）；TB对血小板数影响不显著。表2.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪28日龄血常规指标的影响Table2.1EffectsofTBonbloodroutineindexesof28daysofweaningpiglets组别Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组白细胞WBC21.40±1.54a20.17±3.69a22.51±3.04a14.80±1.57b18.67±1.94a红细胞RBC5.98±0.45a6.10±0.50a6.23±0.17a5.38±0.35b5.90±0.20ab血红蛋白Hb100.75±3.59b97.75±14.98b111.25±2.1a96.25±2.22b103.67±7.77ab血小板计数PLT362.67±15.28b445.0±5.66a451.0±35.17a455.0±37.04a428.0±84.85a同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P<0.05），相同或无字母表示差异不显著（P>0.05）。下表同。Inthesamerow，valueswithdifferentsmalllettersuperscriptsmeansignificantdifference(P<0.05)andwiththesameornolettersuperscriptsmeannosignificantdifference(P>0.05).Thesameasbelow．表2.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪35日龄血常规指标的影响Table2.2EffectsofTBonbloodroutineindexesof35daysofweaningpiglets组别Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组白细胞WBC21.23±0.50a23.07±3.18a18.53±1.89ab19.13±2.52ab16.20±3.63b红细胞RBC5.80±0.35b6.20±0.35a6.30±0.18a6.20±0.16a6.14±0.31ab血红蛋白Hb103.50±3.87102.75±2.06103.0±4.55102.60±2.41102.25±3.78血小板计数PLT325.50±63.25ab270.33±23.71b374.0±42.15a369.75±58.76a417.0±25.46a表2.3三丁酸甘油酯对断奶仔猪70日龄血常规指标的影响Table2.3EffectsofTBonbloodroutineindexesof70daysofweaningpiglets组别Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组白细胞WBC17.80±3.90a16.11±2.33b16.26±3.75ab15.55±2.06b16.92±2.21ab红细胞RBC6.40±0.36c6.86±0.45a6.75±0.47ab6.67±0.42b6.93±0.34a血红蛋白Hb106.83±7.29c110.94±6.92a108.88±6.92bc111.48±6.78ab113.17±5.53a血小板计数PLT422.41±84.12393.54±76.91429.48±91.9425.71±74.62389.65±71.262.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪血清生化指标的影响TB对断奶仔猪血清生化指标的影响见表2.4、表2.5和表2.6。由表2.4可知，28日龄时，与对照组相比，试验Ⅱ组和Ⅲ组总蛋白和白蛋白升高，试验Ⅲ组总蛋白显著提高49%（P＜0.05），白蛋白提高24.1%；试验Ⅲ组尿素氮显著提高22.6%（P＜0.05）；TB试验组葡萄糖含量升高，试验Ⅲ组显著提高37.5%（P＜0.05）；试验Ⅱ组、Ⅲ组总胆固醇升高；TB试验组甘油三酯含量降低；试验Ⅲ组、Ⅳ组IgA分别显著升高33.9%、29.6%（P＜0.05），TB试验组IgG含量显著提高（P＜0.05），试验Ⅲ组IgG升高84.1%，TB试验组IgM含量下降；TB试验组ALT和AST活性降低，18 青岛农业大学硕士学位论文试验二三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理生化指标的影响试验Ⅴ组ALT活性显著降低25.2%（P＜0.05），试验Ⅱ组、Ⅳ组、Ⅴ组AST活性分别显著降低30.2%、18.4%、28.7%（P＜0.05）；试验Ⅳ组、Ⅴ组DAO活性分别显著降低32.1%、33.3%（P＜0.05）。由表2.5可知，35日龄时，TB试验组总蛋白较对照组差异不显著；试验Ⅱ组白蛋白含量显著降低15.1%（P＜0.05）；TB试验组尿素氮含量降低，试验Ⅴ组显著降低31.2%（P＜0.05）；试验Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组葡萄糖含量升高，试验Ⅲ组升高22.7%；TB试验组总胆固醇和甘油三酯含量升高，试验Ⅲ组、Ⅳ组总胆固醇分别显著提高22.4%、19.2%（P＜0.05），甘油三脂分别显著提高52.2%、47.8%（P＜0.05）；TB试验组IgA含量降低，试验Ⅲ组显著降低51.6%（P＜0.05），添加TB对IgG、IgM含量影响不显著；试验Ⅳ组、Ⅴ组AST活性分别显著升高54%、59.3%（P＜0.05）；TB试验组DAO活性升高，试验Ⅳ组、Ⅴ组DAO活性显著升高54%、40.2%（P＜0.05）。由表2.5可知，70日龄，与对照组相比，试验Ⅱ组总蛋白显著降低6%（P＜0.05）；TB试验组白蛋白较对照组差异不显著；TB试验组尿素氮升高，试验Ⅴ组显著升高31.2%（P＜0.05）；试验Ⅲ组、Ⅳ组葡萄糖分别显著升高35.1%、46.7%（P＜0.05）；TB试验组IgA、IgM升高，试验Ⅴ组IgA显著升高55.8%（P＜0.05），IgM显著升高26.5%（P＜0.05）；试验Ⅴ组ALT降低9%，TB试验组AST活性显著降低（P＜0.05），试验Ⅴ组AST活性降低39.2%；TB试验组DAO活性显著降低（P＜0.05），试验Ⅴ组DAO活性降低最大。表2.4三丁酸甘油酯对断奶仔猪28日龄血清生化指标的影响Table2.4EffectsofTBonserumbiochemicalindexesof28daysofweaningpiglets组别Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组IgA1.15±0.10b0.79±0.31c1.54±0.09a1.49±0.10a0.84±0.01bcIgG0.82±0.07c1.32±0.32b1.51±0.29a1.0±0.03bc1.26±0.10bIgM0.20±0.030.14±0.040.18±0.030.20±0.050.18±0.05葡萄糖GLU2.75±0.50b3.36±0.95b3.78±0.49a3.55±0.69b3.31±0.55b总胆固醇TC1.25±0.08a1.42±0.33a1.46±0.29a0.76±0.09b1.10±0.11a甘油三酯TG0.40±0.150.32±0.070.32±0.040.30±0.040.28±0.03总蛋白TP26.73±2.43c33.61±3.76b39.77±3.75a24.93±1.78c25.74±3.22c白蛋白Alb16.96±0.3220.78±2.2321.04±5.3515.49±0.5214.21±1.16尿素氮BUN2.43±0.20b1.71±0.24c2.98±0.39a2.27±0.43b2.14±0.27bc丙氨酸氨基转移酶36.0±4.24a38.61±8.62a36.39±5.63a33.66±6.58ab26.92±3.74bALT天门冬氨酸氨基转移38.0±4.41a36.77±6.55a26.53±4.97b31.02±4.19b27.10±2.52b酶AST二胺氧化酶DAO0.78±0.11a0.70±0.01ab0.70±0.10ab0.53±0.06bc0.52±0.10c19 青岛农业大学硕士学位论文试验二三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理生化指标的影响表2.5三丁酸甘油酯对断奶仔猪35日龄血清生化指标的影响Table2.5EffectsofTBonserumbiochemicalindexesof35daysofweaningpiglets组别Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组IgA4.73±0.33a3.99±0.10ab2.29±0.43b3.69±1.37ab0.86±0.20cIgG1.96±0.291.55±0.161.92±0.441.52±0.301.84±0.19IgM0.26±0.060.30±0.080.28±0.010.30±0.050.23±0.05葡萄糖GLU3.75±0.48ab4.12±0.67ab4.60±0.81a3.95±0.55ab3.48±0.97b总胆固醇TC1.25±0.09b1.26±0.16b1.53±0.2a1.49±0.07a1.40±0.10ab甘油三酯TG0.46±0.08b0.59±0.12ab0.70±0.07a0.68±0.10a0.49±0.03b总蛋白TP37.55±0.7635.12±3.0838.90±1.5738.46±3.8537.50±3.42白蛋白Alb21.07±1.75a17.88±0.44b21.02±1.43a21.50±2.38a20.83±0.97a尿素氮BUN3.14±0.50ab2.55±0.53bc3.0±0.52ab3.32±0.21a2.16±0.34c丙氨酸氨基转移酶63.65±0.9053.22±14.9354.0±9.6962.61±11.5865.74±13.64ALT天门冬氨酸氨基转移51.71±5.30c64.51±8.73b62.20±5.65bc79.57±7.87a82.37±3.13a酶AST二胺氧化酶DAO0.87±0.06b0.90±0.23b1.15±0.24ab1.34±0.05a1.22±0.18a表2.6三丁酸甘油酯对断奶仔猪70日龄血清生化指标的影响Table2.6EffectsofTBonserumbiochemicalindexesof70daysofweaningpiglets组别Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组IgA6.16±2.40b7.05±3.09b9.02±2.60a7.95±1.98ab9.60±3.03aIgG2.12±0.262.11±0.342.17±0.362.22±0.382.05±0.42IgM0.34±0.06bc0.31±0.06c0.39±0.08ab0.42±0.12ab0.43±0.09a葡萄糖GLU3.02±1.06b3.45±0.74b4.08±0.98a4.43±1.10a3.43±0.94b总胆固醇TC2.11±0.392.10±0.332.21±0.282.29±0.312.21±0.22甘油三酯TG0.56±0.160.51±0.100.54±0.110.55±0.150.63±0.18总蛋白TP48.84±6.17a45.92±4.62b49.86±4.26a49.46±4.94a47.40±4.63ab白蛋白Alb25.82±3.5524.36±2.9426.06±2.8026.16±3.3325.14±3.67尿素氮BUN3.78±0.66bc3.82±0.55c4.34±0.85ab4.33±0.87ab4.96±1.12a丙氨酸氨基转移酶79.83±12.38bc82.36±13.14c89.63±11.91a82.89±15.72ab72.62±10.96cALT天门冬氨酸氨基转移91.36±25.51a60.18±12.26b63.32±16.37b61.50±9.97b55.54±12.73b酶AST二胺氧化酶DAO2.0±0.44a1.36±0.33b1.18±0.19bc1.23±0.30bc1.14±0.21c20 青岛农业大学硕士学位论文试验二三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理生化指标的影响3讨论3.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理指标的影响血液在保证动物机体正常的调节功能、新陈代谢和机体内外环境稳定等方面发挥重要作用，血常规检测是临床最常见的检测疾病的项目之一，血常规指标可以反映出仔猪机体健康水平和免疫力情况。白细胞是机体的防御细胞，能吞噬细菌、病毒等异物，在机体抵抗病原的入侵、损伤治愈和对疾病的免疫方面发挥重要功能，白细胞含量高低影响动物免疫力[80]。红细胞是重要的固有免疫细胞，能特异性地识别抗原，发挥免疫粘附作用，清除循环免疫复合物，促进吞噬细胞吞噬作用，并能促进白细胞免疫功能，参与机体免疫调控。血红蛋白含量高低反映机体营养状态，其主要功能是运输呼吸性气体，红细胞数、血红蛋白含量和红细胞压积的高低，可以反映出血液输氧能力的强弱[81]，进而反映机体新陈代谢情况。本试验研究结果表明：在仔猪28日龄，添加0.1%TB组提高了红细胞数和血红蛋白含量，说明21～28日龄添加0.1%TB提高仔猪机体血液运输氧的能力，促进了机体的新陈代谢，进而促进仔猪的生长速率。同时，添加0.1%TB组提高了白细胞数，显著提高血小板数量，提高了仔猪免疫力。在仔猪35日龄，添加三丁酸甘油酯使白细胞数降低，对血红蛋白和血小板含量影响不显著，说明在28～35日龄三丁酸甘油酯的作用效果不显著。在仔猪70日龄，TB试验组白细胞数降低，添加0.2%TB组红细胞数和血红蛋白含量分别显著提高8.3%、5.9%，说明35～70日龄添加0.2%TB对增强仔猪的血液运输氧的能力，加快机体代谢速率，改善机体的营养吸收和健康状态的效果要优于抗生素。3.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪血清生化指标的影响仔猪血液化学成分改变可以反映机体消化代谢机能和器官组织损伤。血清中总蛋白（TP）可以为机体补充蛋白质、提供能量并修补损伤的机体组织，总蛋白浓度高低反映饲粮中蛋白质水平和动物机体蛋白质合成代谢程度。白蛋白（ALB）能维持血浆胶体渗透压并可作为血液循环中低水溶性物质的转运载体。尿素氮（BUN）是蛋白质代谢的主要终末产物，可以准确反映动物机体蛋白质代谢水平和氨基酸之间的平衡状况，当机体摄入高水平蛋白质饲粮时，机体氨基酸代谢旺盛，血清中尿素氮含量就会升高。本试验中，28日龄时，饲粮中添加0.05%TB和0.1%TB组提高了总蛋白和白蛋白含量，添加0.1%TB组尿素氮含量显著提高。杨玲等[67]研究表明，饲粮中添加TB能够提高TP含量，这与本试验结果一致。这说明21～28日龄仔猪饲粮中添加0.1%TB提高了机体对21 青岛农业大学硕士学位论文试验二三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理生化指标的影响饲粮蛋白质的分解代谢，使得血清中总蛋白含量升高，但此时体组织蛋白质合成效率低，使得血清中尿素氮含量保持较高水平。仔猪35日龄和70日龄时，血清总蛋白和白蛋白与对照组相比差异不显著，但35日龄尿素氮含量低于抗生素组，可能是因为该阶段机体蛋白质利用率提高，仔猪机体氮沉积量增加。断奶应激将会对仔猪造成实质性器官组织的细胞膜受损，膜的通透性增加，释放到血液中的酶量增加，使相应的酶活性升高。ALT和AST是动物机体重要的转氨酶，参与非必须氨基酸合成和蛋白质分解代谢及糖脂代谢转换过程。当机体受到断奶应激，造成仔猪机体损伤，肝脏和心机细胞细胞膜受损，血清ALT和AST活性升高。本试验结果表明，仔猪28日龄时，饲粮中添加0.2%TB组ALT活性显著降低25.2%，添加0.1%TB组AST活性显著降低30.2%。这与王萌等[82]的研究一致。杨玲等[67]研究表明，饲粮中添加0.2%三丁酸甘油酯能够降低ALT、AST、ALP的活性。说明仔猪饲粮中添加三丁酸甘油酯可以缓解仔猪断奶应激，保护仔猪肠道的功能，减轻断奶应激引起的肠黏膜损伤，并且在21～28日龄添加0.2%TB的作用效果优于抗生素。35日龄时，血清ALT活性变化不显著，AST活性反而升高，说明在28～35日龄三丁酸甘油酯对仔猪肠道的保护效果低于抗生素，可能是因为在28日龄时屠宰称重对仔猪造成应激。仔猪70日龄，0.2%TB试验组AST活性显著降低，0.2%TB组AST活性降低39.2%，说明在仔猪35～70日龄，饲粮中添加0.2%TB对维持肠道屏障功能的效果要优于抗生素。IgA、IgG、IgM是血液中3种免疫球蛋白，由骨髓B淋巴细胞产生，参与动物机体的体液免疫，血清中免疫球蛋白的含量反映机体免疫力的强弱[83,84]。仔猪断奶后，仔猪获得母源抗体中断，而仔猪本身免疫力很低，导致仔猪体质变弱，抵抗力降低，病原菌容易侵入机体而引起仔猪腹泻，造成较大的经济损失。三丁酸甘油酯是通过调控机体炎症反应，调节炎症反应相关的抗炎因子的表达来提高机体的免疫力[85]。本试验结果表明，仔猪28日龄，添加TB试验组显著提高IgG水平，0.1%TB组、0.15%TB组IgA分别升高33.9%、29.6%，这与王萌等[82]的研究一致。说明三丁酸甘油酯能够提高断奶仔猪的免疫功能，缓解断奶应激造成的免疫力低下，且在21～28日龄，添加0.1%TB提高免疫力的作用效果更大。仔猪35日龄，TB试验组IgA含量降低，添加TB对IgG、IgM含量影响不显著，说明在28～35日龄添加TB提高仔猪免疫力的作用效果降低，可能是因为在28日龄时屠宰称重对仔猪造成应激。仔猪70日龄，添加0.2%TB组IgA、IgM含量分别显著升高55.8%、26.5%，说明35～70日龄，添加0.2%TB对提高断奶仔猪免疫力，改善仔猪免疫系统效果更大。二胺氧化酶（DAO）是存在于哺乳动物肠黏膜上皮细胞绒毛内的细胞内酶，可以催化组胺以及多胺的代谢，对肠黏膜起到保护作用。当肠道黏膜损伤时，黏膜通透性增加，22 青岛农业大学硕士学位论文试验二三丁酸甘油酯对断奶仔猪血液生理生化指标的影响二胺氧化酶进入血液中，使血清中DAO活性升高，二胺氧化酶的活性可以反映出肠道屏障完整性及肠道受损程度[86,87]。本试验结果表明，28日龄时，TB试验组DAO活性降低，0.1%TB组、0.15%TB组DAO活性分别显著降低32.1%、33.3%，说明21～28日龄，添加三丁酸甘油酯保护肠道黏膜，维持肠道屏障完整性的效果大于抗生素。35日龄时，TB试验组DAO活性升高，TB作用效果下降。仔猪70日龄时，TB试验组DAO活性显著降低，0.2%TB组DAO活性显著降低43%，随着断奶日龄的增加，仔猪肠道发育逐渐完善，饲粮中添加三丁酸甘油酯水平增加才能凸显效果。4小结21～28日龄，饲粮中添加0.1%TB提高红细胞、白细胞、血小板数和血红蛋白含量，作用效果高于抗生素。28～35日龄，添加三丁酸甘油酯的作用效果低于抗生素。35～70日龄，饲粮中添加0.2%TB提高红细胞数和血红蛋白含量，作用效果高于抗生素。21～28日龄，饲粮中添加0.1%TB提高血清总蛋白、白蛋白、尿素氮含量和IgA、IgG水平，作用效果高于抗生素；添加TB降低血清ALT和AST活性，0.2%TB组作用效果更大；添加TB降低了血清DAO活性，0.15%TB组作用效果更大。35～70日龄，0.2%TB组ALT和AST活性降低，提高IgA、IgM水平，降低DAO活性，0.2%TB作用效果高于抗生素。由此，建议21～35日龄仔猪饲粮中添加0.1%TB为宜，35～70日龄仔猪饲粮中添加0.2%TB为宜。23 青岛农业大学硕士学位论文试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响小肠是动物机体营养物质吸收的主要场所，小肠消化吸收的单位是肠绒毛，肠绒毛增加了营养物质的吸收面积。小肠形态结构的完整性是肠道吸收营养物质的保证，小肠结构完整性可以通过肠绒毛高度、隐窝深度、黏膜厚度和绒隐比等指标反映。断奶应激导致仔猪肠道组织结构发生变化，绒毛萎缩，隐窝加深，导致营养物质的吸收面积减小，影响肠道养分消化吸收。同时，断奶仔猪肠黏膜屏障受损，通透性增加，影响仔猪肠道内容物消化酶活性和肠道免疫功能。研究表明，饲粮中添加三丁酸甘油酯可提高肠绒毛高度，降低隐窝深度，改善肠黏膜损伤，维护肠组织形态结构完整性。本试验研究仔猪饲粮中添加不同水平三丁酸甘油酯对小肠内容物消化酶活性和肠组织形态的影响，为三丁酸甘油酯对促进肠道消化吸收，促进生长发育提供理论依据。1材料与方法1.1试验材料试验材料同试验一。1.2试验动物和饲粮设计试验动物和饲粮设计同试验一。1.3饲养管理饲养管理同试验一。1.4屠宰与样本采集分别于断奶仔猪28日龄、35日龄，每组选择5头（每个重复1头），共选择50头进行屠宰，屠宰时取试验猪空肠中段内容物于5mL冻存管中，液氮罐速冻，-80℃保存，用于肠道内容物消化酶活性的测定。屠宰时于小肠各段肠道中间分别取1cm的肠段，用于小肠组织形态的观察。1.5测定指标及方法1.5.1肠内容物消化酶活性测定称取空肠内容物1g左右，按质量体积比（g/ml）1：9的比例加生理盐水，用磁力24 青岛农业大学硕士学位论文试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响搅拌器混匀，2500r/min离心5min，取上清液，采用比色法测定肠内容物中麦芽糖酶、蔗糖酶、乳糖酶、胰蛋白酶和脂肪酶活性。试剂盒从南京建成生物科技有限公司购买，按照试剂盒说明书操作。1.5.2小肠组织形态测定取十二指肠、空肠、回肠肠段制作石蜡切片，苏木精-伊红染色（HE染色）、阿利新蓝-高碘酸雪夫氏（AB-PAS）染色、甲苯胺蓝染色后，于10×20倍显微镜下拍照，应用Image-ProPlus6.0软件测量肠绒毛长度、隐窝深度、黏膜厚度，统计杯状细胞、淋巴细胞数。具体检测方法是：1）取每根肠管横断面，统计观察5根最长且排列整齐的绒毛，计数每100个肠黏膜上皮柱状细胞间淋巴细胞、杯状细胞数量和分布；2）统计观察每根肠管横断面的肠壁全层，包括黏膜及黏膜下层、肌层及浆膜层中每100个柱状细胞间的淋巴细胞数量和分布。1.6数据处理与统计分析采用Excel2000和SPSS19.0统计软件对数据进行处理和统计分析，采用SPSS19.0软件的one-wayANOVA程序进行分析，差异显著时采用LSD法进行多重比较。结果均以“平均值±标准差（SD）”表示。2结果与分析2.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪肠内容物消化酶活性的影响TB对断奶仔猪肠内容物消化酶活性的影响见表3.1和表3.2。由表3.1可知，28日龄时，与对照组相比，试验Ⅱ组、Ⅲ组麦芽糖酶活性提高，试验Ⅳ组、Ⅴ组麦芽糖酶活性降低；试验Ⅲ组蔗糖酶活性升高；TB试验组乳糖酶、胰蛋白酶活性均降低，试验Ⅲ组胰蛋白酶活性显著降低24.9%（P＜0.05）；TB试验组脂肪酶活性显著降低（P＜0.05），试验Ⅲ组脂肪酶活性降低比例最小。由表3.2可知，35日龄时，与对照组相比，TB试验组麦芽糖酶和蔗糖酶活性均升高，试验Ⅲ组和Ⅳ组麦芽糖酶活性分别提高24.4%、33.2%，蔗糖酶活性分别提高35.9%、36%；试验Ⅲ组、Ⅳ组乳糖酶活性分别显著提高57.8%、47.3%（P＜0.05），试验Ⅴ组乳糖酶活性显著降低43.5%（P＜0.05）；TB试验组胰蛋白酶活性降低；试验Ⅱ组、Ⅳ组和Ⅴ组脂肪酶活性升高。25 青岛农业大学硕士学位论文试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响表3.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪28日龄肠内容物消化酶活性的影响Table3.1EffectsofTBondigestiveenzymesactivityofintestinalcontentsof28daysofweaningpiglets组别Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组麦芽糖酶437.90±26.35442.74±46.51446.55±74.31404.25±101.52431.78±64.55蔗糖酶37.44±12.3333.28±9.9141.64±37.5931.82±8.8541.17±15.51乳糖酶54.54±35.1641.92±38.7649.77±33.0443.85±58.1437.40±36.97胰蛋白酶4433.65±868.25a3411.46±380.48b3330.97±633.98b4164.4±883.59ab3814.38±990.25ab脂肪酶136.28±24.52a51.72±21.41b55.29±10.03b53.66±40.18b49.84±12.32b同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P<0.05），相同或无字母表示差异不显著（P>0.05）。下表同。Inthesamerow，valueswithdifferentsmalllettersuperscriptsmeansignificantdifference(P<0.05)andwiththesameornolettersuperscriptsmeannosignificantdifference(P>0.05).Thesameasbelow．表3.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪35日龄肠内容物消化酶活性的影响Table3.2EffectsofTBondigestiveenzymesactivityofintestinalcontentsof35daysofweaningpiglets组别Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组麦芽糖酶363.48±119.51413.96±128.46452.02±184.51484.20±39.66393.02±152.58蔗糖酶34.49±9.8536.06±27.1046.87±21.3646.91±22.040.34±17.24乳糖酶31.20±12.77b44.26±29.49ab49.24±21.26a45.95±11.14a17.62±3.73c胰蛋白酶4537.83±634.504170.0±1024.664243.66±1207.364527.20±624.673749.40±783.97脂肪酶33.64±9.95ab34.73±15.39ab29.62±10.29b35.69±14.94ab44.88±10.34a2.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪小肠组织形态的影响TB对断奶仔猪小肠组织形态的影响见表3.3和表3.4。由表3.3可知，28日龄，与对照组相比，十二指肠，TB试验组绒毛长度降低，试验Ⅲ组和Ⅴ组分别显著降低23.1%、25.1%（P＜0.05）；TB试验组隐窝深度升高，差异不显著；TB试验组绒毛/隐窝比显著降低（P＜0.05），试验Ⅲ组和Ⅴ组分别显著降低33.7%、39.4%；试验Ⅱ组和Ⅲ组黏膜厚度降低，试验Ⅳ组和Ⅴ组黏膜厚度升高；TB试验组淋巴细胞数量显著降低（P＜0.05），试验Ⅲ组显著降低46%；试验Ⅲ组杯状细胞数降低37.9%，试验Ⅴ组杯状细胞数升高42%。空肠，试验Ⅱ组和Ⅲ组绒毛长度分别显著升高23.4%、28%（P＜0.05）；TB试验组隐窝深度显著降低（P＜0.05），试验Ⅲ组、Ⅳ组分别显著降低21.1%、23.1%；试验Ⅲ组绒毛/隐窝比显著提高68.1%（P＜0.05）；试验Ⅱ组、Ⅲ组黏膜厚度分别显著升高30.9%、34.3%（P＜0.05）；试验Ⅲ组淋巴细胞和杯状细胞数分别显著升高37.3%、43.9%26 青岛农业大学硕士学位论文试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响（P＜0.05）。回肠，TB试验组绒毛长度升高，试验Ⅲ组、Ⅳ组分别显著升高25.4%、21.5%（P＜0.05）；TB试验组隐窝深度显著降低（P＜0.05），试验Ⅳ组降低19.9%；TB试验组绒毛/隐窝比显著增大（P＜0.05），试验Ⅲ组、Ⅳ组分别显著升高31.4%、32.5%；TB试验组黏膜厚度显著升高（P＜0.05），试验Ⅲ组升高21.6%；TB试验组淋巴细胞和杯状细胞数升高，较对照组无显著差异，试验Ⅲ组淋巴细胞和杯状细胞分别升高26.9%、12.7%。由表3.4可知，35日龄，与对照组相比，十二指肠，随着TB浓度的增加，绒毛长度先升高后降低，试验Ⅲ组绒毛长度显著升高19.6%（P＜0.05）；TB试验组隐窝深度较对照组差异不显著；试验Ⅲ组、Ⅳ组绒毛/隐窝比分别升高9.3%、17.1%；试验Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组黏膜厚度显著提高（P＜0.05）；TB试验组淋巴细胞和杯状细胞数升高，试验Ⅲ组、Ⅳ组淋巴细胞分别升高34.4%、26%，试验Ⅴ组杯状细胞数显著升高42.9%（P＜0.05）。空肠，TB试验组绒毛长度升高，差异不显著；TB试验组隐窝深度降低，试验Ⅴ组显著降低16.9%（P＜0.05）；试验Ⅲ组绒毛/隐窝比升高21.3%；试验Ⅲ组黏膜厚度升高6.3%，试验Ⅳ组黏膜厚度显著降低16.6%（P＜0.05）；试验Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组淋巴细胞显著升高（P＜0.05），试验Ⅲ组显著升高33.1%；试验Ⅴ组杯状细胞数显著升高46.7%（P＜0.05）。回肠，TB试验组绒毛长度升高，差异不显著；TB试验组隐窝深度降低，试验Ⅲ组、Ⅳ组隐窝深度分别显著降低18.9%、12.7%（P＜0.05）；试验Ⅲ组绒毛/隐窝比显著升高33.3%（P＜0.05）；TB试验组黏膜厚度降低，试验Ⅳ组显著降低21.7%（P＜0.05）；试验Ⅲ组、Ⅳ组淋巴细胞数分别显著降低21.4%、37.6%（P＜0.05）；试验Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组杯状细胞分别显著升高52.5%、49.1%、36.6%（P＜0.05）。27 青岛农业大学硕士学位论文试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响表3.3三丁酸甘油酯对断奶仔猪28日龄小肠组织形态的影响Table3.3EffectsofTBonthesmallintestinaltissuemorphologyof28daysofweaningpiglets组别Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组十二指肠绒毛长度μm404.43±15.25a346.96±11.53b310.95±29.55c360.28±39.75b303.0±20.41c隐窝深度μm110.83±3.02116.90±16.79125.63±14.97117.32±2.13132.70±10.70绒毛/隐窝3.98±0.48a2.92±0.48bc2.64±0.28bc3.25±0.36b2.41±0.57c黏膜厚度μm722.85±66.10a594.10±27.09b698.25±33.66ab775.70±87.67a751.18±78.44a淋巴细胞43.33±4.21a29.15±5.26b23.40±2.20b37.10±7.32a30.80±4.45b杯状细胞6.55±2.44ab6.47±1.10ab4.07±2.72b7.93±3.06a9.30±0.71a空肠绒毛长度μm375.63±68.10b463.60±50.21a480.80±44.80a346.78±26.92b324.65±37.17b隐窝深度μm138.60±12.40a115.97±6.74b109.40±3.69b106.53±4.83b110.43±5.29b绒毛/隐窝2.73±0.44b3.08±0.19b4.59±0.36a3.05±0.19b2.65±0.30b黏膜厚度μm521.23±22.04b682.48±100.23a699.95±71.41a614.0±76.39ab623.03±9.96ab淋巴细胞23.45±3.14b28.33±3.02a32.20±2.66a22.20±2.36b23.95±1.53b杯状细胞4.40±1.12ab4.47±2.0ab6.33±0.31a2.25±0.66c3.45±1.32bc回肠绒毛长度μm326.98±22.5b352.0±24.11b409.87±9.84a397.43±43.71a349.3±21.25b隐窝深度μm130.65±8.54a112.05±5.58b110.85±4.36b104.67±5.19b107.30±10.23b绒毛/隐窝2.55±0.24c3.15±0.29a3.35±0.25b3.38±0.41b3.23±0.22ab黏膜厚度μm480.25±32.97b572.80±36.05a583.83±54.7a567.78±49.54a556.4±62.99a淋巴细胞25.0±2.4228.13±5.6631.73±5.0226.87±3.7525.25±3.07杯状细胞10.20±0.4010.40±1.4211.50±3.010.20±0.5610.33±4.2328 青岛农业大学硕士学位论文试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响表3.4三丁酸甘油酯对断奶仔猪35日龄小肠组织形态的影响Table3.4EffectsofTBonthesmallintestinaltissuemorphologyof35daysofweaningpiglets组别Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组十二指肠绒毛长度μm346.78±16.19b359.17±34.98ab414.60±7.66a402.80±4.12ab343.33±24.39b隐窝深度μm128.90±8.02134.98±11.26138.63±17.70126.75±8.89137.55±14.21绒毛/隐窝2.58±0.38ab2.57±0.18b2.82±0.39ab3.02±0.29a2.47±0.22b黏膜厚度μm426.63±52.07c414.0±97.79c929.57±26.20a612.50±70.27b795.87±50.04b淋巴细胞30.05±6.0930.85±0.7240.40±0.6937.85±6.9532.85±3.15杯状细胞5.27±2.08b5.53±1.30b5.90±1.27b6.0±2.10b7.53±2.86a空肠绒毛长度μm354.05±32.54364.78±15.17412.53±45.02358.05±25.57406.77±45.46隐窝深度μm141.60±17.99a125.38±5.99ab126.03±9.85ab139.60±4.20a117.67±5.31b绒毛/隐窝2.72±0.282.72±0.343.30±0.482.33±0.152.48±0.15黏膜厚度μm657.37±31.33ab623.05±42.25b698.55±36.57a548.37±44.28c685.70±41.79a淋巴细胞30.2±2.19b36.73±4.12a40.20±4.54a39.20±2.80a26.45±2.57b杯状细胞3.0±0.404.07±0.613.30±0.202.47±0.234.40±1.74回肠绒毛长度μm357.37±43.46359.07±16.79387.67±22.0367.30±4.10371.30±55.85隐窝深度μm148.35±14.95a143.97±10.97ab120.33±7.39c129.50±8.35bc136.33±9.80abc绒毛/隐窝2.58±0.41b2.43±0.30b3.44±0.39a2.76±0.71ab2.80±0.45ab黏膜厚度μm635.65±40.79a592.90±17.41a520.90±57.98ab498.0±19.55b562.80±30.51ab淋巴细胞33.15±3.21a31.47±2.60a26.05±3.57b20.67±1.47c29.35±3.26ab杯状细胞8.0±0.4b7.75±0.96b12.20±1.04a11.93±1.10a10.93±0.81a2.3肠黏膜光镜观察仔猪28日龄，由图3-1可知，十二指肠绒毛呈叶状，TB试验组比对照组绒毛长度变短，淋巴细胞和杯状细胞数减少；图3-2和图3-3表明，空肠绒毛呈指状，回肠绒毛细而短，试验Ⅲ组绒毛结构比对照组更为完整，绒毛顶端较少出现脱落现象，绒毛更长更粗壮。仔猪35日龄，由图3-4、图3-5、图3-6可知，试验Ⅲ组十二指肠绒毛长度明显比对照组更长，排列紧密；试验组空肠和回肠比对照组绒毛长度增长不明显。29 青岛农业大学硕士学位论文试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响AB图3-1断奶仔猪28日龄十二指肠组织形态（10×20，HE染色）Fig.3-1Intestinalmorphologyofduodenumof28daysoldweaningpiglets注：A：抗生素组，B：试验Ⅲ组比例尺100μmAB图3-2断奶仔猪28日龄空肠组织形态（10×20，HE染色）Fig.3-2Intestinalmorphologyofjejunumof28daysoldweaningpiglets注：A：抗生素组，B：试验Ⅲ组比例尺100μmAB图3-3断奶仔猪28日龄回肠组织形态（10×20，HE染色）Fig.3-3Intestinalmorphologyofileumof28daysoldweaningpiglets注：A：抗生素组，B：试验Ⅲ组比例尺100μm30 青岛农业大学硕士学位论文试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响AB图3-4断奶仔猪35日龄十二指肠组织形态（10×20，HE染色）Fig.3-4Intestinalmorphologyofduodenumof35daysoldweaningpiglets注：A：抗生素组，B：试验Ⅲ组比例尺100μmAB图3-5断奶仔猪35日龄空肠组织形态（10×20，HE染色）Fig.3-5Intestinalmorphologyofjejunumof35daysoldweaningpiglets注：A：抗生素组，B：试验Ⅲ组比例尺100μm31 青岛农业大学硕士学位论文试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响AB图3-6断奶仔猪35日龄回肠组织形态（10×20，HE染色）Fig.3-6Intestinalmorphologyofileumof35daysoldweaningpiglets注：A：抗生素组，B：试验Ⅲ组比例尺100μm3讨论3.1三丁酸甘油酯对断奶仔猪肠内容物消化酶活性的影响消化酶是动物机体消化营养物质的基础，消化酶活性的高低反映机体消化系统的功能。胰蛋白酶在蛋白质的水解过程中起重要作用，消化饲料中的氨基酸。饲料中的脂肪在脂肪酶的作用下分解为甘油、脂肪酸、甘油单酯被机体直接吸收利用。麦芽糖酶、蔗糖酶、乳糖酶是仔猪小肠中最重要的3种碳水化合物分解酶，分别将麦芽糖、蔗糖和乳糖水解为相应的单糖被动物直接吸收。肠内容物的pH影响小肠消化酶的活性和分泌量，有机酸可以通过降低断奶仔猪肠道环境pH值，提高小肠消化酶活性[88]，增强仔猪消化功能，进而促进仔猪生长发育。Dagorn等[89]研究发现，仔猪初生后小肠内蔗糖酶和麦芽糖酶活性极低，肠乳糖酶活性占优势，活性较高，仔猪断奶后导致乳糖酶的活性持续降低，而蔗糖酶和麦芽糖酶活性迅速升高。本试验结果表明，28日龄和35日龄，0.1%TB组麦芽糖酶活性都高于抗生素组，这与胡杰等[90]研究饲喂0.5%三丁酸甘油酯日粮使断奶仔猪回肠麦芽糖酶的活性提高了69.83%（P>0.05）的结果相似。邱洪仪等[57]研究表明，日粮中添加500mg/kg三丁酸甘油酯，空肠麦芽糖酶活性比对照组提高了22.77%（P<0.01）。28日龄，0.1%TB组蔗糖酶活性高于抗生素组，35日龄，0.1%TB组、0.15%TB组蔗糖酶活性比抗生素组升高显著。说明添加三丁酸甘油酯使麦芽糖酶和蔗糖酶活性提高，促进仔猪肠道对淀粉等碳水化合物的分解与利用，提高仔猪肠道消化吸收能力[91]，并以0.1%TB浓度为最佳添32 青岛农业大学硕士学位论文试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响加水平，作用效果优于抗生素。28日龄，TB试验组乳糖酶、胰蛋白酶和脂肪酶活性均低于抗生素组，0.1%TB组乳糖酶和脂肪酶降低比例最小，0.15%TB组胰蛋白酶降低比例最小；35日龄，TB试验组乳糖酶活性高于抗生素组，0.1%TB组乳糖酶活性升高最大，0.1%TB组脂肪酶活性显著低于抗生素组，TB试验组在提高胰蛋白酶活性上与抗生素组无明显差异。这说明添加TB提高胰蛋白酶和脂肪酶活性的效果低于抗生素，三丁酸甘油酯主要提高饲粮中碳水化合物的分解利用，对提高饲粮中脂肪的分解代谢的效果要低于抗生素。3.2三丁酸甘油酯对断奶仔猪小肠组织形态的影响小肠是动物机体营养物质吸收的主要场所，小肠消化吸收的单位是肠绒毛，肠绒毛是小肠的上皮和固有层向肠腔隆起形成的指状突起，增加了营养物质的吸收面积。小肠形态结构的完整性是肠道吸收营养物质的保证，小肠结构完整性可以通过肠绒毛高度、隐窝深度、黏膜厚度和绒隐比等指标反映。只有成熟的肠绒毛上皮细胞才具有吸收营养物质的功能，隐窝加深表明肠绒毛上皮成熟细胞减少。绒毛/隐窝比可以反映小肠上皮细胞的更新速度，代表小肠的消化吸收功能的状态，绒隐比升高，说明小肠的消化吸收功能加强[92]。本试验结果表明，28日龄，添加三丁酸甘油酯回肠和空肠绒毛长度显著提高（P＜0.05），回肠和空肠隐窝深度显著降低（P＜0.05），0.1%TB组回肠绒毛长度增加最大，0.05%TB组和0.1%TB组空肠绒毛长度增加最大，0.1%TB组回肠隐窝深度降低显著，0.15%TB组空肠隐窝深度降低显著。TB试验组回肠和空肠绒隐比高于抗生素组，0.05%TB组绒隐比增大显著。杨玲等[67]研究表明，添加0.15%三丁酸甘油酯回肠和空肠绒毛长度显著升高（P＜0.05），隐窝深度显著降低（P＜0.05），与本试验结果一致。胡杰等[90]对仔猪日粮中添加三丁酸甘油酯研究发现，仔猪肠绒毛高度增加9.46%，隐窝深度显著降低36.12%（P<0.05），绒隐比提高73.16%（P<0.05）。这说明饲粮中添加三丁酸甘油酯可以提高肠绒毛高度，降低隐窝深度，提高绒隐比，有效改善肠道组织形态，促进肠道消化吸收，并且作用效果要优于抗生素。选择以0.1%或0.15%TB为添加水平。而添加三丁酸甘油酯后，十二指肠绒毛长度较抗生素组降低，隐窝深度较抗生素组升高，绒隐比也低于抗生素组，可能是因为三丁酸甘油酯主要是在后肠段分解为丁酸发挥作用，在十二指肠中的作用效果要低于抗生素。35日龄时，TB组回肠和空肠绒毛长度高于抗生素组，差异不显著（P＞0.05），TB组回肠和空肠隐窝深度低于抗生素组，0.1%TB组降低隐窝深度的效果最明显；0.1%TB组显著提高回肠绒隐比（P＜0.05）。说明28～35日龄，添加三丁酸甘油酯依然比抗生素更好的提高肠绒毛长度，降低隐窝深度，33 青岛农业大学硕士学位论文试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响增加营养物质吸收面积，促进肠道消化吸收功能，以添加0.1%TB浓度的饲粮效果最好。本试验研究结果表明，28日龄，TB试验组回肠和空肠黏膜厚度显著高于抗生素组（P＜0.05），0.1%TB组回肠和空肠黏膜厚度升高最大。这与Piva等[69]的研究结果一致。这主要是由于肠上皮细胞、黏膜细胞和免疫细胞的快速增生，使得肠壁和黏膜厚度增加，同时还可增强肠绒毛的活力，促进营养成分消化吸收[93]。35日龄，TB试验组回肠和空肠黏膜厚度比抗生素组降低，说明添加TB在断奶两周后作用效果低于抗生素。绒毛上皮淋巴细胞存在于肠上皮细胞之间，靠近基底膜，是肠道淋巴组织中最先接触的免疫细胞，构成肠道免疫的第一道防线。受到应激刺激后，上皮淋巴细胞能迅速增殖，释放多种细胞因子，防御肠道病原的入侵[94]。杯状细胞存在于肠上皮细胞表面，断奶应激时杯状细胞能分泌出粘液保护肠上皮细胞，阻止外来有害物质的进入，增强肠上皮的屏障功能。肠道后段，上皮细胞表面的杯状细胞逐渐增多。如果断奶应激得不到有效的缓解，会导致杯状细胞的减少。仔猪断奶应激使仔猪肠道形态结构改变，绒毛萎缩[95-97]，隐窝增生加深，减小营养物质吸收面积，肠壁组织受损，影响了肠道消化吸收功能，进而影响仔猪生长发育。研究表明，饲料中添加三丁酸甘油酯可以有效促进肠绒毛生长，降低隐窝深度，改善肠道组织的损伤，促进小肠的消化吸收。本试验中，28日龄，添加三丁酸甘油酯回肠和空肠淋巴细胞和杯状细胞数量增加，0.1%TB组淋巴细胞升高显著，十二指肠淋巴细胞和杯状细胞数降低。35日龄，TB试验组回肠淋巴细胞低于抗生素组，空肠淋巴细胞高于抗生素组，0.1%TB组升高显著（P＜0.05），TB组空肠和十二指肠杯状细胞数增加。这说明仔猪饲粮中添加三丁酸甘油酯可增强仔猪肠道免疫功能，并以添加0.1%TB效果最好。这可能是因为添加三丁酸甘油酯抑制了淋巴细胞和杯状细胞的凋亡，促进其增殖，从而提升仔猪机体免疫功能，对机体肠道起到防御保护作用。4小结28日龄，0.1%TB组麦芽糖酶和蔗糖酶活性高于抗生素组，乳糖酶、胰蛋白酶和脂肪酶活性低于抗生素组；35日龄，0.1%TB组麦芽糖酶活性高于抗生素组，0.1%TB组、0.15%TB组蔗糖酶和乳糖酶活性高于抗生素组。28日龄，添加三丁酸甘油酯提高了回肠和空肠绒毛长度，降低了回肠和空肠隐窝深度，提高了黏膜厚度、淋巴细胞和杯状细胞数量。0.1%TB组空肠和回肠段绒毛长度增加最大，回肠隐窝深度降低显著，0.1%TB组黏膜厚度、淋巴细胞和杯状细胞较抗生素组提高。35日龄，添加三丁酸甘油酯提高了回肠和空肠绒毛长度，降低了隐窝深度和黏膜厚度，0.1%TB组降低隐窝深度的效果最明显；0.1%TB组提高了空肠淋巴细胞。34 青岛农业大学硕士学位论文试验三三丁酸甘油酯对断奶仔猪消化酶活性和肠组织形态的影响综上所述，建议21～35日龄断奶仔猪饲粮中三丁酸甘油酯的添加水平为0.1%。35 青岛农业大学硕士学位论文全文结论全文结论1．饲粮中添加TB提高了日增重，降低了日采食量和料重比，同时提高了饲粮粗蛋白、粗脂肪、钙、总磷的表观消化率。仔猪21～35日龄，饲粮中添加0.1%TB效果最好；仔猪35～70日龄，饲粮中添加0.2%TB效果最好。2．21～28日龄，饲粮中添加0.1%TB提高红细胞、白细胞、血小板数和血红蛋白含量，提高血清总蛋白、白蛋白、尿素氮含量和IgA、IgG水平，降低血清ALT、AST和DAO活性。35～70日龄，饲粮中添加0.2%TB提高红细胞数和血红蛋白含量，提高IgA、IgM水平，降低血清ALT、AST和DAO活性。3．饲粮中添加0.1%TB提高了麦芽糖酶和蔗糖酶活性，提高了回肠和空肠绒毛长度，降低了回肠和空肠隐窝深度，提高了黏膜厚度、淋巴细胞和杯状细胞数量。综合各项指标，三丁酸甘油酯可替代抗生素作为饲料添加剂缓解仔猪断奶应激，建议在仔猪21～35日龄饲粮中添加0.1%TB，在仔猪35～70日龄饲粮中添加0.2%TB。36 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青岛农业大学硕士学位论文缩略语对照表英文缩写词表Abbreviationwordstable英文缩写英文全称中文全称TBTributyrin三丁酸甘油酯ADGAveragedailygain平均日增重ADFIAverageDailyFeedIntake平均日采食量CPCrudeprotein粗蛋白EEEtherextraction粗脂肪WBCWhitebloodcells白细胞RBCRedbloodcells红细胞HbHemoglobin血红蛋白PLTPlatelet血小板TPTotalprotein总蛋白AlbAlbumin白蛋白GLOGlobulin球蛋白BUNBloodureanitrogen尿素氮TCTotalcholesterol总胆固醇TGTriglycerides甘油三脂GLUGlucose葡萄糖ALTAlanineaminotransferase丙氨酸氨基转移酶ASTAspartateaminotransferase天冬氨酸氨基转移酶DAODiamineoxidase二胺氧化酶IgAImmunoglobulinA免疫球蛋白AIgGImmunoglobulinG免疫球蛋白GIgMImmunoglobulinM免疫球蛋白M42 青岛农业大学硕士学位论文导师组意见导师组意见导师组已通过的论文审查，同意并推荐其参加硕士学位论文答辩。导师：导师组成员：年月日43 青岛农业大学硕士学位论文致谢致谢时光荏苒，硕士三年的时光既漫长又短暂，其中充满了酸甜苦辣，更有收获和成长。感谢每一位尊敬的老师和亲爱的同学陪我一起度过这美好时光。该论文是在我的导师李文立教授和黄保华研究员、呼红梅研究员的悉心指导下完成的。在此论文即将完成之际，向我的导师和所有关心我、帮助我的老师、同学致以从高的敬意和由衷的感谢。本课题是在山东省农业科学院畜牧兽医研究所黄保华所长、呼红梅研究员、朱荣生主任的大力主持下，在山东省畜禽疫病防治及繁育重点实验室完成的，感谢老师们的支持和照顾！特别感谢黄保华老师在我研究生期间给我的指导，黄老师博大的胸怀、严谨治学的态度和大局观使我获益颇多，是我成长路上的一盏明灯。在此特别感谢呼红梅老师，从课题的选择，试验的进行，直至论文的最终完成，老师都始终给予我耐心的指导和支持，我取得的每一点成绩和进步都凝聚着呼老师的汗水和心血。老师开阔的视野、精益求精的工作作风，深深地感染和激励着我。特别感谢王怀中老师、孙守礼老师、王建才、赵雪艳、成珊、沈瑞玲等对我试验上的支持和帮助。特别感谢我的父母，感谢他们对于我的理解和支持；感谢所有爱我的家人，感谢他们对我的鼓励。最后，我要向百忙之中参与审阅、评议本论文的各位老师、向参与本人论文答辩的各位老师表示由衷的感谢。人生的每个阶段都值得好好珍惜，这段美好岁月，因为有你们的关心和帮助，我很幸福。我会更加勤奋学习、认真研究，我会努力做得更好。把最美好的祝福献给你们，愿永远健康、快乐！齐波2017年6月20日44 青岛农业大学硕士学位论文作者简介作者简介齐波，男，1990年1月出生，汉族，山东临沂人。2010年9月考入青岛农业大学动物科技学院动物医学专业，2014年本科毕业，获农学学士学位。2016年9月，考入青岛农业大学动物科技学院动物营养与饲料科学专业攻读硕士学位，师从李文立教授。2016年3月至2018年6月在山东省畜禽疫病防治及繁育重点实验室进行硕士课题研究。研究方向为单胃动物营养。发表论文：[1]齐波,朱荣生,王怀中,等.测定猪不同组织基因表达时RT-PCR内参基因的选择[J].家畜生态学报,2017,38(6):8-12.45