重楼单体PP-22抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖分子机制与不同温度干预研究

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：__________UDC：___________重楼单体PP-22抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖分子机制与不同温度干预研究姓名：谭桂香学号：2111576017院系：护理学院学位类型：专业学位专业：护理研究方向：肿瘤护理导师：王希成教授论文提交日期：2018年3月21日论文答辩日期：2018年5月21日学位授予单位：广东药科大学二O一八年三月ThemechanismofPP-22andthetemperatureinterventiononthen

2、asopharyngealcarcinomaCNE-2cellline.Candidate：TanGuixiangStudentID：2111576017Affiliation：SchoolofnursingAcademicDegreeApliedfor：professionaldegreeofnursingSpeciality：OncologynursingSupervisor：Prof.WangXichengAssistantSupervisor：Prof.JiangJianweiDayofDefence：M

3、ay2018Degree-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversityMay2018II广东药科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，系我个人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。除文中已特别加以标注和致谢的地方外，不包含其它个人或机构已经发表或撰写过的研究成果。对本研究做出贡献的其它个人和集体，均已在文中明确说明和致谢。本人充分意识到本声明的法律结果完全由本人承担。学位论文使用授权的声明本人完全了解广东药科大学有关保留和使

4、用学位论文的规定，学校有权保留和向有关部门或机构送交本论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库，可以采用影印、缩印或其它复印手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后适用本声明。III重楼单体PP-22抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖的分子机制与不同温度干预研究摘要目的本研究探讨重楼单体PP-22诱导CNE-2细胞凋亡与自噬发生的分子机制及不同温度联合药物作用CNE-2细胞的凋亡、克隆形成能力情况，旨在为临床工作中对鼻咽癌放疗后患者的用药护理工作明确其更深层次的机

5、理，同时为指导临床上运用护理措施来缓解放疗后出现口腔黏膜肿痛等并发症的护理工作进行深层次的分子机制研究提供思路和理论支撑。方法用不同浓度的PP-22按时间梯度作用于鼻咽癌CNE-2细胞株，MTT方法和EDU掺入法检测PP-22对CNE-2细胞增殖的影响；AnnexinV-FITC/PI双染色法检测PP-22对CNE-2细胞的凋亡水平；Hoechst33258染色法检测PP-22对鼻咽癌CNE-2细胞形态学的变化；激光共聚焦显微镜术免疫荧光方法观察LC3点状聚集；Westernblot检测PP-22作用于CNE-2

6、细胞状态下的凋亡与自噬相关蛋白表达水平的变化；p38MAPK激酶及其下游蛋白的表达水平变化；内质网应激ER-stress的相关蛋白表达水平的变化和Stat3转录因子及其下游相关蛋白的表达水平变化。运用冷热疗法的原理，设置不同温度状态下，检测PP-22对CNE-2细胞的凋亡影响与克隆形成能力的影响。结果MTT结果显示，随着药物浓度时间梯度的增加，PP-22对CNE-2细胞增殖抑制作用呈明显的剂量依赖性及时间依赖性。EDU检测结果进一步说明PP-22抑制CNE-2细胞的增殖。AnnexinV-FITC/PI双染色法检

7、测结果显示，随着PP-22浓度的增加，CNE-2细胞的凋亡比例也逐渐增加，在0μM到4μM的时候，凋亡率从6.67%增加到23.18%。IVHoechst33258染色显示在PP-22的作用下，细胞核出现固缩、裂解、部分形成凋亡小体。Westernblot实验结果显示PP-22作用下，CNE-2细胞凋亡相关蛋白表达水平发生变化，凋亡抑制蛋白Bcl-2，Bcl-xL表达减少，促凋亡蛋白Bax，Bak表达基本不变；caspase3，caspase9，PARP表达减少，cleaved-caspase3，cleaved-

8、caspase9，cleaved-PARP表达增加；Westernblot实验结果显示随着PP-22浓度的增加，PERK，BIP，PDI，EROL-LA，IRE-LA，CHOP，Beclin-1和LC3-Ⅱ表达水平逐渐增加，p62水平逐渐下降，CNE-2细胞自噬增加。激光共聚焦显微镜术观察LC3出现点状聚集。p-ERK1/2表达减少，p-p38表达水平增加，ERK，JNK