下调着丝粒蛋白e的基因表达对升高泛素蛋白酶抑制剂lactacystin诱导pc12细胞凋亡率的机制探索

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1、硕士学位论文下调着丝粒蛋白E的基因表达对升高泛素蛋白酶抑制剂lactacystin诱导PC12细胞凋亡率的机制探索ThemechanismofapoptosisinPDcellmodelwhichhavebeendown-regulatingtheexpressionofCENP-Egene研究生：陆菲导师：邵明副教授专业：神经病学所在医院：广州医科大学第一附属医院广州医科大学·广州2013年5月目录中文摘要............................................................1英文摘要

2、............................................................3前言..............................................................5材料与方法..........................................................7实验结果...........................................................17讨论..............

3、...............................................21结论.............................................................27参考文献...........................................................28综述.............................................................33在读硕士期间发表论文.................

4、..............................42致谢.............................................................43学位论文原创性声明.................................................44学位论文知识产权权属声明...........................................44关于学位论文使用授权的说明.........................................44中

5、文摘要下调着丝粒蛋白E的基因表达对升高泛素蛋白酶抑制剂lactacystin诱导PC12细胞凋亡率的机制探索硕士研究生：陆菲导师：邵明副教授中文摘要1、目的：探索下调着丝粒蛋白E引起神经元样分化的PC12细胞凋亡的机制，以及与蛋白酶抑制剂协同作用下介导PC12细胞凋亡的途径，为研究PD发病机制提供理论依据。2、方法：运用RNA干扰技术，人工合成下调CENP-E的shRNA-CENP-E质粒，通过脂质体转染法进行转染。采用体外培养的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（adrenochromaffino，PC12）细胞株，经神经生长因子（NGF）诱导24

6、小时形成神经元样分化的细胞。按照以下实验分组处理细胞：A组：空白对照组（PC12细胞）；B组：空载体转染组（空载体转染PC12细胞）；C组：shRNA-CENP-E载体转染组（shRNA-CENP-E载体转染PC12细胞组）；D组：PD模型组（PC12细胞+lactacystin组）；E组：空载体转染PD模型组（lactacystin+空载体转染PC12细胞组）；F组：shRNA-CENP-E载体转染PD模型组（lactacystin+shRNA-CENP-E载体转染PC12细胞组）。使用荧光定量PCR检测CENP-E在mRNA水平的表

7、达、流式细胞技术检测细胞周期、蛋白印迹法检测Caspase-8、Caspase-9的表达。3、结果：1、荧光定量PCR结果显示：构建的shRNA-CENP-E质粒使PC12细胞中CENP-EmRNA水平较对照组明显降低（P＜0.05），蛋白酶抑制剂诱导的PD细胞模型中CENP-EmRNA表达也较对照组明显降低（P＜0.05）。1广州医科大学院硕士学位论文2、光镜下观察发现NGF能使PC12细胞长出突触，呈神经元样分化。流式细胞技术结果显示经NGF诱导后，大部分PC12细胞停留于G1期。lactacystin能使经NGF诱导分化的PC12

8、细胞处于G1期的细胞比例较对照组减少（P＜0.05）。3、Western-blot结果提示下调CENP-E基因后使PD细胞模型中Caspase-9表达较对照组明显升高（P＜0.05），但对Caspase-8