bcl-2家族成员在莱菔硫烷诱导人涎腺腺样囊性癌细胞系acc-m凋亡中的作用

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生答名：钾高导师弛彬p研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包括其他人已经发表或撰写的研究成果

2、，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名．智芳导师签章：砌弓年弓月驴日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯01英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯04研究论文Bel．2家族成员在莱菔硫烷诱导人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC．M凋亡中的作用前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯08刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯08材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯．．09结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17

3、附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．28综述Bel．2蛋白家族对机体细胞凋亡机制调控作用的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32致谢⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．48中文摘要Bcl一2家

4、族成员在莱菔硫烷诱导人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC．M凋亡中的作用摘要目的：涎腺腺样囊性癌(salivaryadenoidcysticcarcmoma，SACC)是最常见的唾液腺恶性肿瘤之一。好发于腭部的小唾液腺及腮腺，其次为下颌下腺。该肿瘤具有转移性极强、易沿神经扩散和血行性转移率高等重要特征，其发病率在口腔颌面部恶性肿瘤中居第二位。目前对于涎腺腺样囊性癌的临床治疗手段以手术切除为主，但手术切除后也常会发生局部复发和远处转移，其远端转移率在口腔颌面部居首位。然而，涎腺腺样囊性癌的发病及转移机制目前仍不完全清楚。因此探索新的预防和

5、治疗方法，提高对涎腺腺样囊性癌的疗效，改善患者的生存质量是很有必要的。流行病学调查研究发现增加十字花科蔬菜的摄入能够减少癌症的发生，其抗肿瘤作用的主要成分是一系列异硫氰酸酯，其中莱菔硫烷(sulforaphane，SFN)因其抗肿瘤效果最佳而受到广泛关注。随着对莱菔硫烷抗肿瘤作用研究的不断进展，目前对其抗癌机制的研究己从细胞水平上升至分子水平。如在DU-145细胞(前列腺癌)中，SFN引起细胞凋亡伴有裂解的C唧ause．3增加和Bcl．2表达的减少。在胰腺癌细胞中也可引起CaSpaSe．3的裂解。SFN可通过激活多种分子机制，来

6、诱导细胞的凋亡。我们前期的实验结果表明，SFN能够抑制腺样囊性癌细胞ACC．M的增殖，并诱导其凋亡。并且Caspase在SFN诱导涎腺腺样囊性癌ACC．M凋亡过程中起重要作用。但是在SFN诱导人涎腺腺样囊性癌ACC．M细胞凋亡的过程中，Bcl一2家族成员是否起重要作用，国内外未见报道。本研究拟对体外培养的人腺样囊性癌细胞系ACC．M经过SFN处理后，采用WesternBlot方法，检测不同时间点抗凋亡蛋白Bcl．2，Bcl．xl以及促凋亡蛋白Bax，Bak的含量，验证在SFN诱导ACC．M凋亡过程中Bcl．2家族成员的表达及意义

7、，从而为在腺样囊性癌的多模式治疗中拓展新的植物化学药物提供实验依据。方法：1材料中文摘要1．1ACC．M：由上海交通大学口腔颌面外科实验室提供，细胞系建立于1995年；1．2莱菔硫烷(SFN)：由匹兹堡大学医学中心头颈外科提供，购自LKT实验室，纯度之99％。2方法2．1药液配制：莱菔硫烷(SFN)用二甲基亚砜(DMSO)溶解配制成100mmol／L的储存液，存于．20。C冰箱中，使用前用RPMll640培养液稀释。2．2细胞培养：将冻存的细胞系予以复苏，培养液采用RPMll640加入10％的胎牛血清和链霉素(10009／mL)

8、、青霉素(100U／mL)，将复苏后的细胞置于37℃、5％C02恒温恒湿箱培养，隔天换液，约72．96小时可以传代。2．3细胞接种及药物处理：取对数生长期细胞经消化液(O．25％胰蛋白酶和0．04％EDTA(1：1)混合液)消化后制成4．0x106个／ml的细胞