海湾扇贝裙边ace抑制肽的酶解制备、纯化及鉴定

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1、上海交通大学硕士学位论文海湾扇贝裙边ACE抑制肽的酶解制备、纯化及鉴定学校：上海交通大学院系：农业与生物学院班级：B1215091学号：1121509024专业：食品科学与工程硕士生：吴秉宇导师：张建华副研究员上海交通大学农业与生物学院2015年1月万方数据上海交通大学硕士学位论文DissertationsubmittedforrequirementofMaster’sdegreeENZYMATICPREPARATION,PURIFICATIONANDIDENTIFICATIONOFANACEINHIBITORYPEPTIDEFROMARGOPECTENIRRADIASSK

2、IRTGraduateBingyuWuSupervisorJianhuaZhangMajorFoodScienceandTechnologyShanghaiJiaoTongUniversityShanghai,ChinaJan.2015万方数据上海交通大学硕士学位论文上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文《酶解海湾扇贝裙边制备ACE抑制肽》，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识

3、到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：2015年01月16日万方数据上海交通大学硕士学位论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密，在_年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密√(请在以上方框内打“√”)。学位论文作者签名：指导教师签名：日期：2015年01月16日日期：2015年01月16

4、日万方数据上海交通大学硕士学位论文本研究承蒙国家海洋局海洋公益性行业科研专项经费项目（201205031-05）资助万方数据上海交通大学硕士学位论文海湾扇贝裙边ACE抑制肽的酶解制备、纯化及鉴定摘要扇贝裙边指扇贝的外套膜，是扇贝柱加工的主要副产物。为了提升扇贝裙边的利用价值，本研究利用两步酶解法水解海湾扇贝裙边制备ACE抑制肽。具体研究内容如下：QSAR定量构效关系研究结果认为当羧端为脯氨酸时，能够提升多肽的ACE抑制活性。我们选取了已报道的IC50值不大于10μM的食品源的ACE抑制肽共121个，对其羧端结构进行分析，发现1/3的肽羧端都是脯氨酸，验证了QSAR定量构效关

5、系所揭示规律。按照该结论，选取α-胰凝乳蛋白酶和羧肽酶A/B对扇贝裙边进行两步酶解，以获得羧端为脯氨酸的多肽。对海湾扇贝裙边进行预处理，制成扇贝裙边粉。分析其蛋白质含量和氨基酸组成，结果表明扇贝裙边富含蛋白质（52.5±0.8%），其中脯氨酸含量占总蛋白含量的5.2%。分别在α-胰凝乳蛋白酶和羧肽酶A/B的最优酶解条件下，以水解度为指标，确定最优酶解时间，结果表明α-胰凝乳蛋白酶的最优水解时间为5h，羧肽酶A/B的最优水解时间为8h。然后，以ACE抑制活性为筛选指标，对海湾扇贝酶解液进行分离、纯化。第一步用500Da和1000Da的透析袋进行透析，得到<500Da与500~

6、1000Da两个组分，其IC50值分别为1376.00μg/mL和893.00μg/mL。第二步采用离子交换层析对上述两组分进一步分离，<500Da组分被分离为F1，F2两个组分，500~1000Da组分被分离为F3，F4，F5三个组分，其中F5具有最高ACE抑制活性（IC50=368.00μg/mL）。第三步采用凝胶层析色谱对F5进一步分离，得到F5-1，F5-2，F5-3三个组分，其中F5-2组分显示最高ACEI万方数据上海交通大学硕士学位论文抑制活性，IC50值为163.00μg/mL。第四步采用反相-高效液相色谱对F5-2组分进一步分离，RP-HPLC结果显示，F5

7、-2组分可以分为9个峰（a-i,5个峰具有ACE抑制活性），其中F5-2g显示最低的IC50值，为19.20μg/mL，具有很强ACE抑制活性，是目标分离组分。最后通过氨基酸成分分析、质谱分析和氮端序列分析，共同对所分离的F5-2g组分进行结构鉴定。氨基酸成分分析结果显示，F5-2g组分约含有两个Val，一个Leu，一个Ile，一个Pro。质谱分析结果显示，F5-2g组分主要成分的质荷比为540.3759，表明其氨基酸组成与成分分析结果一致。氮端序列分析结果进一步证明F5-2g组分主要成分氨基酸序列为Val-Leu