水通道蛋白4及黏蛋白5ac在哮喘小鼠支气管肺组织的表达及地塞米松对其的影响

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1、中图分类号：R562.2+5硕士学位论文水通道蛋白4及黏蛋白5AC在哮喘小鼠支气管肺组织的表达及地塞米松对其的影响院（系）、所临床医学院研究生姓名曾丽学科、专业内科学导师姓名王宋平教授二Ο一二年四月1目录1水通道蛋白4及黏蛋白5AC在哮喘小鼠支气管肺组织的表达及地塞米松对其的影响…………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………31.3前言……………………………………………………………61.4材料与方法………………………………………

2、……………81.5结果……………………………………………………………191.6讨论……………………………………………………………281.7结论……………………………………………………………351.8参考文献………………………………………………………361.9英汉缩略词对照表……………………………………………412致谢……………………………………………………………433气道黏液高分泌的研究进展（综述）………………………442水通道蛋白4及黏蛋白5AC在哮喘小鼠支气管肺组织的表达及地塞米松对其的影响摘要目的：观察水通道蛋白4（AQP

3、4）和黏蛋白5AC（MUC5AC）在哮喘小鼠支气管肺组织的表达，以及地塞米松对其表达的影响，探讨AQP4和MUC5AC在哮喘发病机制中的作用。方法：将24只清洁级C57BL/6小鼠随机分为对照组、哮喘组和地塞米松治疗组（DEX组），每组8只。哮喘模型组：第0d及14d腹腔注射新鲜配制的卵蛋白（OVA）与氢氧化铝混悬溶液0.2ml(1g/LOVA0.1ml+100g/L氢氧化铝0.1m1)致敏，在2l、22和23d予1g/LOVA溶液50ｕl滴鼻吸入激发。DEX组：致敏同哮喘组，在滴鼻激发前30min予地塞米松1.2mg/kg腹腔

4、注射。对照组同时给予相同体积的生理盐水腹腔注射及滴鼻。于末次激发24h后处死，取肺组织苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织形态学的改变，阿辛蓝-过碘酸-雪夫染色法（AB-PAS）观察气道杯状细胞增生和黏液分泌情况，采用病理评分法评价各组差别。免疫组化法检测AQP4和MUC5AC蛋白的表达；实时荧光定量PCR检测AQP4和MUC5ACmRNA在肺组织的含量：以SYBR-greenⅠ作荧光指示剂，检测AQP4、MUC5AC和管家基因β-actinmRNA的量，采用双ΔΔCt法计算目的基因的相对表达量。各组数据均用均数±标准差表示，各组

5、指标的均数比较均采用SPSS13软件进行单因素方差分析，P<0.05为差异具有统计学意义。3结果：(1)肺病理组织HE染色检查：哮喘组小鼠支气管、细支气管黏膜下和血管周围有大量的炎症细胞浸润，气道壁及气道平滑肌增厚，黏膜下水肿，管腔狭窄，管腔内可见黏液栓堵塞，气道上皮细胞脱落，杯状细胞增多。DEX组支气管及周围肺组织病理改变较哮喘组上述改变明显减轻。对照组未见上述病理改变。Underwood肺组织病理学评分哮喘组明显高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05），DEX组评分低于哮喘组，但仍高于对照组，具有统计学意义（P<0.0

6、5）。（2）AB-PAS染色结果：哮喘组小鼠气道上皮有大量杯状细胞增生，管腔内可见大量黏液分泌，染色胞浆呈蓝色和紫红色；DEX组较哮喘组明显减轻，对照组黏液分泌不明显。病理评分哮喘组明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；DEX组评分低于哮喘组，差异有统计学意义（P<0.05）。（3）免疫组织化学显示：肺组织中有AQP4和MUC5AC表达。AQP4表达于大小气道上皮，Ⅰ型肺泡上皮细胞胞质均有表达，尤以气道上皮细胞基底部和气道旁血管周围，哮喘组表达呈弱阳性，地塞米松治疗后表达明显增强哮喘组。MUC5AC主要表达于气道基底

7、层，哮喘组表达呈强阳性，地塞米松治疗后表达减弱。（4）实时荧光定量PCR结果：哮喘组AQP4mRNA相对表达量（1.1923±0.1933）低于对照组（4.4220±2.1953）及DEX组（2.4132±1.0997），差异具有统计学意义（P<0.05）；与对照组相比，DEX组AQP4mRNA表达量仍减少，差异有统计学意义（P<0.05）。哮喘组MUC5ACmRNA相对表达量（9.1876±3.0894）较对照组（1.0945±0.1920）及DEX组（2.7621±1.8449）明显增加，差异有统计学意义（P<0.05），D

8、EX4组MUC5ACmRNA表达量较对照组增加，差异有统计学意义（P<0.05）。相关关系分析：AQP4表达量与MUC5AC表达量呈负相关（r=-0.591，P<0.05）。结论：(1)成功建立了C57BL/6小鼠哮喘模型。（2）OVA致敏/激发的哮喘小鼠存在气