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1、慢性哮喘小鼠EGFR的表达及地塞米松对其的影响论文【关键词】哮喘Expressionofepidermalgroamiceandtheinfluenceofdexamethasone【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectofepidermalgroontheasthmaticairodeling.METHODS:Thechronicasthmamicemodelin(OVA)immunization.Miceethasoneof2mg/kg1hbeforethesensitizationandsacrificedbycervicaldislocati
2、on24hafterthelastchallenge.Conventionalpathologicalslidesonaryinflammationandthethicknessofairoothmuscles.TheconcentrationofTGFαinbronchoalveolarlavagefluid(BALF)RNAexpressionofEGFRinthelungs.PulmonaryEGFRproteinmunohistochemicalstainingandER）；FLUORSTMMultimager多功能图像分析仪（BioRAD）；LeicaQ500MC图像分析系
3、统（德国）；卵白蛋白干粉（GradeⅤ）（美国Sigma公司）；氢氧化铝（上海生物制品有限公司）；地塞米松磷酸钠注射液（天津市氨基酸公司人民制药厂）；小鼠TGFαELISA试剂盒（上海生物晶美公司）；Trizol（GibcolBRL公司）；OneStepRNAPCRKit（TaKaRa公司）；EGFRmAb（CellSignalingTechnology）；磷酸化EGFRmAb（CellSignalingTechnology）.1．2方法1．2．1动物模型及分组健康BALB/C小鼠40只，随机等分为4组，每组10只，A组为正常对照组，B组为慢性哮喘组，C组为地塞米松处理组，D组为生理
4、盐水处理组.置于相对清洁恒温环境.予以标准饲料，自由取水.参照文献［1］制备动物模型，将OVA20μg加2.6mg氢氧化铝溶于pH为7.4的PBS0.2mL中，于第0,7,14日给B组、C组、D组小鼠腹腔注射，A组小鼠腹腔注射0.2mLPBS；于第20~29,47,61,73~75日鼻腔内滴入OVA抗原液50μL（含OVA100μg），A组小鼠鼻腔内滴入PBS50μL；C组小鼠每次滴入OVA前1h腹腔注射地塞米松0.2mL（50μg），D组小鼠每次滴入OVA前1h腹腔注射PBS0.2mL.小鼠出现烦躁不安、呼吸急促、腹肌痉挛为阳性反应.最后一次激发24h后颈椎脱臼处死动物.1．2．2
5、BALF中TGFα的检测按照ELISA检测试剂盒操作流程检测各组小鼠BALF中TGFα含量.1．2．3肺组织EGFRmRNA的测定根据OneStepRNAPCRKit试剂盒说明书，用半定量RTPCR法测定各组小鼠肺组织EGFRmRNA.EGFR引物序列(扩增片段长499bp)：上游引物5′AGAAGATGGCATCCGCAAGT3′；下游引物5′ATTGGGTGTCCCGAAGAGTT3′.GAPDH引物序列(扩增片段长306bp)：上游引物5′cctgcatccactggtgctgc3′；下游引物5′CTTGACAAAGTTGTCATTGA3′.1．2．4C图像分析系统，测定不含软
6、骨的完整气管横断面，分别以ed,2002,165(1):108-116.［2］JamesAL,HoggJC,DunnLA,etal.Theuseoftheinternalperimetertopareairoothmuscleshortening［J］.AmRevRespirDis,1988,138:136-139.［3］FahyJV,CorryDB,BousheyHA.Airmationandremodelinginasthma［J］.CurrOpinPulmMed,2000,6(1):15-20.［4］DaviesDE,,etal.Theepidermalgroily:Their
7、potentialroleinrepairandremodellinginasthma［J］.Allergy,1999,54:771-783.［7］OlayioyeMA,NeveRM,LaneHA,etal.TheErbBsignalingerizationindevelopmentandcancer［J］.EMBOJ,2000,19(13):3159-3167.［8］LuZ,JiangG,BlumeJensenP,etal.Epidermalgroorc
