中药蓝玉簪颗粒对慢性哮喘小鼠气道重建的影响及机制论文

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1、中药蓝玉簪颗粒对慢性哮喘小鼠气道重建的影响及机制论文【摘要】目的：观察中药蓝玉簪颗粒对慢性哮喘小鼠气道重建的抑制作用并探讨其机制.方法：将32只雌性BABL/c小鼠随机分成正常对照组（A组），慢性哮喘模型组（B组），蓝玉簪颗粒组（C组，1.0g生药/3.0kg体质量）和地塞米松干预组（D组，2.0mg/kg），以卵白蛋白（OVA）腹腔注射致敏并长期雾化吸入制备小鼠慢性哮喘模型.苏木素伊红（HE）染色观察小鼠肺组织一般病理学改变；阿尔辛蓝过碘酸希夫氏(ABPAS)染色观察气道上皮杯状细胞增生、黏液分泌情况；天狼猩红（SR）染色观察气道壁胶原沉积并检测肺组织羟脯氨酸（HYP）含量

2、以评价气道上皮下纤维化，采用免疫组化半定量法测定气道壁转化生长因子β1(TGFβ1）含量.计算机图像分析软件测定气道外、内径比值（Po/Pi），气道壁厚度和面积（A）比值（如A，TGFβ1/Pbm）等.结果：B组小鼠气管及血管周围大量炎性细胞浸润，气道黏膜上皮增生，气道黏液高分泌及气道上皮下胶原沉积增多，气道壁TGFβ1表达增强；Po/Pi，A，Aa以及TGFβ1/Pbm，肺组织HYP含量等所有指标均显著增高.C组与B组之间比较差异均有统计学意义（P0.01）；C组与A，D组比较差异具有统计学意义（P0.05）.TGFβ1的表达与肺组织HYP含量呈显著正相关（rs=0.66

3、9，P0.01）.结论：中药蓝玉簪颗粒可以抑制慢性哮喘小鼠气道炎症及气道重建，其机制可能与抑制TGFβ1表达有关.【关键词】慢性哮喘气道重建动物模型小鼠蓝玉簪龙胆转化生长因子β10引言支气管哮喘是一种气道慢性炎症性疾病，常伴随气道高反应性和气道重建.气道重建在疾病的早期即可发生，随病程进展而进行性加重，已被视为哮喘治疗的一个重要靶点［1］.中药蓝玉簪颗粒(曾用名肺宁)主要成分为藏药蓝玉簪龙胆（G.veitchiorumHemsl）和三七总甙（panaxnotoginside，PNS）等.卫张蕊等［2］的研究发现蓝玉簪颗粒具有很强的抗炎和抗纤维化效应，能抑制成纤维细胞合成胶原纤维，

4、可有效干预大鼠肺纤维化模型.本实验建立慢性哮喘小鼠模型，观察中药蓝玉簪颗粒对气道壁胶原沉积，TGFβ1表达和气道壁厚度的影响，探讨其对气道重塑可能的作用机制.1材料和方法1.1材料6～8周龄健康雌性清洁级BABL/c小鼠32只，平均体质量(18±2)g（第四军医大学实验动物中心提供）；卵白蛋白（ovalbumin，OVA）（美国Sigma公司）；兔抗小鼠TGFβ1多克隆抗体（美国SantaCruz公司）；SP试剂盒（北京中杉金桥公司）；羟脯氨酸（hydroxyproline，HYP）碱水解法检测试剂盒（南京建成生物有限公司）；UV2000型分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司）；

5、402型超声雾化器(上海鱼跃医疗仪器设备有限公司)；中药蓝玉簪颗粒（第四军医大学药理学教研室研制）.1.2方法1.2.1动物模型制备与实验分组将小鼠置于相对清洁恒温环境，给予标准饲料，自由取水并随机分为正常对照组（A组），慢性哮喘组（B组），蓝玉簪颗粒组（C组）和地塞米松干预组（D组）4组，每组8只.参照文献［3］的方法制备动物模型.将OVA100μg加2.6mg氢氧化铝溶于0.2mLPBS溶液中制成悬液，于第1，7，14日给予B，C，D组小鼠腹腔注射，第15日开始将小鼠置于30cm×20cm×15cm透明密闭容器中，以30g/LOVA生理盐水溶液最大雾量超声雾化吸入，每日1次，每次

6、30min，连续6in，C组按1.0g生药/3.0kg体质量剂量灌胃给药；D组按2.0mg/kg体质量剂量腹腔注射地塞米松溶液.A组以生理盐水代替OVA致敏和雾化激发.4组小鼠在末次激发后24h内摘除眼球放血处死，迅速留取右侧肺组织置于-70℃保存待测HYP，左肺内缓慢灌注40g/L中性缓冲甲醛溶液，直至肺脏充盈后结扎，浸入40g/L中性缓冲甲醛溶液中室温下固定24h，沿左肺门斜形平行取材，常规石蜡切片.1.2.2肺组织病理学观察及气道重建形态学测定各组小鼠肺组织石蜡切片分别行苏木素伊红（HE）染色观察动物肺组织一般病理学改变，天狼猩红（SR）染色观察气道上皮下胶原沉积及阿尔辛蓝

7、过碘酸希夫氏(ABPAS)染色观察气道上皮杯状细胞增生、黏液分泌情况.OLYMPUSBX51显微图像采集系统200倍下选取各组小鼠HE染色完整同级细支气管横截面50个（管腔长径/短径＜2），ImageProPlus6.0（美国MediaCyberics公司）医学图像分析软件进行计算机图像分析，测定气道外/内径（Po/Pi），气道壁面积（Aa），以Po/Pi，Aa，A作为评价气道重建形态学半定量指标.1.2.3HYP含量测定采取组织碱水解法检测肺组织