foxp3在小鼠肾移植免疫耐受中的研究

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1、分类号VDC博士学位论文密级Foxp3在小鼠肾移植免疫耐受中的研究TheexperimentalstudyontheroleofFoxp3inducingToleranceafterrenaltransplantationinmice作者姓名：王耀磊学科专业：外科学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：齐范教授论文答辩日魍至礁：王：≥甲答辩委员会主席中南大学二0一二年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或

2、其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：主燃日期：盖2≥年』月丛日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。日期：址年上月丝Et博士学位论文中文摘要摘要第一部分小鼠肾移植模型的建立目的建立稳定的

3、小鼠肾移植模型，为利用小鼠研究移植免疫机制奠定基础。方法雄性、成年、健康、近交系C57BL／6小鼠40只。采用异位异体肾移植，充分暴露供肾，在摘取小鼠供肾前，先进行灌注。将移植肾动、静脉分别与腹主动脉及下腔静脉行端侧吻合，尿道重建采用将供肾输尿管末端引入膀胱内加外固定的方法。术后均不使用抗生素和免疫抑制剂。小鼠存活超过五天认为手术成功。结果建模初期共完成4060。仅有11例完成了手术全过程。建模成熟稳定期共完成40例手术。术后24hd、时存活率为85％(34／40)．术后1w生存率为70％(28／40)。供体手术时间为(27+6)min，热缺血时间约10～15s，供肾

4、血管修整时间为(2．36+0．43)min．冷缺血时间(55士13)min，受体手术为(94+16)min，其中腹主动脉及下腔静脉阻断时间为(42．18+5．43)min．手术失败的12只小鼠主要原因为出血性休克3例，吻合口血栓形成5例，动脉吻合口狭窄2例，原因不明2例。结论1采用改良方法建立的小鼠肾移植模型稳定可靠，术后7天为本实验的最佳研究时间，建模的成功可为后续实验提供基础。2小鼠肾移植模型手术难度大，高质量的血管吻合以及细致的显微操作是提高小鼠肾移植手术成功率的关键。博士学位论文中文摘要关键词小鼠，肾移植，动物模型第二部分体外实验中Foxp3对调节性T淋巴细胞

5、抑制功能的研究目的探讨Foxp3转染CD4+CD25。T细胞后在体外淋巴细胞增殖反应的影响，并研究其在调节性T细胞中的作用机制。方法免疫磁珠法分离出CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25。T细胞，通过逆转录病毒载体体外介导Foxp3基因进入CD4+CD25。T细胞，RT-PCR检测Foxp3的表达。以小鼠脾脏细胞为反应细胞，将Foxp3转染的CD+CD25‘T细胞、CD4+CD25+调节性T细胞、脾脏单个核细胞为刺激细胞，各取5x105按照l：1比例分为三组。混合培养三天后，加入3H．TdR微居，以液闪测定仪测定三组的cpm值。结果Foxp3转染后CD4+CD25

6、。T细胞可见高水平的表达。Foxp3转染CD4+CD25。T细胞后具有与CD4+CD25+T细胞相同的抑制作用。三组cpm值比较：A组Foxp3(3，009．28+211．63)、调节性T细胞组(2877．11+121．43)增殖活性明显低于空白对照组(12817．34+768．21)，差异具有显著性。Foxp3组与调节性T细胞组之间无明显差异。结论1Foxp3是CD4+CD25+T细胞发育、发生和功能的关键因子；2Foxp3转染后的CD4+CD25’T细胞可明显抑制淋巴细胞的增殖活化。博士学位论文中文摘要关键词Foxp3CD4+CD25+T细胞，免疫调节第三部分Fo

7、xp3在小鼠肾移植模型中的作用研究目的研究Foxp3在肾移植排斥反应中的作用和机制，探讨在肾移植中通过Foxp3因子介导的CD4+CD25+T细胞实现特异性免疫耐受的可能性及机制。方法建立小鼠肾移植模型后，实验分为三组：A组：为对照组N=12，以脾脏单个核细胞为作用细胞，于移植前一天取1X106细胞注入受体小鼠体内。B组：调节性T细胞组，N=12，以CD4+CD25+调节性T细胞为作用细胞，同样条件下，移植前一天取lxl06经小鼠尾静脉注入受体体内．C组：Foxp3+CD4+CD25。T细胞组，N=12，以PLXSN．mFOXP3．IRES2．EGF