原发性膀胱输尿管反流pax2基因启动子dna甲基化状态研究

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1、复旦大学硕士学位论文.复旦大学硕士学位论文原发性膀胱输尿管反流Pax2基因启动子DNA甲基化状态研究AnalysisofPax2geneDNAmethylationstatusinprimaryvesicoureteralreflux硕士研究生郑鹈冰专业儿科学(肾脏病学)导师徐虹教授导师组成员沈茜副主任医师郭维副主任医师2012年4月18日复旦大学附属儿科医院复旦大学硕士学位论文.目录目录缩略语注释1中文摘要2英文摘要4fym6原发性膀胱输尿管反流Pax2基因启动子DNA甲基化状态研究12引W12材料与方法12^22Uit26参考文献

2、28总结与展望31m^33硕士在读期间论文发表情况42伦理委员会批复书43翻t44复旦大学硕士学位论文.缩略语注释缩略语注释VURVesicouretericreflux膀胱输尿管反流BSPBisulfiteSequencingPCR重亚硫酸盐测序DnmtDNAmethyltransferaseDNA甲基转移酶MeCPMethyl-CpG-bindingdomain甲基-CpG-结合结构域MBDMethyl-BindingDomain甲基结合蛋白RNRefluxnephropathy反流性肾病ESRDEndstagerenaldisease

3、终末期肾病MCUMicturatingcystourethrograph排尿性膀腕尿道造影PAXPairedbox配对盒GlialcelllinederivedGDNF胶质细胞源性神经营养因子neurotrophicfactorneuronalapoptosisinhibitoryNAIP神经元凋亡抑制蛋白proteinRCSRenal-colobomasyndrome肾-视神经盘缺损综合征UUOUnilateralureteralobstruction单侧输尿管梗阻RASRenin-angiotensinsystem肾素-血管紧张素系统AoAngiotens

4、inogen血管紧张素原AngAngiotensin血管紧张素ACEAngiotensinconvertingenzyme血管紧张素转化酶ConenitalanomaliesofthekidneyCAKUT先天性肾泌尿道畸形andurinarytractl复旦大学硕士学位论文.中文摘要原发性膀胱输尿管反流Pax2基因启动子DNA甲基化状态研究中文摘要研究背景原发性膀胱输尿管反流（VUR)是一种常见的先天性尿路畸形，严重者可进展为终末期肾病（ESRD)。原发性VUR有一定的遗传基础，在同胞中的发病率显著高于健康儿童。国内外学者通过动物模型研究发现了一系列参与泌尿系统发育的基因

5、与VUR发病相关，但对原发性VUR患者进行基因检测或全基因组扫描却未发现一致的基因异常，原发性VUR确切的发病机制迄今仍不明确。Pax2基因所编码的蛋白质为核转录因子。在肾、输尿管发育过程中，Pax2表达于发育中的前肾、中肾、输尿管芽及间充质细胞，主要发挥三大作用，包括协调输尿管芽的出芽和定位，抑制输尿管芽的凋亡而促使输尿管芽不断发出分支，以及促使间充质细胞向上皮细胞转化。当上皮前体细胞形成后，Pax2表达逐渐下降，在成熟的肾单位无表达或呈痕量表达。我科前期通过免疫组织化学研究发现原发性VUR患儿输尿管上皮细胞Pax2蛋白阳性表达，而对照组呈痕量表达，且有研究报道在小鼠胚胎肾发育过程中

6、Pax2表达逐渐下降的同时伴有其启动子某些特定区域DNA甲基化水平的增高。我们推测，Pax2在VUR患儿输尿管上皮细胞的表达可能与其启动子DNA甲基化的调控相关。在上述认识的基础上，本研究通过对Pax2启动子DNA甲基化水平的分析，探讨DNA甲基化对Pax2基因表达的影响及其表达的意义，为VUR发病机制的研究提供新的思路。目的（1)检测Pax2基因在人输尿管组织的表达情况。（2)检测Pax2基因启动子DNA甲基化水平。（3)通过检测DNA甲基转移酶（Dnmt)的表达分析引起DNA甲基化差异的可能原因。材料和方法（1)材料：病例组标本21例，来自我院泌尿外科行输尿管再植术的III级以上原

7、发性VUR患儿术中切下的异常输尿管下段组织，对照组3例，分别为外伤行肾、输尿管切除术，左输尿管结石伴末端狭窄行输尿管再植术，及肾移2复旦大学硕士学位论文.中文摘要植术中取得的输尿管下段组织。（2)方法：通过免疫组织化学、Westernblot及Real-timePCR检测VUR及对照组输尿管组织蛋白质及mRNA的表达，然后通过重亚硫酸盐测序（BSP)方法检测VUR及对照组输尿管组织Pax2基因启动子DNA甲基化水平，最后通过Real-timeP