ptpro基因过表达对食管癌细胞的抑瘤效应及放射增敏作用

《ptpro基因过表达对食管癌细胞的抑瘤效应及放射增敏作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的

2、论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日PTPRO基因过表达对食管癌细胞的抑瘤效应及放射增敏作用2009级硕士研究生：叶娟导师：张灏教授TheimpactofPTPROoverexpressiononthecellulargrowthandradiosensitizationinhumanesophagealcarcinomacellsPostgraduate：JuanYeAdvisor：ProfessorHaoZhang汕头大学医学院硕士学位论文摘要背景和目的食管癌是世界上最常见的八大恶性肿瘤之一，我国是世界上食管癌发病率和死亡率最高的国家

3、，主要以食管鳞状细胞癌（esophagealsquamouscellcarcinoma，ESCC）为主。由于多方面的原因，食管癌患者确诊时往往已到中晚期，失去手术治疗机会，尤其是对于局部晚期的食管癌患者，放射治疗成为主要的治疗手段之一。然而，放射治疗的最大障碍在于肿瘤细胞存在放疗抵抗，而放疗抵抗被认为是肿瘤局部复发或放疗失败的重要原因。由于食管癌的病变过程是一个多基因变异累积的复杂过程，涉及多种癌基因和抑癌基因的异常，而这些基因以及基因表达蛋白的改变有许多与放疗敏感性相关。受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O（proteintyrosinephosphatasereceptortypeO，PT

4、PRO）是受体型蛋白酪氨酸磷酸酶家族中的一员，已经发现在多种肿瘤中发挥抑癌基因功能。本实验室前期研究结果表明，ESCC原发肿瘤组织中PTPRO的甲基化频率为75%（27/36），启动子甲基化所致的PTPRO表达沉默与ESCC的浸润程度和TNM分期显著相关，提示PTPRO的表达沉默可能参与ESCC的发生发展过程，可能与患者的预后有关。本实验在前期研究的基础上，主要在ESCC细胞水平研究过表达PTPRO对ESCC细胞恶性生物学行为的影响，以及对ESCC细胞的放射敏感性的影响，并初步探讨影响其放疗敏感性的机制。方法1.构建pCR-PTPRO-HA真核表达载体。2.重组质粒的扩增和纯化。3

5、.建立过表达PTPRO的食管癌细胞系，以及转染空载体后不表达PTPRO的食管癌细胞系，通过RT-PCR和westernblot实验进行验证。4.应用MTT比色法、平板克隆形成实验以及软琼脂克隆形成实验检测过表达PTPRO对TE1细胞活力的影响。5.分别给予过表达PTPRO组、空载体转染组细胞不同剂量（0、1、2、4、6Gy）X线照射后，应用平板克隆形成实验检测PTPRO转染食管癌细胞后的放射增敏作用。6.通过流式细胞仪（FCM）分析，PTPRO转染TE1细胞后对细胞周期分布的影响。I汕头大学医学院硕士学位论文结果1.通过双酶切以及测序证实已经成功构建pCR-PTPRO-HA真核表达

6、载体。2.重组表达载体pCR-PTPRO-HA及对照空载体pCR-HA分别转染TE1细胞，以300µg/ml的G418浓度进行筛选，2周后得到阳性混合克隆，建立外源过表达PTPRO蛋白的稳定转染细胞系，扩大培养后通过RT-PCR、Westernblot实验检测PTPRO的表达状态，实验证实成功建立了稳定表达PTPRO的2株抗性克隆细胞系（TE1-PTPROc1与TE1-PTPROc2），以及不表达外源性PTPRO的空载体转染组（TE1-vector）。3.过表达PTPRO对TE1细胞活力的影响：经MTT比色法测定并绘制细胞生长曲线表明，过表达PTPRO的2株抗性克隆细胞株TE1-P

7、TPROc1、TE1-PTPROc2与空载体转染组（TE1-vector）及未转染对照组（TE1）相比其增殖能力显著减弱（P<0.05）；经平板克隆形成实验证实，重组表达载体pCR-PTPRO-HA以及pCR-HA瞬时转染TE1细胞后，与空载体转染组相比较，PTPRO转染组其平板克隆形成能力明显下降，其差异具有统计学意义（P<0.05）；经软琼脂克隆形成实验证实，与空载体转染组（TE1-vector）及未转染对照组（TE1）相比，过表达TE1-PTPROc1、TE1-