地黄多糖对大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞诱导分化作用的研究

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1、第18卷第6期中国实验方剂学杂志Vol．18，No．62012年3月ChineseJournalofExperimentalTraditionalMedicalFormulaeMar．，2012地黄多糖对大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞诱导分化作用的研究12221*杜红阳，付海燕，包翠芬，刘宇卓，秦书俭(1.辽宁中医药大学，沈阳110032;2.辽宁医学院，辽宁锦州121000)［摘要］目的:探讨地黄多糖体外对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞的诱导作用。方法:以大鼠BMSCs为研究对象，采用流式细胞仪检测BMSCs表面标志，MTT法检测

2、细胞生长曲线，当第3代细胞爬片达到80%以上汇合－1－1时，分为对照组、化学方法诱导组(5mmol·L，β-mercaptoethanol)、脑源性神经生长因子(10μg·L，BDNF)组和地黄多糖组－1(200mg·L)进行诱导，6h后应用免疫细胞化学染色法检测各实验组神经元巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达，RT-PCR检测nestin，NSE，βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)和GFAPmRNA的表达情况。结果:经分离鉴定培养5代以内大鼠BMSCs增殖旺盛、具有较好的细胞活力;免疫细胞化学

3、染色和RT-PCR检测结果显示，对照组不表达神经细胞标志物，各诱导组诱导后有特异性神经细胞标志物表达。其中地黄多糖组Nestin，NSE阳性细胞率分别为(56.74±1.36)%，(73.37±1.27)%，高于化学诱导组(28.21±2.43)%，(2.31±2.72)%和神经生长因子组(31.3±1.61)%，(28.87±1.65)%，(P＜0.05);GFAP阳性细胞率(20.17±1.27)%低于化学诱导组和神经生长因子组，差异具有统计学意义(P＜0.05);化学诱导组Nestin，NSE和GFAP阳性细胞率与生长因子组比较，差异无统计学意义。

4、结论:地黄多糖具有诱导BMSCs向神经样细胞分化的作用，主要向神经元样细胞方向诱导。［关键词］地黄多糖;骨髓间充质干细胞;神经样细胞;诱导［中图分类号］R285.5［文献标识码］A［文章编号］1005-9903(2012)06-0133-05［DOI］CNKI:11-3495/R．20120113．1029．002［网络出版时间］2012-01-1310:29［网络出版地址］http://www．cnki．net/kcms/detail/11．3495．R．20120113．1029．002．htmlStudyonDifferentiationofRat

5、BoneMarrowMesenchymalStemCellsintoNeuron-likeCellsInducedbyRehmanniaglutinosaPolysaccharideinvitro12221*DUHong-yang，FUHai-yan，BAOCui-fen，LIUYu-zhuo，QINShu-jian(1.LiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine，Shenyang110032，China;2.LiaoningMedicalUniversity，Jinzhou121001，China)［A

6、bstract］Objective:ToinvestigatetheeffectofRehmanniaglutinosapolysaccharide(RGP)oninducingdifferentiationofratsbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)intoneuron-likecellsinvitro．Method:AftercharacterizedcellsurfacemarkersbyflowcytometryanalysisandassessedcellgrowthcurvebyMTT，ratBMSC

7、swereexperimentedastheobject．Whenthethirdpassagecellsgrewtofusionofmorethan80%，thecellsweredividedinto4groupssuchasthecontrolgroup，theβ-mercaptoethanol(BME)inductiongroup，thebrainderivedneurotrophicfactor(BDNF)inductiongroupandthe(RGP)inductiongroup．ImmunocytochemicalstainandRT-P

8、CRmethodwereusedtodetectseveralneuralspe