BMP-7诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的研究.pdf

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1、分类号:密级：公开学号：2015210977单位代码：10759石河子大学硕士学位论文BMP-7诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的研究学位申请人白广超指导教师李宽新申请学位类别临床医学硕士专业名称骨科学研究领域脊髓损伤所在学院医学院中国·新疆·石河子2018年3月BMP-7InducesDifferentiationofRatBoneMarrow-derivedMesenchymalStemCellsintoNeuronsADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmen

2、toftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByBaiGuangchao(Orthopedics)Supervisor:AssociateProf.LiKuanxinMar.2018中文摘要I目的：探索BMP-7在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞（Bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs）分化为神经元的作用。方法：以全骨髓贴壁法分离、培养大鼠BMSCs。流式细胞仪检测细胞表型CD29、CD44。成脂诱导及油红O染色鉴定大鼠BMSCs多向分化能力。MTT法检测浓度分别为

3、25ng/ml、50ng/ml、75ng/ml及100ng/ml的BMP-7对大鼠BMSCs增殖的影响。倒置相差显微镜下观察25ng/ml、50ng/ml、75ng/ml及100ng/ml的BMP-7诱导大鼠BMSCS后形态学变化，并取形态学变化最显著的进行后续实验。qRT-PCR检测诱导得到的细胞神经丝蛋白200（Neurofilamentprotein-200,NF200）、突触蛋白1（Synapticprotein1,SYN1）、微管相关蛋白2（Microtubule-associatedprotein-2,MAP2）、胶质纤微酸性蛋白（G

4、lialfibrillaryacidicprotein,GFAP）mRNA相对表达量。免疫组化检测诱导得到的细胞NF200、MAP2、SYN1、GFAP蛋白表达情况。免疫荧光实验检测诱导得到的细胞NF200、SYN1、MAP2、GFAP蛋白表达情况。WesternBlot实验检测诱导得到的细胞NF200、SYN1、MAP2、GFAP蛋白表达情况。结果：体外培养的第3代大鼠BMSCs细胞胞浆丰富，多呈长梭形，部分为多角形，细胞聚集生长呈漩涡状。分离培养得到的大鼠BMSCS阳性表达CD29、CD44，阳性率分别为99.44%、99.17%。大鼠BMS

5、Cs成脂诱导28天后胞浆内出现脂滴，油红O染色阳性。MTT实验结果表明25ng/ml、50ng/ml、75ng/ml及100ng/ml的BMP-7对大鼠BMSCs的增殖均具有促进作用，其中75ng/ml的BMP-7促进大鼠BMSCs增殖作用最显著。形态学观察结果表明25ng/mlBMP-7组、50ng/mlBMP-7组、75ng/mlBMP-7组、100ng/mlBMP-7组细胞形态均有不同程度的变化，尤以75ng/mlBMP-7组细胞形态学变化最为显著，形态上类似于神经元细胞。大鼠BMSCs经BMP-7（75ng/ml）诱导2h后，BMP-7组

6、NF200mRNA相对表达量为（5.47±0.59）显著高于对照组（P＜0.05），BMP-7组SYN1mRNA相对表达量（1.48±0.38）显著高于对照组（P＜0.05），BMP-7诱导组MAP2mRNA相对表达量（2.86±1.65）显著高于对照组（P＜0.05），BMP-7诱导组GFAPmRNA相对表达量（4.41±0.13）显著高于对照组。免疫组化结果表明大鼠BMSCs经BMP-7诱导2h后，阳性表达NF200、MAP2及SYN1，阴性表达GFAP。免疫荧光结果表明大鼠BMSCs经BMP-7诱导后2h后，诱导得到的细胞阳性表达NF200

7、、IIMAP2、SYN1，且主要在胞浆及形成的突起中表达，阴性表达GFAP。WesternBlot实验结果表明大鼠BMSCs经BMP-7诱导2h后，BMP-7组NF200的相对表达量（1.091±0.0060）显著高于对照组（0.4385±0.0046）（p<0.01），BMP-7组SYN1的相对表达量（1.293±0.0029）显著高于对照组（0.9885±0.0018）（p<0.01），BMP-7组MAP2的相对表达量（1.167±0.0045）显著高于对照组（0.9697±0.0031）（p<0.01），BMP-7组GFAP的相对表达量（0

8、.6130±0.0012）显著低于对照组（0.9286±0.0029）（p<0.01）。结论：1.BMP-7具有促进大鼠BMSCs增殖的