地黄多糖在诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化过程中对notch1蛋白表达的影响

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1、·1202·广东医学2012年5月第33卷第9期GuangdongMedicalJournalMay．2012，Vo1．33，No．9地黄多糖在诱导大鼠骨髓问充质干细胞向神经样细胞分化过程中对Notchl蛋白表达的影响米杜红阳，付海燕，马刚，包翠芬，秦书俭辽宁中医药大学基础医学院(沈阳110032)；辽宁医学院基础医学院(辽宁锦州121000)【摘要】目的探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞的作用，及其对Notchl蛋白表达的影响。方法以大鼠BMSCs为研究对象，取第3代细

2、胞，分为对照组、8一巯基乙醇诱导组(5mmol／LBME)和地黄多糖诱导组(0．2mg／mL)进行诱导实验，应用流式细胞仪检测诱导前后细胞生长周期改变情况，免疫细胞化学染色法检测神经标志物：神经巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Notch1蛋白的表达，Westernblot检测Notch蛋白胞内片段(NICD)的表达情况。结果流式细胞仪检测示地黄多糖诱导后G。／G。期细胞比例明显升高，而s+G／M期的细胞比例明显下降。免疫细胞化学染色显示，对照组不表达

3、神经细胞标志物，各诱导组诱导后产生特异性神经细胞标志物表达。其中地黄多糖组nestin及NSE阳性细胞率高于p一巯基乙醇诱导组(P<0．05)；GFAP阳性细胞率低于B一巯基乙醇诱导组，差异有统计学意义(P<0．05)；免疫细胞化学染色示地黄多糖诱导组诱导前为Notchl蛋白强阳性或阳性染色，并随诱导时间延长阳性细胞逐渐减少。Westernblot结果显示地黄多糖诱导组诱导分化24h后细胞内NICD含量逐渐下降，到第5天时，低于诱导前水平，且仍明显低于对照组。结论地黄多糖可能通过抑制Notchl蛋白表达

4、而诱导BMSCs向神经样细胞分化，且主要向神经元样细胞方向分化。【关键词】地黄多糖；骨髓间充质干细胞；Notchl蛋白；诱导；神经样细胞EfectofrehmanniaglutinosapolysaccharideontheexpressionofNotchlproteininratbonemarrowmesenchy-malstemcellsduringdiferentiationintoneuron—likecellsinvitro．DUHong—yⅡ，FHai—yah，MAng，BAOCui—fe

5、n，QlNShu—jian．LiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine，Shenyang110032，China【Abstract】0bjectiveToinvestigatetheeffectofRehmanniaglutinosapolysaccharide(RGP)ontheNotchlproteinexpressionininducingdifferentiationofratbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSC

6、s)intoneuron—likecellsinvitro．MethodsThethirdpassagecellsofratBMSCsweredividedinto3groups：controlgroup，B—mercaptoethanol(5mmol／L，BME)inductiongroupandRGP(0．2n,g／mL)inductiongroup．Flowcytometrywasappliedfortestingthegrowthcyclechangesbeforeandafterinducti

7、on．Immunocytochemetrywasusedtodetectneuralspecificmarkssuchasnestin，NSE，GFAPandNotch1protein．WesternblotwasconstructedforassessmentofintraeellulardominofNotch(NICD)proteinexpression．ResultsObviousincreaseofGo／G1phasecellsandreductioninS+G2／Mcellswerere—v

8、ealedafterRGPinductionaccordingtoflowcytometry．Neuralcellmarkerswereexpressedininductiongroups，butnotincontrolgroup．ThereweresignificantlyhigherpositiveratesofnestinandNSEinRGPinductiongroupthanBMEinductiongroup(P<0．05)and