超高效液相色谱串联质谱法测定猪肉中5种α2受体激动剂残留量方法的研究

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1、第四届中国兽药大会——动物药品学分会论文集(2012年)起关注，且在饲料行业中已有非法添加使用的趋势，但目前尚无0【2受体激动剂在动物性食品中的残留检测方法。啦受体激动剂作为人用药主要用于治疗人类的高血压症【l。21，对a2受体具有特异亲和性。1975年Lall3J等发现了a2受体激动剂可乐定对正常人具有显著促进血浆生长激素水平升高的作用。可乐定促进动物生长机理的研究卜6]已有相关报道，可乐定通过激动嘞受体导致GRF(长激素释放因子)的释放，从而引起GH(生长激素)的分泌增加。王雷杰等【7】以“杜长大”三元杂交生长猪为试验对象，研究结果表明在饲粮中添加可乐定使猪的体氮储

2、留增加，动物研究表明在猪饲粮中添加0．5mg／kg可乐定，能显著提高猪的瘦肉率和眼肌面积，降低脂肪比率和背膘厚，改善猪的胴体组成。2010年12月农业部1519号公告已明确把可乐定列入了农业部《禁止在饲料和动物饮水中使用的物质》清单。啦受体激动剂类药物具有近似的药理作用，因此研究啦受体激动剂药物的检测方法具有重要的意义。目前已有关于血样中可乐定检测方法的报道，主要采用液相色谱一串联质谱法(LC／MS／MS)峭J。且国内已有采用高效液相色谱法(HPLC)检测饲料中盐酸可乐定的方法【9J。但是尚无同时检测0【2受体激动剂类药物的方法。本研究采用超高效液相色谱．串联质谱(LⅡ

3、?LC／MS巾订S)技术，建立了猪肉中包括盐酸可乐定在内的常见5种Q2受体激动剂检测方法，能够进行准确的定性和定量，同时也大大提高了检测的效率。图1替扎尼定(Tizanidine)图2赛拉嗪(xylazine)图3安普乐定(Apraelonidine)Br图4澳奠尼定fBrimonidine)图5可乐定(clonidine)1材料和方法1．1仪器超高效液相色谱．串联质谱仪UPLC／QpattroPremierXE(Waters公司)：MassLynxv4．1质谱工作站软件；漩涡振荡器；CL3R冷冻离心机(美国IEC公司)；Laborota4000旋转蒸发器(德[雪Hei

4、dolph公司)。1．2药品与试剂盐酸可乐定对照品，纯度298％(sigma公司)；盐酸替扎尼定对照品，纯度298％(TRC公司)；盐酸噻拉嗪对照品，纯度299％(Dr．Ehrenstorfer公司)；盐酸安普乐定对照品，纯度298％(TRC公·--——216·--——残留检测技术司)；溴莫尼定对照品，纯度三98％(TRC公司)；乙腈色谱纯(Merck公司)；甲醇色谱纯(Merck公)；甲酸，纯度96％(TEDIA)；甲醇、乙酸、氨水均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司)；实验用水为超1．3．2质谱参考条件电喷雾离子源，正离子电离(ESI+)；多反应监{911l(M蹦)

5、：毛判官电压：j·u舢；离子源温度：llO'C：脱溶剂气流量：700L／h；锥孔气：50L／ll；去溶剂温度：350。C：碰撞气(m)流量o．24mI．／mjn：碰撞室压力：3．8X10一Pa。分析中以保留时间和离子对(母离子和两个子离子)的信息比较进行定性分析：经过优化的质谱参数见表2。表25种a。受体激动剂离子对参考值_———————————————————————————————————————————————————一但留时问被测物名称定性离子对(“z)定量离子对(III／z)锥孔电压(V)⋯(：in)碰撞能量沁V’替扎尼定254·1>“一254．1>44．13

6、82．88“Ti珊idille254．1>210．030赛拉嗪221．1>90．0304．59“Xylazine221．1>164．026溴莫尼定292．2>170．2292．2>212．3402．42’3Brimonidine292．2>212．330安普乐定245．2>174．2402．66蹦Apraclonidine245．2>209．220可乐定230．0>160．0230．o>213．0433．13’耳—1五磊蕊-磊磊磊藕百磊豕磊丽西丽磊瓦百磊磊丽面磊五—而丽函．3．3标准曲线分别精密称取5种睨受体激动剂类药物对照品，用甲醇配成浓度各约1mg／mL即杯催储备液

7、，2～8℃冷藏保存，有效期六个月。分别移取5种a2激动剂储备液适量，置于棕色容量瓶中，用乙腈：0．2％甲酸水溶液(VⅣ，20／80)溶液逐级稀释成浓度分别为0．5、1、5、10、50、100ng／mL的混合标准对照工作液，现配现用。1．3．4样品的前处理称取2g均质后的猪肉试样于50mL离心管中，准确加入5mL0．1M碳酸钠：0·1M第四届中国兽药大会——动物药品学分会论文集(2012年)碳酸氢钠(9：1，pH为11．5)，振荡混匀，加入10mL乙酸乙酯，充分震荡，然后于8000r／min离心5min，上层清液转移至梨形瓶中，下层溶液中再