超高效液相色谱-串联质谱法同时测定绵羊唾液中14种β-受体激动剂.pdf

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1、第41卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第6期2013年6月ChineseJournalofAnalyticalChemistry899～904DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．21050超高效液相色谱-串联质谱法同时测定绵羊唾液中14种-受体激动剂李阳苏晓鸥王瑞国王培龙张维程劫(中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究，北京100081)摘要以固相萃取为前处理方式，建立了超高效液相色谱-串联质谱法检测绵羊唾液中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等14种一受体激动剂的新方法。试样用pH5．2的乙酸铵缓冲液稀释并沉淀蛋白，离心去杂质后由MCX柱净化、浓缩，经Wa

2、tersBEHCls色谱柱梯度分离，串联质谱法测定，正离子扫描，并以内标法计算结果。方法检出限为0．1～0．2L，定量限为0．3～O．5g／L。3个添加水平的回收率在60％～110％之间；相对标准偏差均小于20％。关键词一受体激动剂；唾液；固相萃取；超高效液相色谱一串联质谱1引言一受体激动剂属于苯乙醇胺类药物，医学上主要用于扩张支气管和增加肺通气量，可治疗哮喘和肺炎。动物实验表明，当用药量超过推荐治疗剂量5～1O倍(同化量)时，能使多种动物(牛、猪、羊、家禽)体内营养成分由脂肪组织向肌肉组织转移，称为“再分配效应”。其结果是体内脂肪分解代谢增强，蛋白质合成增加，显著提高酮体瘦肉率、增重

3、和提高饲料转化率¨J。但是，食用含有一受体激动剂残留的动物产品易出现毒副作用，损害人体健康。我国明令禁止在畜牧养殖过程中使用该类药物。在畜产品．受体激动剂监督检测过程中，尿液¨2“]、血液、动物组织‘6’J、毛发等常被作为主要的测试对象。其中，尿液、血液的检测方法包括快速检测法(如酶联免疫试剂盒法)和仪器检测法(如高效液相色谱．串联质谱法_1。。)。动物组织和毛发由于需要一定的样品前处理过程，主要以仪器检测为主。对于样本收集，尿液采集为无创采集，但往往需要一定的等待时间；血液采集虽时间短，但属于创伤性采集，容易引起动物应急反应；而动物组织主要是终产品检测，需要处死动物，不适用大规模筛查

4、；毛发样品采集简单，但存在不同部位毛发药物含量不均匀现象，并且前处理过程复杂。唾液是动物体内的重要体液之一，血液中的小分子物质能透过细胞膜和粘膜渗透至唾液中，血液中药物浓度的变化会引起唾液中相应成分的改变。唾液与血液、尿液以及组织等样品相比，成分简单，主要包括少量蛋白质、DNA、RNA以及脂肪酸等。唾液样本采集简单，不受地点、时间的限制，采样过程易于监控，并且不会给受试动物带来应激反应，这些优点决定唾液能够成为很好的测试对象。目前，人体唾液检测主要是集中在兴奋剂检测、药物代谢或酒驾检测¨z1B等领域。但是利用动物唾液监测违禁药物使用情况的报道相对较少。鉴于以上唾液检测的优点及可行性，本

5、研究建立了绵羊唾液中14种一受体激动剂超高效液相色谱．串联质谱检测方法，并对样品前处理方法及仪器条件进行优化。本方法适用于绵羊唾液实际样品测定，结果准确、灵敏。2实验部分2．1仪器与试剂Acquity超高效液相色谱仪，XEVOTQ串联质谱仪，Masslynx4．1工作站(美国Waters公司)；自动平衡离心机(Sigma公司)；氮吹仪(日本EYELA公司)。甲酸(纯度为99％，AcrosOrganics公司)；乙腈(HPLC级，Fisher科技公司)；克伦特罗(Clenpen一2012—10-22收稿；2013-01—16接受本文系公益性行业(农业)科研专项(No．201203088)

6、资助}E·mail：foodsciliy@yahoo．tom．an分析化学第41卷tero1)、莱克多巴胺(Ractopamine)、沙丁胺醇(Salbutamo1)、马布特罗(Mabutero1)、西布特罗(Cimbu—tero1)、克仑普罗(Clenpropero1)、妥布特罗(Tulobutero1)、齐帕特罗(Zilpatero1)、氯丙那林(Clorprena—line)、特布他林(Terbutaline)、溴布特罗(Brombutero1)、班布特罗(Bambutero1)及西马特罗(Cimatero1)的标准品均为加拿大Dr．Ethrenstorfer公司产品；苯乙醇胺A

7、(PhenylethanolamineA)、克伦特罗一d9(Clenpen．terol—d9)、莱克多巴胺．d3(Ractopamine．d3)及沙丁胺醇。d3(Salbutamo1．d3)的标准品均为德国WITEGA公司产品；其它试剂均为分析纯；实验用水为超纯水仪制得(Thermo公司)。固相萃取柱：MCX强阳离子交换SPE柱(6Omg，3mL，Waters公司)。空白绵羊唾液样品为自制唾液采集器采集所得。2．2标准溶液制备准确称取适量上述标