fgf10在人类胚胎后肠与肛门直肠发育过程中时空性表达的研究

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1、·中文论著摘要·FGFIO在人类胚胎后肠及肛门直肠发育过程中时空性表达的研究-■上-·_k刖昌成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactors，FGFs)是由众多成员组成的一个超家族。目前在哺乳动物中被鉴定的FGFs已有22种，它们广泛参与了细胞增殖、细胞迁移及细胞分化过程。其中，成纤维细胞生长因子10(fibroblastgrowthfactor10，FGFIO)为成纤维细胞生长因子家族的重要一员。动物实验研究显示，在胚胎发育过程中，FGFl0对肠上皮细胞的存活和增殖起到了至关重要的作用。此外，在尿路上皮的生长、分化和再生中，FGFl0也起了重

2、要调节作用。KrugerV等认为FGFIO可作为肛门直肠畸形(anorectalmalformation，ARM)和泄殖腔外翻(exstrophyofthecloaca，CE)的候选基因。FairbanksTJ等研究发现FGFIO基因敲除小鼠表现出严重的肛门直肠畸形，证实了FGFIO在正常肛门直肠发育过程中发挥了至关重要的作用。综上所述，FGFIO在动物后肠及肛门直肠形态发生中起到重要的作用，然而，目前尚无关于FGFl0在人类泄殖腔，后肠及肛门直肠形态发生过程中表达模式的研究。FGFl0是否参与人类泄殖腔的发育；FGFl0在人类胚胎后肠及肛门直肠的发育过程中是否发

3、挥作用尚不清楚。因此，为了明确FGFIO在人类后肠及肛门直肠形态发生过程中的表达方式及可能的作用，我们应用免疫组化的方法系统的研究FGFl0在人类肛门直肠发育的关键期即胎龄3～8周的时空表达方式。实验方法一、标本1、本研究遵守赫尔辛基宣言，并得到中国医科大学附属盛京医院伦理委员会批准(NO．200(7)PSl4)。收集因意外妊娠而人工流产，发育正常的人胚胎标本85例(每例标本均取得产妇本人同意)。根据产妇末次月经时间、超声所测胎儿双顶径和人胚胎形态学特征等确定胎龄为3～8周。标本经O．01MPBS液冲洗后立即置于4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液中4"C固定12小时"--'

4、24小时，常规脱水，石蜡包埋，进行矢状面连续切片，厚度4¨m。2、标本立即经PBS(phosphate—bufferedsaline；pH7．4)冲洗后，4％多聚甲醛固定，常规方法脱水，制备蜡块，行矢状面连续切片。二、试剂(1)FGF．10多克隆抗体购自美国SantaCruz公司：(2)免疫组化UltraSensitiveTMSP超敏试剂盒(产品编号kit-9701，kit．9709)，多聚赖氨酸、DAB显色剂等购白博士德生物技术开发有限公司。三、方法通过免疫组化染色试验方法连续观察FGFl0在人类胚胎泄殖腔、尿生殖窦以及肛门直肠时空性表达模式。馇里当日7I写第3

5、周时，尚未出现典型的泄殖腔(cloaca，CL)形态，免疫组化显示未见明显FGFl0表达。第4周时，典型的泄殖腔形态已出现，U型的尿直肠隔(urorectalseptum，URS)将泄殖腔分隔为腹侧的尿生殖窦(urogenitalsinus，UGS)和背侧的原始直肠／后肠∞ndgut，H)。免疫组化显示FGFl0大量表达于URS顶端及背侧上皮，星星点点表达在泄殖腔膜(cloacalmembrane，CM)。而URS腹侧上皮及后肠处免疫反应几乎阴性。第5周时，URS继续下降，其顶端与CM的距离逐渐减小。此时FGFl0仍大量表达于URS顶端、背侧上皮及泄殖腔膜，但FG

6、Fl0免疫组化反应强度较第四周弱。同时，后肠开始出现大量表达。而URS腹侧上皮处免疫反应几乎阴性。第6周时，泄殖腔URS背侧顶端上皮FGFl0免疫反应仍然持续强阳性，但CM及后肠FGFl0表达明显减弱，且FGFl0阳性细胞数量明显减小。同时，URS2腹侧上皮FGFl0免疫组化反应仍为阴性。第7周时，CM破裂后，肛门直肠及UGS与羊膜腔相通，FGFl0阳性细胞在肛管上皮消失，但尿道上皮出现FGFl0阳性细胞。第8周时，肛管上皮FGFl0表达仍为阴性，但尿道上皮FGFl0阳性细胞较第7周弱，散在分布于尿道上皮。．结论在人类肛门直肠发育过程中(胎龄4~7周)，FGFl0

7、在泄殖腔膜、背侧尿直肠隔表达阳性；当肛门直肠形成后，FGFl0在肛门区域不再表达，提示FGFl0在人类肛门直肠发育过程中可能发挥重要作用。关键词人类；胚胎：发育；FGFl0；肛门直肠；后肠；泄殖腔；免疫组织化学3·英文论著摘要·SpatiotemporalExpressionofFGFl0duringtheDevelopmentoftheHindgutandAnorectuminHumanEmbryosIntroductionAlthoughembryologyhasbeenresearchedforlong，thedevelopmentalprocessofth

8、ehind