GBT5009.170-2003-保健食品中褪黑素含量的测定.pdf

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1、ICS67.040C53中华人民共和国国家标准GB/T5009.170-2003保健食品中褪黑素含量的测定Determinationofmelatonininhealthfoods2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生部*，中国国家标准化管理委员会‘’IJGB/T5009.170-2003月9吕本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准第一法负责起草单位:卫生部食品卫生监督检验所。本标准第二法负责起草单位:中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所、卫生部食品卫生监督检验所、北京市卫生防疫站。本标准第一法主要起草人:杨大进、王竹天、方

2、从容、昊国华、李萍。本标准第二法主要起草人:李萍、吴永宁、王绪卿、杨大进、吴国华。GB/T5009.170-2003引言褪黑素(Melatonin)是松果体内分泌的一种叫噪类激素，其化学名称为N-乙酞基一4一甲氧基色胺，该物质具有广泛的生理作用。褪黑素类产品已在国外广泛应用，近年来我国也开始大量生产和销售此类产品。为达到保证褪黑素类产品的质量、保护消费者身体健康的目的，特建立保健食品中褪黑素的测定方法。GB/T5009.170-2003保健食品中褪黑素含盘的测定1范围本标准规定了以褪黑素为有效成分的胶囊或片剂包装的保健食品中褪黑素的测定方法。本标准适用于以褪黑素

3、为有效成分的胶囊或片剂包装的保健食品中褪黑素的测定。本标准第一法高效液相色谱一紫外检测法的检出限为0.5ng;取样量。.5g时，检出浓度为0.07mg/kg。第二法高效液相色谱一荧光法的检出限为30pg,线性范围为0.05ng-0.50ng,第一法离效液相色谱一紫外检测法2原理试样中的褪黑素经溶解、稀释、过滤后，使用具有紫外检测器的高效液相色谱仪检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。3试剂除非另有说明，在分析中仅使用确定为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。31甲醇:色谱纯。3.2无水乙醇:优级纯3.3三氟乙酸:优级纯。3.4高效液相色谱流动相:

4、甲醇+水+三氟乙酸=45+55+0.0503.5褪黑素(Melatonin)标准品。3.6褪黑素标准溶液的配制精确称量30mg褪黑素标准品于100mL容量瓶中，加人70%乙醇溶解后定容至刻度。准确吸取2mL上述溶液于10mL容量瓶中，加人流动相(3.4)定容至刻度，此溶液浓度为0.060mg/mL,4仪器设备4.1高效液相色谱仪:附紫外检测器。4.2超声波清洗器。4.3离心机。5分析步骤5，试样处理:使用研钵将片剂或胶囊研成粉末并使之混合均匀。5.2精确称量约一粒片剂或胶囊的质量于10mL容量瓶中，以70%乙醇定容至刻度，使用超声波清洗器提取10min。将提取液

5、离心至澄清。准确量取上清液2mL于10mL容量瓶中，以流动相定容至刻度，混匀后经。.45pm滤膜过滤后进行色谱分析。53测定5.3.1液相色谱参考条件5.3.1.1色谱柱:tx-BondaPakCB,4.6mmX250mm.5.3,1.2紫外检测器:检测波长222nm,5.3.1.3流速:0.8mL/mina5.3.1.4柱温:室温。5.3.2色谱分析407GB/T5009.170-2003量取10fxL标准溶液及试样净化液注人高效液相色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。53，3色谱图见图1。工圈1色谱圈6结果计算按式(1)计算:h、‘。

6、，、10、，，，。二-入心入IV入二二入Iwv一r几用‘入=-.⋯.谙:.，.，.介劝钊曲:.”，.，又1}节7式中:X—试样中褪黑家的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);h—试样的峰高或峰面积;h,—标准的峰高或峰面积;c-褪黑素标准溶液的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);、—试样质量，单位为克(9)。计算结果保留两位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%.第二法离效液相色谱荧光法5原理试样中褪黑素经甲醇反复提取，制成甲醉溶液，按一定比例进行稀释后，注人高效液相色谱仪经反相色谱分离，以荧光检测器进行检测，

7、根据保留时间定性和与标准品峰面积比较进行定量。9试荆9.1甲醇:重蒸。9.2褪黑素标准品:纯度为99.7%.9.2.1储备溶液:精密称取褪黑素标准品。.0100g，用甲醇溶解并配成1岁L的储备溶液，于一20`C保存。9.2.2使用溶液:使用前精密量取一定量标准品储备溶液，根据褪黑素在仪器上的响应情况，用甲醇稀释成标准使用溶液。10仪器10.，高效液相色谱仪:附荧光检测器和微处理机。408GB/T5009.170-200310.2离心机。10.3超声波清洗机。11试样制备片剂研细备用;胶囊内容物混合均匀备用。12分析步骤12.1提取精密称取试样。.2000g于5m

8、L的刻度试管中，加甲醇约