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《smoothened慢病毒干扰载体的构建及其对人牙周膜干细胞增殖与分化的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、第35卷第11期第三军医大学学报Vol.35,No.112013年6月15日JThirdMilMedUnivJun.1520131133文章编号:10005404(2013)11113304论著Smoothened慢病毒干扰载体的构建及其对人牙周膜干细胞增殖与分化的影响1231,415511张洁,常慧君,李雨轩,舒绍兵,罗金英,徐志玲,汤玲,杨彦春,周继祥(400038重庆,第三军医大学123西南医院口腔科;610041成都,四川省军区门诊部口腔科;618000四川德阳,德阳市第二人民医院口腔科;401
2、147重庆,武警重45庆总队机关门诊部口腔科;400044重庆,重庆大学生物医学工程学院)[摘要]目的体外构建及筛选人Smoothened(SMO)基因的慢病毒干扰载体,使用此载体下调人牙周膜干细胞(humanperiodontalligamentstemcells,PDLSCs)中SMO基因表达并检测其对细胞增殖与分化的影响。方法针对人SMO基因设计3条干扰序列,构建RNA干扰慢病毒载体,在293FT细胞中包装病毒液并转染293A细胞,通过实时荧光定量PCR检测干扰效率,得到具有最佳干扰效率的病毒后,转染P
3、DLSCs,用Westernblot检测其对PDLSCs中SMO基因的干扰效果及对细胞分化的影响,CCK8法检测其对PDLSCs增殖的影响。结果成功构建3个SMO慢病毒干扰载体(pGPSMO1、pGPSMO2、pGPSMO3),通过转染293A细胞并进行实时荧光定量PCR检测后,得到pGPSMO1具有最佳干扰效率,转染后SMOmRNA水平下降到对照的(28.5±2.5)%。利用此病毒能够很好地转染体外培养的PDLSCs,并使PDLSCs中SMO蛋白水平下降80%。进一步检测细胞增殖发现,与未转染组比
4、较,SMO下调后PDLSCs增殖变慢[(1.09±020)vs(1.86±0.21),P<001]。同时也导致成骨分化标志物Runx2的蛋白表达下调。结论利用慢病毒介导的干扰病毒载体成功干扰了PDLSCsSMO基因的表达,SMO基因的下调会导致PDLSCs增殖减慢,成骨分化能力减弱。[关键词]Smoothened;RNA干扰;慢病毒;人牙周膜干细胞[中图法分类号]R322.41;R329.28;R39433[文献标志码]AConstructionoflentiviralRNAivectorscontai
5、ninghumansmoothenedgeneanditsinhibitoryeffectonproliferationanddifferentiationinhumanperiodontalligamentstemcells1231,41551ZhangJie,ChangHuijun,LiYuxuan,ShuShaobing,LuoJinying,XuZhiling,TangLing,YangYanchun,112ZhouJixiang(DepartmentofStomatology,SouthwestHo
6、spital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,400038;Departmentof3Stomatology,OutpatientDepartmentofSichuanMilitaryCommand,Chengdu,SichuanProvince,610041;DepartmentofStomatology,4DeyangSecondPeople’sHospital,Deyang,SichuanProvince,618000;DepartmentofStom
7、atology,AuthorityClinicofChongqingArmed5PoliceForce,Chongqing,401147;CollegeofBiomedicalEngineering,ChongqingUniversity,Chongqing,400044,China)[Abstract]ObjectiveToconstructthelentiviralvectorofhumansmoothened(SMO)genewhichcandownregulatetheSMOexpressionin
8、humanperiodontalligamentstemcells(PDLSCs).MethodsAccordingtothehumanSMOgene,3sequencesweredesignedtobuildRNAinterferencelentiviralvector.Allthe3vectorswerepackagedin293FTcells,andthentransfectedintothe
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