人tnfα重组慢病毒载体构建及其脐血间质干细胞表达的论文

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1、人TNFα重组慢病毒载体构建及其脐血间质干细胞表达的论文人tnfα重组慢病毒载体构建及其脐血间质干细胞表达【关键词】慢病毒感染;遗传载体;肿瘤坏死因子α;基因;脐血;间质干细胞【摘要】目的构建带有人tnfα基因的慢病毒载体，并且观察该基因在体外人脐血间质干细胞中的表达。方法通过逆转录聚合酶链反应(rtpcr)从pcddnatnfα质粒中获得人tnfα基因，利用infusion技术重组构建慢病毒载体穿梭质粒pgcfutnfα，在脂质体lipofectamine2000介导下与结构质粒phelper1.0和包膜质

2、粒phelper2.0共转染293t细胞包装生产慢病毒。将人脐血间质干细胞分为实验组(pgcfutnfα)、空载体对照组(pgcfuegfp)及空白组(脐血间质干细胞)，分别用重组慢病毒、空载慢病毒、pbs感染后，采用rtpcr以及elisa方法检测tnfα表达。结果所获tnfα基因测序证明与genbank中序列一致;重组慢病毒载体质粒pgcfutnfα经鉴定正确;三质粒共转染293t细胞成功，收集、浓缩病毒后测定其滴度为2×107tu/l，感染脐血间质干细胞后rtpcr、elisa检测3组细胞均有tnf

3、α表达,其中实验组大量表达tnfα,与其余两组比较差异有显著性(f=11.677、21.321，p<0.01)。结论成功构建带有tnfα基因的慢病毒载体并实现在脐血间质干细胞中的表达，为脐血间质干细胞转基因治疗胃癌的应用奠定基础。.【关键词】慢病毒感染;遗传载体;肿瘤坏死因子α;基因;脐血;间质干细胞　constructionoflentiviralvectorcarryingtnfαgeneanditsexpressioninhumanumbilicalcordbloodmesenchymalstemcellsm

4、aguiliang,maoentofgeneralsurgery,theaffiliatedhospitalofqingdaouniversitymedicalcollege,qingdao266003,china);[abstract]objectivetoconstructalentiviralvectorcarryinghumantnfαgene,andobserveitsexpressioninhumanumbilicalcordbloodmesenchymalstemcells(ucbmscs).methodshu

5、mantnfαgeneerasechainreaction(rtpcr)frompcddnatnfαplasmid.thetnfαgeneidpgcfutnfαbyinfusiontechnique.the293tcellsidpgcfutnfα,theconstructionplasmidhelper1.0andtheenvelopeplasmidhelper2.0ine2000toproducelentiviralparticles.humanucbmscsentalgroup(pgcfutnfα

6、),mockgroup(pgcfuegfp)andblankgroup(ucbmscs),ptylentiviralparticlesandpbs,respectively.theexpressionoftnfαididsoflentiviralvectorsscs,tnfαexpressiondetectedscsgroupatbothmrnaandproteinlevels(f=11.677,21.321;p<0.01).conclusionlentiviralvectorcarryingtnfαgeneha

7、sbeensuccessfullyconstructed.theinfectedhumanucbmscscanexpresstnfαprotein.theresultsofpresentstudyprovidebasisforapplicationofucbmscsgenetransfertherapyinthetreatmentofgastriccarcinoma.　　[keyornecrosisfactoralpha;gene;umbilicalcordblood;mesenchymalstemcell　　肿瘤坏死因子

8、α(tnfα)是一种重要的免疫调节因子,具有杀伤和抑制肿瘤的作用[1]。体外研究表明，tnfα是目前发现最有效的肿瘤杀伤因子之一，但全身给药难以达到体外实验中有效的抗肿瘤效果。脐血间质干细胞具有多向分化潜能及定向肿瘤部位迁移并构成肿瘤间质的特性[2]。本实验