马鹿茸血蛋白免疫活性肽的制备与其活性.研究

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1、独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得江南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。签名：关于论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解江南大学有关保留、使用学位论文的规定：江南大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保

2、存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后也遵守此规定。签名：导师签名：第一章绪论生物活性肽是指对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物，是蛋白质中20个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环状结构的不同肽类的总称，也是源于蛋白质的多功能化合物。生物活性肽只有通过酶解等方式水解之后，其活性才能被释放出来，免疫活性肽就是利用蛋白酶水解的方式得到的一种生物活性肽。免疫活性肽的研究已成为医学中非常活跃的研究领域，随着研究的日趋深入将有更多新的免疫活性肽被发现。由于这些免疫活性肽具有分子量小、稳定性强，且免疫原性

3、弱、生物活性高等诸多优点，可以制成各种免疫制剂，用于免疫低下、自身免疫性疾病等的治疗【l】。免疫活性肽具有增强机体免疫力，刺激淋巴细胞增殖，增强巨噬细胞吞噬等多种生理功能，因而具有广阔的应用前景【2】。1．1免疫活性肽的研究现状与趋势免疫活性肽是继类吗啡活性肽发现后首次从乳中获得并证明其生理活性的一类生物活性肽。免疫活性肽研究始于1981年，Jells等【3】首次报道，利用胰蛋白酶水解人乳蛋白，水解物中得到一种具有免疫活性的肽段，体外实验证明此短肽能够增强小鼠腹腔巨噬细胞对绵羊红细胞的吞噬作用，此后科学家对植物来源以及动物来源的免疫活性肽进行了大量的研究：研究证明大豆蛋白来源的

4、多肽具有增强大鼠肺泡巨噬细胞吞噬绵羊红细胞的功能【4】，以及刺激多核白细胞吞噬和免疫调节等功能【5】；张亚飞等【6J证明小麦蛋白酶解物能够促进小鼠脾淋巴细胞增殖；Comell【‘7】等从小麦醇蛋白的胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解物中分离出一种体外培养的腹膜炎患者全血产生a．干扰素的活性肽，其氨基酸序列为：Arg．Pro．Glin．Pro．Tyr-Pro．Gin—Pro．Gin．Pro．Gin．Pro．Gin。动物蛋白来源的免疫活性肽的研究主要集中在乳蛋白：包括一些胎盘免疫调节因子，胸腺肽类、促吞噬肽类，神经肽类等。动物性蛋白的蛋白质含量丰富，氨基酸组成平衡，营养价值高，是很好的活性肽制

5、备原料，人们从动物性蛋白中制备了多种功能性肽【8’9】。1．1．1动物蛋白来源的免疫活性肽常见的动物蛋白质有乳酪蛋白、鸡蛋蛋白、肉类蛋白等，随着技术的发展，血液蛋白研究也在逐渐引起人们的重视。1．1．1．1乳酪蛋白乳酪蛋白来源的生物活性肽的研究始于1979年，1979年德国的Brand等【loJ人用胰蛋白酶水解B一酪蛋白得到了一个由7个氨基酸残基组成的多肽产物，并证明它们具有类吗啡活性，从此人们展开了乳蛋白来源的包括免疫活性的生物活性肽方面的研究。目前为止，科学家们已经从乳酪蛋白的一级结构的氨基酸序列中分离出了多种具有重要生理功能的生物活性肽，如：经胃蛋白酶水解a．酪蛋白并分离

6、纯化得到的的Arg—T弦Leu_G1y—Tyr—Leu—Glu(90—96)和Arg—Tyr．Leu—Gly-Tyr-Leu(90—95)，两短肽具有免疫调节活性，可增强淋巴细胞增殖，提高自然杀伤细胞(NK)活性，促进嗜中性白细胞的移动⋯】；B一酪江南大学硕士学位论文蛋白酶解物得到的六肽Pro．Gly-Pro．1ie．Pro．Asn(63．68)和三肽Leu．Leu-Tyr(191．193)都具有明显促进抗体形成、增强鼠巨噬细胞吞噬作用，增强小鼠对胁／e／／apneumonia的抵抗能力。另外，三肽还可以增强抗体依赖型T细胞增殖【12】；采用胰蛋白酶酶解k一酪蛋白得到的五肽Ph

7、e-Phe-Ser-Asp．Lys相当于k一酪蛋白17．21氨基酸残基，该肽具有促进抗体形成，增强人和鼠巨噬细胞吞噬活性【l引，乳铁蛋白和乳转铁蛋白B都可刺激人多形核白细胞(PMN)产生嗜中性白细胞活化趋化因子一白细胞介素．8(1L8)【141。1．1．1．2血液蛋白来源动物血液含有丰富的蛋白质，我国是从上世纪七八十年代开始研究畜禽血液的利用，到今天已经积累了很多有价值的研究资料，取得了极大的研究进展，但还是存在着某些问题：一是品种单一，除了猪血的一部分用于食用以及饲料外，其它种类血液研究很