螺旋藻活性肽的制备及其免疫调节功能研究

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1、广西大学硕士学位论文螺旋藻活性肽的制备及其免疫调节功能研究姓名：杨磊申请学位级别：硕士专业：工学制糖工程指导教师：滕建文20090603螺旋藻活性肽的制备及其免疫调节功能研究摘要本课题借助螺旋藻自溶酶，或辅助添加外源蛋白酶，对新鲜藻泥进行酶解，制备螺旋藻活性肽，并研究其免疫调节活性。直接利用新鲜藻泥开发多肽产品，既增强了螺旋藻的保健功能，又节省了将藻泥干燥成粉的成本；螺旋藻肽可提高营养成分的吸收利用率，提升产品附加值，同时对螺旋藻业的企业利益及其产业的稳定良性发展有直接、深远的现实意义。选用木瓜蛋白酶做工具酶，采用对比试验法，以酶解产物的DPPH清除率及多肽得率为评价指标，实验表明螺旋藻

2、自溶酶不仅可提高以上两个指标，对产物腥味的去除、颜色的浅化等方面也起到一定作用；藻泥酶解产物的感官评价较好，且其上述两指标均明显高于藻粉酶解产物。单因素分析和响应面法优化藻泥酶解条件为：pH7．0(酶解过程中不需维持pH恒定)，料液比1：2，加酶量0．12％，酶解温度55．7。C，酶解时间3．34h。该条件下制备出的酶解产物的多肽得率和DPPH清除率分别为(75．87±0．14)％、(57．18±0．19)％，在理论预测值的95％置信区间内，说明模型的优化结果与实际情况是相吻合的。采用对比试验法优化醇沉除多糖工艺参数，选择三倍体积的90％乙醇溶液，多糖脱除率为(84．88±O．33)％、

3、肽回收率为(92．39±O．25)％；超滤后的螺旋藻肽回收率为(95．36±O．27)％；以原料干基计，螺旋藻肽最终得率为51．42％；98％左右的分子量分布在1000Da以下；氨基酸组成较合理；螺旋藻肽具有明显的清除DPPH作用，当浓度达至lJ4mg／ml时，其清除率接近50％；对羟基自由基、超氧阴离子均有一定的清除作用；具有一定的还原能力。动物实验结果表明螺旋藻肽不仅能显著提高正常小鼠的免疫功能，而且能显著提高环磷酰胺致免疫低下小鼠的脏器指数、廓清指数(K)和吞噬指数(Q)、抗体生成细胞含量及血清溶血素含量(P

4、(P>O．05)。关键词：螺旋藻泥活性肽酶解自溶酶抗氧化免疫调节IlSTUDYoNPREPARATIoNoFACTIVEPEPTIDESFRoMSPIRULINAMUDANDITSIMMUNEREGULATINGFUNCTIoNABSTRACTThefleshSpirulinamudwashydrolyzedwithitsendogenousproteinasesorexogenousproteasetoproduceactivepeptide，anditsimmuneregulatingfunctionwasinvestigated．Itimprovedthehealthfunctio

5、nofSpirulinaandsavedthecostofdryingSpirulinahydrolyzingdirectlyfleshSpirulinamud．Spirulinaactivepeptideimprovesabsorptionandincreasesaddedvalueofproducts．Meanwhile，itconstructesdirectlyenterprisebenefitsandhaveprofoundsignificanceandstabledevelopmentonSpirulinaindustry．Aftercomparativeanalysiswit

6、hthepeptidesproductionTCA—NSIandDPPHscavengingrateasevaluationindexes，itshowsthattheendogenousproteinasesplayedcertainroleofthetwoindexes，theremovingoffishysmellandtheimprovementofcolor．ThehydrolysisresultofSpirulinamudandpowderwascompared．Itshowsthattheindexesofmudwereobviouslysuperiortothemofpo

7、wder．Basedontheresultsofone—factor—at-a-ime-technique，responsesurfacemethodologywasappliedtooptimizethehydrolysisconditions．Consideredproductcostandprocessrequirement，theoptimumconditionswereobtained：pH7．0，solid—liquid