微血管内皮细胞诱导骨髓间充质干细胞心肌样分化

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1、微血管内皮细胞诱导骨髓间充质干细胞心肌样分化廖礼强1张晓刚1史若飞2王丁琼1汤为学3（1.重庆医科大学附属第一医院心内科，2.重庆市急救医疗中心，3.重庆市神经病学重点实验室重庆400016）【摘要】目的：探讨微血管内皮细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的潜能，以期寻找一种理想的诱导方式。方法：常规分离培养骨髓间充质干细胞，组织块法培养纯化大鼠微血管内皮细胞，transwell小室嵌入培养板孔制备双室培养模型，按微血管内皮细胞的可能作用机制将实验分为直接接触组（Ⅰ）、双室培养组(Ⅱ)、条件培养液组(Ⅲ)、培养液对照组(Ⅳ)（n=6）。诱导期间每日于倒置显微镜观察各组细

2、胞生长情况及有无搏动的集落，诱导末期行细胞免疫荧光检测骨髓间充质干细胞心肌标志物TnI的表达情况；健康SD大鼠15只建立心肌梗死模型后，随机分为细胞移植组和对照组，将微血管内皮细胞预处理过的DAPI标记的骨髓间充质干细胞经外周血管途径注入心梗大鼠体内，冰冻切片行免疫荧光检测间充质干细胞归巢及心肌标志物TnI和α-actin表达情况。结果：各组细胞生长均良好，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组部分骨髓间充质干细胞经诱导后形态变为杆状或不规则状，心肌标志物TnI阳性表达，且Ⅰ、Ⅱ组诱导率[分别为(14.52±1.72)%，(13.84±1.08)%]均高于Ⅲ组[(8.18±2.01)%]，结果有统计学

3、差异（P<0.05），前两者比较无统计学差异，而Ⅳ组骨髓间充质干细胞始终无上述形态改变和TnI表达，各组均未见搏动的细胞集落。移植后骨髓间充质干细胞能归巢到心脏梗死灶及周边区，荧光显微镜下细胞核呈蓝光并表达TnI和α-actin。结论：微血管内皮细胞能通过旁分泌途径诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化，其分泌的细胞因子的持续补偿可增强其心肌诱导分化率，而细胞间直接接触并未发挥明显的诱导优势；经微血管内皮细胞预处理过的骨髓间充质干细胞移植后能归巢到心肌梗死灶及周边区并向心肌样细胞分化。【关键词】微血管内皮细胞；骨髓间充质干细胞；心肌；分化【中国图书分类法分类号】R322.11；

4、R329.21；R329.24【文献标识码】A基金资助：重庆市科委自然科学基金（渝科发计字[2005]54号）作者介绍：廖礼强（1983—），男，汉族，四川峨眉人，医师，在读硕士，主要研究方向：干细胞向心肌细胞诱导分化，Tel：15823826727，E-mail：lawrenforce@sina.com通信作者：张晓刚（1957—），男，汉族，重庆人，博士，教授，主任医师，硕士生导师，发表论文30余篇，主要研究方向：冠心病发病机制及治疗，干细胞向心肌细胞诱导分化，Tel：13193118197，E-mail：zxg0233@sina.comRoleofmicrovascul

5、arendothelialcellsoninducingbonemarrow13RoleofmicrovascularendothelialcellsoninducingbonemarrowmesenchymalstemcellsdifferentiationintocardiomyocytesLIAOLi-qiang1ZHANGXiao-gang1SHIRuo-fei2WANGDing-qiong1TANGWei-xue3(1.DeparmentofCardiology,theFirstAffiliatedHospital,ChongqingMedicalUniversit

6、y;2.DeparmentofCardiology,EmergencyMedicalCentre,Chongqing;3.Chongqinghigh-colleagekeylaboratoryofneurology;Chongqing400016)【Abstract】Objective:Toinvestigatetheroleofmicrovascularendothelialcellsoninducingbonemarrowmesenchymalstemcellsdifferentiationintocardiomyocytes,expectingtofindaperfec

7、tmethod.Methods:Bonemarrowmesenchmalstemcellswereisolatedandculturedasusual,andmicrovascularendothelialcellswereculturedandpurifiedusingthe“tissuemass”method,thenabi-chambercoculturemodelwasestablishedbyinsertingatranswellchamberintotheholeofaculturedish