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时间:2018-12-27
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1、与乳酸菌具有共生作用酵母菌培养基的优化摘要:以对乳酸菌(LC5)有促进作用的酵母菌(YE4)为研究对象,OD值和活菌数为测定指标,筛选合适的培养基。通过对5种酵母菌常用培养基的初筛及二次筛选,确定在YPD培养基中YE4生长良好。以YPD培养基作为基础培养基,进一步利用单因素试验和正交试验的设计方法对其进行优化,得出改良YPD培养基的最佳成分是大豆蛋白胨为0.4%,胰蛋白胨为0.4%,酵母浸提粉为0.4%,蔗糖为1.2%,蒸馏水为100mL。改良YPD培养基活菌计数测得的活菌数可达到5.01×108CFU/mL,比YPD基础培养基高
2、一个数量级;OD值是YPD基础培养基的1.06倍。关键词:酵母菌;培养基;优化OptimizationMediumofYeastYE4HavingSymbioticFunctionwithLacticAcidBacteriaLC5Abstract:Yeast(YE4)istakenasresearchobject,whichcanpromotetheroleoflacticacidbacteria(LC5),andOD600andviablecountareasdeterminationofindicatorstofiltersu
3、itablemediumofYE4.Byselectingfrom5mediumswhichtheYE4usuallyused,theresultshowsthattheYE4growsverywellinYPDmedium.SoYPDisselectedasthebasemedium,byusingsinglefactorexperimentandorthogonaltestdesignmethodtooptimizeit,andthebestingredientsofthemodifiedYPDarethat:soypepto
4、ne0.4%,tryptone0.4%,yeastextractpowder0.4%,sucrose1.2%anddistilledwater100mL.TheviablecountofYE4withmodifiedYPDcanreach5.01×108CFU/mL,whichismorethanbasismediumoneorderofmagnitude,also,theODvalueis1.06timesthanthebasisYPDmedium.Keywords:yeast(YE4);medium;optimization酵
5、母菌是一种单细胞真核微生物[1],是子囊菌、担子菌等单细胞真菌的通称。多数酵母可以分离于富含糖类的环境中,比如一些水果(葡萄、苹果、桃等)或者植物分泌物(如植物的叶子)[2]。比细菌的单细胞个体要大得多,一般为1~5μm或5~20μm。酵母菌无鞭毛,不能游动。酵母菌的生殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两大类,其在有氧和无氧的环境中都能生长,即酵母菌是兼性厌氧菌。在有氧的情况下,它把糖分解成CO2和水,且生长较快;在缺氧的情况下,酵母菌把糖分解成酒精和CO2。在现代工业中除了用于酿酒外,还用于甘油、食用酵母、有机酸、酶制剂、石油脱蜡,以
6、及饲料等的生产[3]。酵母菌一般还能利用无机氮源或尿素来合成蛋白质,已经成为目前最重要的单细胞蛋白来源[4]。在传统发酵乳制品中,乳酸菌与酵母菌作为益生菌对产品的发酵过程发挥着主导作用。因此,乳酸菌与酵母菌作为对人体有益的微生物,它们有着相似的生长条件和营养需求,即共生基础。例如,它们都能很好地利用糖来进行糖发酵。有研究表明酵母泥中的大分子物质通过乙醇提取后,添加在合成培养基上,可以缩短乳酸菌的迟滞期,增加乳酸菌的数量,原因可能是酵母大分子物质能诱导乳酸菌中氨基肽酶的合成,使氨基酸及小分子缩氨酸含量增加,从而促进乳酸菌的生长;另外
7、酒精发酵或酵母自溶产生的吡喃甘露糖可以吸收中链脂肪酸,解除其对乳酸菌的毒害作用,还可能增加乳酸菌的α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、N-乙酰基β-表1L9(34)正交试验因素与水平设计葡萄糖脱水酶及肽酶的活性,使培养基的营养丰富,间接地促进乳酸菌的生长[5]。GobbettiM等人[6]在MRS培养基中,通过添加4种不同碳源(麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、果糖)来研究2株酵母菌与2株乳酸菌之间的相互作用。结果显示,在添加了蔗糖的MRS培养基中双菌培养的乳酸菌活菌数明显高于单菌培养的活菌数,笔者通过蔗糖分解的动力学曲线分析其原因是酵母菌可以将
8、蔗糖分解为葡萄糖和果糖,为乳酸菌提供稳定的碳源。此外,有些酿酒酵母的生理特性(蛋白酶活性、大分子物质生成)及自溶量等,都可能对乳酸菌的生长及苹果酸-乳酸发酵起促进作用,因此添加酵母提取物对乳酸菌的生长和代谢活性有一定的促进作用[7],但关于这方面研
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