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时间:2018-11-29
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1、地榆水提液对四种癌细胞生长抑制作用的研究【摘要】 目的 研究地榆水提液对癌细胞生长的抑制作用。方法细胞形态观察和活细胞计数法研究地榆水提液对人白血病细胞K562,肝癌细胞HepG2,胃癌细胞BGC823,宫颈癌细胞Hela生长的抑制作用。结果地榆水提液可使4种癌细胞形态上发生皱缩、变圆、脱壁、碎裂等变化,生长受到明显抑制,抑制率最高可达85.20%。结论地榆有确切的抑癌作用,并与中医的气血理论和药物归经理论相一致,再次说明了中医基本理论的博大精深,即便在体外细胞水平上也有良好体现,对实验室手段研究中医药同样有着重要指导意义。【
2、关键词】地榆;癌细胞;生长;抑制作用 Abstract:ObjectiveToinvestigatetheinhibitoryeffectsoftheextractofSanguisorbaofficinalisL.onhumancarcinomacells.MethodsMorphologicalchangeobservationandlivecellaccountinganchronicmyloidleukemiaK562cell,hepatomaHepG2cell,cervicalcarcinomaHelacelland
3、gasticcarcinomaBGC823cell.ResultsGroorphologicalchangesincludedshrinkage,roundness,floatingandcrumbling.ConclusionSanguisorbaofficinalisL.hasreliablecarcinoma-inhibitingeffectsandtheeffectsconformtothe“qi”andbloodtheoryandtheMeridian-reachingtheoryoftraditionalChines
4、emedicine. Keyacell;Groin,纱布过滤,滤渣加适量六蒸水置115℃高压蒸气锅内30min,纱布过滤;合并两次滤液,2℃冰箱静置72h,高、中、低速滤纸,0.45μm,0.22μm微孔滤膜逐级过滤;滤液蒸发浓缩,灭菌,4℃保存,使用时以培养液稀释至所需质量分数(以生药计算)。 1.2器材与试剂 倒置相差显微镜(NikoneclipseTE2000-U),超净台(苏州净化设备有限公司),CO2培养箱(GALAXYBINDER),24孔培养板(BIOFIL),RPMI1640,高糖DMEM(GIBCO),胎
5、牛血清(TBD)。 1.3癌细胞系人白血病细胞系K562,肝癌细胞系HepG2,胃癌细胞系BGC823,宫颈癌细胞系Hela(均由本实验室传代保种),均常规传代培养。 2方法 2.1实验分组每种细胞均设对照组(不加药)与观察组(加药),观察组分设高(4mg/ml)、中(1mg/ml)、低(0.25mg/ml)3个浓度组。 2.2加药处理取对数生长期的4种癌细胞,均以2×104/孔接种于24孔培养板,接种24h后加药。加药后:①每天于倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;②每隔24h各组均取5孔细胞台朌蓝拒染法计活细胞数,每孔
6、计3次,5孔取平均值,计算出当天的生长抑制率,抑制率(%)={(对照组平均活细胞数-观察组平均活细胞数)/对照组平均活细胞数}×100%,〔1〕,连续6d。 2.3抑制效果的判断与分析 ①细胞形态的观察与分析:参考章静波的五级分类评价〔2〕;②平均抑制率:6d的抑制率相加取平均值;③最高抑制率:每种细胞各浓度组取其6d中最高的一天。抑制率的比较采用χ2检验。 3结果 3.1地榆水提液对细胞形态的影响 对照组:HepG2,BGC823和Hela紧贴板壁,胞间紧密接触,胞质透亮,可见分裂相,连续观察,细胞继续生长,集落不断
7、扩大,属0级;K562胞体发亮,大小均匀,日益密集。观察组:加药后8~10h,HepG2,BGC823和Hela部分胞体回缩,胞质内有颗粒物积累,属1级;K562多数胞体变暗,大小不均。加药后24h,BGC823和Hela部分皱缩、变圆、脱壁,仍属1级,HepG2(图1)板底已可见碎渣样物质,属2级;K562(图2)大部分形态异常,或皱缩或内容物释放形成“鬼影”,板底可见碎渣样物质。加药后48h,BGC823和Hela更多的脱壁并出现碎渣,属2级,HepG2大量浮起,碎渣量大,属3级;K562多数崩解。 3.2地榆水提液对4种
8、癌细胞生长的平均抑制率 见表1。由表1可见,地榆水提液对4种癌细胞的生长都有明显抑制作用,但它们的抑癌效果是不同的,如高浓度组中,K562的抑制率最高,可达83.72%,Hela的抑制率最低,也在54.11%,四者间相互比较,K562>HepG2>BGC823
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