1型糖尿病大鼠肾脏ⅳ型胶原的表达及坎地沙坦的干预作用的论文

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1、1型糖尿病大鼠肾脏Ⅳ型胶原的表达及坎地沙坦的干预作用的论文1型糖尿病大鼠肾脏ⅳ型胶原的表达及坎地沙坦的干预作用【关键词】糖尿病肾病;大鼠;ⅳ型胶原;坎地沙坦【摘要】目的探讨1型糖尿病大鼠造模后肾脏ⅳ型胶原的表达及肾小球病理形态改变及坎地沙坦的保护作用和机制。方法雄性组)12只和坎地沙坦干预组(dmc组)12只;dmc组给予坎地沙坦5mg·kg-1·d-1灌胃。干预12ga)、肾小球平均体积(mgv)和肾小球系膜基质分数(mmf);免疫组化法检测肾小球ⅳ型胶原的表达。结果与nc组相比，dm组大鼠的fpg、24huae、ccr及ki均显著升高(p<0.01)，mg

2、a、mgv及mmf显著增大(p<0.01)，肾小球ⅳ型胶原的表达明显增加(p<0.01);dmc组较dm组肾小球ⅳ型胶原的表达明显减少(p<0.01)，fpg、24huae、ccr及ki均显著降低(p<0.01)，mga、mgv及mmf显著减小(p<0.01);三组间大鼠血压差异无统计学意义(p>0.05)。.cOm结论糖尿病大鼠肾脏ⅳ型胶原表达增加;坎地沙坦具有独立于降压以外的肾脏保护作用。【关键词】糖尿病肾病;大鼠;ⅳ型胶原;坎地沙坦　在我国，糖尿病肾病(dn)是导致终末期肾病的第三大病因，仅次于肾炎和高血压。ⅳ型胶原是肾小球系

3、膜和基底膜的主要组分之一，是dn时细胞外基质增殖的主要成分，是dn早期表现之一。在dn中阻断ras系统可以有效减轻尿白蛋白程度，延缓肾动脉硬化及肾脏纤维化的进展。坎地沙坦作为较强的血管紧张素1型受体(at1)阻滞剂，对于其能否改善糖尿病大鼠肾脏结构及功能损伤报道不多。本研究观察坎地沙坦对糖尿病大鼠肾脏功能、肾小球病理形态改变及ⅳ型胶原的影响，为dn的防治提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1动物模型建立和分组　　清洁级雄性g/kg，72h后尾静脉取血测随机血糖>16.7mmol/l为糖尿病大鼠。造模成功的大鼠随机平分为糖尿病组(dm组，n=12)和坎地沙坦干预

4、组(dmc组，n=12)。干预组大鼠给予5mg·kg-1·d-1坎地沙坦(维尔亚，重庆圣华曦药业有限公司)灌胃，另两组给予等量生理盐水灌胃。实验期间自由进食、饮水，不使用胰岛素及其他降糖药物。　　1.2方法　　1.2.1标本收集　　干预12anx20自动生化分析仪测定;ccr按公式计算：ucr×每min尿量(ml)/scr，并以体重(kg)校正。24huae采用放射免疫法检测;肾重指数(ki)=左侧肾脏重量(mg)/体重(g)。采用panlab无创血压测量仪测量大鼠清醒状态下尾动脉收缩压(sbp)(取3次测量的均值)。　　1.2.3肾脏病理检查　　肾组织切片4μm，行

5、he和pas染色;应用imageproplus图像分析系统对pas染色切片(400倍)进行图像分析。每张切片随机选取10个正切的肾小球，测定肾小球平均域面积(mga)及肾小球内pas阳性染色面积，计算肾小球系膜基质分数(mmf)即pas阳性染色面积/mga，及肾小球平均体积(mgv)〔1〕=β/k×(mga)3/2。　　1.2.4免疫组化检测　　采用免疫细胞组化染色法(sabc)法(sp试剂盒购于北京中山生物技术有限公司)，以磷酸盐缓冲液(pbs)代替一抗作阴性对照染色。石蜡包埋切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢甲醇灭活内源性过氧化物酶,胰酶修复抗原后，山羊血清封闭非特

6、异性抗原，滴加兔抗大鼠ⅳ型胶原抗体(1∶100，武汉博士德公司)，4℃孵育过夜。滴加二抗、三抗，最后显微镜下控制二氨基联苯胺(dab)显色，苏木素复染。肾小球ⅳ型胶原表达采用半定量分析，即随机选取10个正切的肾小球(400倍)，根据着色情况计算阳性指数(pi)〔2〕，pi=阳性信号面积×阳性强度，求和，取平均值。　　1.3统计学分析　　采用spss13.0统计软件包进行分析，数据资料以x±s表示，多组间均数比较采用方差分析，组间两两比较采用q检验。　　2结果　　2.1基本指标　　实验结束时，与nc组相比，dm组fpg、24huae、ki、ccr均显著升高，差异有统计学

7、意义(p<0.01);与dm组相比，dmc组除fpg外，均明显降低(p<0.05);三组间大鼠sbp差别无统计学意义(p>0.05)。见表1。　　2.2肾小球形态病理变化　　石蜡切片经he和pas染色，与nc组比较，dm组大鼠mga和mgv均显著增大(p<0.01)，肾小球内pas阳性染色物质增多，系膜区增宽，系膜细胞增生，肾小球基底膜增厚，mmf明显增高(p<0.01);dmc组较dm组mga、mgv及mmf均明显减小(p<0.05)。见表2。　　2.3肾小球ⅳ型胶原表达　　免疫组化结果显示，nc组大鼠肾小球仅有