rphplc法测定小鼠血浆中蒿甲醚的浓度

《rphplc法测定小鼠血浆中蒿甲醚的浓度》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、RPHPLC法测定小鼠血浆中蒿甲醚的浓度【摘要】目的建立测定小鼠血浆中蒿甲醚浓度的方法。方法采用RPHPLC法，色谱柱为DiamonsilC18柱（150mm×4.6mm,5μm），流动相为甲醇水（体积比85∶15）；流速为1.0mL/min；检测波长为210nm；柱温为室温。利用甲基叔丁基醚对小鼠血浆及组织中蒿甲醚及蒿乙醚进行提取后进行测定。结果蒿甲醚与蒿乙醚的色谱峰分离良好并且出峰时间相近，以蒿乙醚为内标测定血浆中蒿甲醚符合方法学要求，血浆标准曲线在一定范围内线性关系良好（R2=0.9991,n=5）

2、,高、中、低3个浓度的回收率均为97%以上，日内及日间RSD均小于3%。结论建立的方法可简单快速测定蒿甲醚在小鼠血浆中的浓度，为内标法测定蒿甲醚在动物血浆中的浓度提供思路。【关键词】蒿甲醚；蒿乙醚；高效液相色谱法；内标法；血药浓度　　ContentanalysisofartemetherinmiceplasmabyRPHPLC　　ethodsArtemetherandarteehterinmiceplasmaethyltertbutyletherbeforedetection,thenanalyzedona

3、DiamonsilC18column（150mm×4.6mm,5μm）.ThemobilephaseconsistedofmethanolL/min.Theandroomtemperatureinationofartemether.ResultsThechromatographicpeaksofartemetherandarteetherilarretentiontimesattheselectedHPLCcondition.Thereetheranalysisorethan96%duringhigh,mid

4、dleandloether.RSDsofetherinplasmacouldbeanalyzedeasilyandrapidlybytheestablishedHPLCmethod.　　Keyether;arteether;HPLC;innerstandardmethod;blooddruglevel　　青蒿素（qinghaosu,QHS）类化合物是我国在90年代初期开发的具有良好抗疟疾活性的倍半萜类化合物［1］。其中，青蒿素的脂溶性衍生物蒿甲醚(artemether,ARM)近年来颇为引人关注，其抗疟疾效果是

5、青蒿素的10倍［2］。最近，青蒿素类化合物在抗癌领域也受到越来越广泛的关注，尤其是在抗非小细胞肺癌及白血病治疗方面有显著作用［3-4］。　　蒿甲醚的含量测定方法　　2.4血浆中蒿甲醚含量测定标准曲线的制备　　取3份250μL小鼠血浆，分别加入6.32mg/mL蒿甲醚甲醇溶液10、20、30、40μL和63.2mg/mL蒿甲醚甲醇溶液15μL，15.82mg/mL的内标蒿乙醚20μL，以蒿甲醚与蒿乙醚峰面积的比值为横坐标，蒿甲醚在小鼠血浆中的浓度为纵坐标作图得内标法的线性关系曲线，y=243.44x+4.152，

6、R2=0.9991，线性范围0～3.792mg/mL。　　A.甲醇溶液中蒿甲醚(ARM)与蒿乙醚(ARE)的色谱图　　B.提取后的空白血浆色谱图　　C.提取后的空白血浆中添加蒿甲醚与蒿乙醚后的色谱图　　D.甲醇溶液中青蒿素(QHS)与蒿甲醚的色谱图　　图2高效液相色谱图（略）　　Fig.2HPLCchromatograms　　2.5提取回收率　　按“2.1.2”项下处理血浆样品后，高、中、低3个浓度的蒿甲醚在小鼠血浆中的提取回收率(n=3)分别为(84.8±1.6)%，(83.5±1.1)%，(73.0±2.9

7、)%。　　2.6方法回收率　　分别量取250μL小鼠血浆，精密加入6.32mg/mL蒿甲醚甲醇溶液15μL,35μL，63.2mg/mL蒿甲醚甲醇溶液7μL,按“2.1.2”项下处理后测定色谱峰面积，代入标准曲线换算成实际测定浓度，计算低、中、高3个浓度的回收率（n=3）分别为(98.7±1.3)%(98.2±1.7)%,(96.8±2.1)%。　　2.7精密度试验　　分别量取250μL小鼠血浆，精密加入6.32mg/mL蒿甲醚甲醇溶液15μL,35μL，63.2mg/mL蒿甲醚甲醇溶液7μL，按“2.1.2”

8、项下处理，于1d内和连续3d重复进样3次,测得日内RSD分别为1.736%，1.979%，1.085%，日间RSD分别为1.912%，2.031%，1.257%。　　3讨论　　3.1本研究采用蒿甲醚的同系物蒿乙醚为内标物，建立了RPHPLC法测定小鼠血浆中蒿甲醚的含量。实验中最初选择青蒿素作为内标，但该化合物在设定的色谱条件下出峰过早，在3.2min左右(见图2)，从色谱图上可见在该