5氟尿嘧啶对人胃癌细胞超微结构和gstπ表达的影响

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1、5氟尿嘧啶对人胃癌细胞超微结构和GSTπ表达的影响作者：张江兰薄爱华吴靖芳任君旭【摘要】目的：探讨5氟尿嘧啶对人胃癌细胞的结构和GSTπ表达的影响。方法：在人胃癌BGC823细胞株培养液中加入5氟尿嘧啶，继续培养5h或10h，然后用HE、免疫组化染色和铀铅染色。光镜、电镜下观察。结果：10h组胃癌细胞外型畸变、细胞器破坏严重；GSTπ灰度发生变化。结论：5氟尿嘧啶作用10h对人胃癌细胞超微结构及GSTπ基因表达有明显影响。【关键词】胃肿瘤;免疫组织化学;5氟尿嘧啶【ABSTRACT】Objective:Tostudytheinfluenceof5Fliorourac

2、ilonstructureofhumangastriccancercellsandtheexpressionsofGSTπ.Methods:5FliorouracilediumofBGC823gastriccancercellsandcontinuouslyculturedfor5hor10h,thenthehumangastriccancercellsatoxylinEosin(HE)、dyedmunohistochemicalmethodandacidUleadcitrate,microscope.Results:BGC823cells,featuresdevelop

3、edbyaberrationandtheoraganellsentalgroupof10hours,andtheashofGSTπachNeoplasms,Immunohistochemistry,Research,5Fliorouracil5氟尿嘧啶(5FU)是一种嘧啶拮抗剂，它是临床上最常用的治疗实体瘤的化疗药物之一，特别是消化道癌和乳腺癌治疗效果好。对卵巢癌、宫颈癌、肺癌、绒毛膜上皮癌等也有效。我国是胃癌高发地区之一，5FU是治疗进展期胃癌的重要药物。目前虽然人们对5FU抗癌机制的认识已逐渐深入，但关于5FU对癌细胞超微结构及基因表达的影响报道极少。为了探讨5F

4、U抗肿瘤的作用途径及对GSTπ表达的影响，我们利用细胞培养SP免疫组化染色技术，5FU作用5h和10h后，对人胃癌细胞超微结构GSTπ表达状况进行研究，为深入认识5FU的作用途径提供科学依据。1材料与方法1.1一般资料5氟尿嘧啶由深圳万乐药业有限公司生产。BGC823胃癌细胞株由北京肿瘤研究所提供。SP免疫组织化学试剂盒及兔抗人GSTπ抗血清和DAB显色剂由北京中山生物技术公司提供。1.2方法将5×104/mL浓度的BCG823胃癌细胞置于无菌96孔板和6孔板中，置CO2培养箱中培养24h，在6孔板中加入消毒盖玻片，使细胞贴壁生长（爬片）。将6孔板中培养的癌细胞分对照

5、组不加5FU培养，实验组加入5FU注射液15μL(含0.375mg)，然后继续37℃,培养5h或10h。取出贴壁癌细胞。4%多聚甲醛固定30min,常规SP法染色。阴性对照用PBS代替Ⅰ抗；阳性对照用已知胃癌阳性切片。将96孔板中培养细胞在加药后5h或10h收获，戊二醛固定，分别石蜡切片（HE染色）、常规制作超薄切片和铀铅染色，用光镜和JEM100XⅡ型电镜观察。1.3统计学处理利用北航医学图象分析管理系统软件，每组记数100个阳性细胞检测其着色灰度，以灰度表示着色深浅（深者灰度值低，浅者灰度值高）。SPSS软件进行方差分析后，进行独立样本t检验。2结果2.1胃癌细胞形态和

6、超微结构的变化HE染色后光学显微镜下观察对照组BGC823细胞呈梭形、多边形；胞核多位于中央，呈圆形、椭圆形，染色呈紫兰色，其边界清晰，核仁可见，胞质均匀，多呈弱嗜酸性。实验组5h组BGC823癌细胞的胞质突减少，甚至消失，很多细胞周边多呈毛刺状，胞质空泡增多，少数癌细胞膜已不完整，胞质溢出，胞核处于偏位；胞核多呈固缩状态，着色较深。实验10h组，大部分癌细胞胞质消失，裸核多见，少部分癌细胞质水肿，HE染色时胞核固缩。电镜下5h组，局部细胞器减少，主要是线粒体和游离核糖体减少，胞质中有低密度电子空泡出现，并见扩张的内质网出现。10h组，线粒体水肿基质变空，嵴变短或消失，可见巨大

7、线粒体及膜断裂；滑面内质网囊泡及分支小管增多，甚至呈灶状聚集；粗面内质网核糖体减少或缺如，可见池内隔离；次级溶酶体增多；有些细胞质膜断裂或缺损，使胞核裸露。2.2免疫组织化学染色结果GSTπ阳性物质呈黄色或棕黄色，分布在正常胞质和突起中，以核周围区着色较深，胞核不着色。实验5h组许多细胞胞质着色变浅或变化不明显，而胞核着色更深。实验10h组细胞核，胞质着色变浅（详见表１）。表15氟尿嘧啶对GSTπ表达的影响（灰度值）注:与对照组相比△P<0.01，△△P<