肺结核性及腺癌性胸水sdspage蛋白图谱分析

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1、肺结核性及腺癌性胸水SDSPAGE蛋白图谱分析【摘要】目的分析肺结核性及腺癌性胸水SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)图像之图谱特点及异同，为两者的鉴别诊断奠定基础。方法选用28例肺结核性胸水及36例肺腺癌性胸水，每例均以5%浓缩胶和不同浓度（6%、8%、10%、12%、15%）之分离胶行SDSPAGE分离胸水中蛋白质，考马斯亮蓝染色，AlphaEaseFCStandAlone图像分析软件分析10%分离胶凝胶图像。结果不同浓度（6%、8%、10%、12%、15%）的分离胶SDSPAGE图像表明,肺结核性胸水及肺腺癌性胸水经10%S

2、DSPAGE分离，两者的胸水蛋白在40～200kD范围内均可稳定分离得到10条蛋白条带。这些条带蛋白质分子量分别为200kD、152kD、134kD、118kD、103kD、98kD、84kD、62kD、54kD、43kD。含量达60%以上的蛋白质分子量在54kD至84kD之间。50～60kD区间的蛋白质含量肺结核性胸水高于肺腺癌性胸水，差异具有显著性。结论10%及12%的分离胶对胸水中的蛋白具有较好的分离效果；经10%的分离胶分离，肺结核性胸水分子量在50～60kD区间内的蛋白含量高于肺腺癌性胸水，具有鉴别诊断价值。【关键词】SDSPAGE

3、蛋白肺癌肺结核胸水图像分析肺结核及肺腺癌是临床上引起胸水的两种常见疾病［1-5］。目前，有近20%的结核性和癌性胸水在临床经全面检查后仍难以鉴别［6］，因而影响疾病的治疗。由于结核性和癌性胸腔积液的治疗及预后有很大的差别,因此两者的鉴别至关重要。胸水蛋白SDSPAGE图谱的图像分析尚未见报道。为探讨肺结核性及腺癌性胸水SDSPAGE蛋白图谱分析的诊鉴价值，笔者进行了研究。　　1材料与方法　　1.1研究对象　　收集南方医院2007年7月至2008年7月的肺结核性胸水28例及肺腺癌性胸水36例。其中男性33例，女性31例，平均年龄(48.25±1

4、4.76)岁。每例均经细胞病理学、组织病理学或结合临床资料确诊。所有胸水标本离体后，立即4℃4000r/min，离心10min；取上清，分装后–20℃冻存。　　1.2SDSPAGE凝胶电泳　　制备6%、8%、10%、12%及15%的分离胶和5%浓缩胶。取3μL胸水与3μL2×SDS上样缓冲液混匀，煮沸3min，离心后上样电泳。设置电压分离胶90V30min，浓缩胶120V3h至溴酚蓝指示剂达凝胶底部时终止电泳，参照　　3讨论　　　　肺结核和肺腺癌是引起胸水的两大病因,临床上如何早期确诊和及时治疗是常常遇到的难题。本文从胸水蛋白质方面寻找两者间的

5、差异，为其鉴别诊断提供依据。　　　　汪得喜等［12］研究应用SELDITOFMS检测了27例渗出性胸液标本,对获得的蛋白信号进行分析发现良恶性胸腔积液标本有6个蛋白信号呈现差异，但研究未涉及肺结核和腺癌性胸水的鉴别。　　　　区带电泳是临床检验领域中应用最广泛的技术。Chen等［13］电泳技术应用于胸腔积液渗出液与漏出液的鉴别诊断。秦慧等［14］将琼脂糖凝胶蛋白电泳技术应用于良、恶性胸腔积液的鉴别，结果表明:结核性胸腔积液组的胸液α1球蛋白、α2球蛋白及α2球蛋白/白蛋白的比值均高于肿瘤组,差异具有显著性。上述研究均采用琼脂糖凝胶电泳方法，均未

6、涉及肺结核和腺癌性胸水的鉴别。由于琼脂糖是大分子筛系统，仅能使大分子量的蛋白质得以分离。SDSPAGE形成的分子筛孔远小于琼脂糖，能使相应蛋白质得到较全面的分离，且分辨率高于琼脂糖电泳［15］。本文将SDSPAGE应用于肺结核性及腺癌性胸水的鉴别诊断，发现与琼脂糖电泳分离相比，能得到更多的蛋白条带，两者胸水蛋白含量在50kD60kD区间有明显差异。　　SDSPAGE凝胶电泳即SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，是根据电场作用下不同分子量蛋白质在凝胶中的迁移率不同，将蛋白质按分子量大小不同加以分离。不同浓度的分离胶形成的分子筛大小不同，因而分离的蛋

7、白分子量范围也不同。本实验用6%、8%、10%、12%、15%不同浓度的分离胶与5%的浓缩胶分离肺结核性与腺癌性胸水，得到不同分离胶浓度下的蛋白分离图谱。6%或8%的分离胶，由于形成的分子筛筛孔较大，只能使分子量在66kD(白蛋白)以上的蛋白质得到较好分离；15%的分离胶，由于形成的分子筛筛孔较小，可使分子量在66kD(白蛋白)以下的蛋白质得到较好分离；10%及12%的分离胶能使40～200kD范围内的蛋白质得到很好的分离。胸水中的大部分蛋白质都分布在40～200kD区间，因此，我们进一步用10%分离胶对肺结核性及腺癌性胸水进行了分离，并比较两者

8、间的差异。　　肺结核性及腺癌性胸水经10%分离胶的SDSPAGE分离，在分子量40～200kD范围内均可稳定得到10条蛋白条带。这些条