高效液相色谱法测定决明子中蒽醌类成分的含量论文

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1、高效液相色谱法测定决明子中蒽醌类成分的含量论文王宾豪杨荣平张小梅龚桥励娜【摘要】目的测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。方法采用高效液相色谱法。色谱柱：Shim-packCLC-ODSC18柱；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速：1ml/min；λ：440nm。结果该方法准确可靠，重现性好。结论该方法可以测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。【关键词】高效液相色谱法决明子蒽醌Abstract：ObjectiveTodeterminethecontentofanthraquinonesinSem

2、enCassiae.MethodsHPLCmethodedonanODScolumnobilephaseofCH3OH-0.1%phosphoricacid.Theflol/minandthedetection.ResultsThismethodethodcanbeusedtodeterminethecontentofanthraquinonesinSemenCassiae.KeyenCassiae;Anthraquinones决明子为豆科植物决明CassiaobtusifoliaL.或小决明Cas

3、siatoraL.的干燥成熟种子。性味甘、苦、咸、微寒，归肝、大肠经。具有清肝明目、润肠通便之功效，为临床常用中药［1］。其主要化学成分为蒽醌类化合物。本实验采用HPLC法同时测定了决明子中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量，为决明子中有效物质研究奠定了基础。1仪器与材料LC-l0ATvp高效液相色谱仪（日本岛津公司），AEG-45SM电子天平（十万分之一），大黄素（批号0756200009）,大黄酚（批号110796200513）,大黄素甲醚（批号07589803）(均购自

4、中国药品生物制品检定所)，决明子（重庆合川GAP种植基地.freelg,大黄酸0.58mg,大黄素0.55mg,大黄酚0.53mg,大黄素甲醚0.58mg，加甲醇超声溶解,分别定容至5ml,作为对照品溶液。精密吸取上述5种对照品溶液各2.0ml，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，即得混合对照品溶液，其浓度分别为芦荟大黄素0.0212mg/ml，大黄酸0.0232mg/ml，大黄素0.022mg/ml，大黄酚0.0212mg/ml，大黄素甲醚0.0232mg/ml。2.2供试品溶液的制备取决

5、明子药材粉末（过4号筛）约1g，精密称定，置索氏提取器中，加80%乙醇100ml回流提取至无色，合并提取液，定容至100ml，精密吸取25ml提取液，经减压回收后，残渣加浓度为1mol/L盐酸溶液40ml回流水解3h，然后用120ml氯仿分4次回流萃取，30ml/次，合并氯仿萃取液并加适量蒸馏水洗至中性，回收氯仿。残渣甲醇仿溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得［2，3］。2.3色谱条件色谱柱为Shim-packCLC-ODSC18（6.0mm×150mm,5um）；流动相为甲醇－0.

6、1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速1ml/min；柱温25℃；检测波长440nm.2.4标准曲线的绘制分别精密吸取混合对照品溶液8，10，12，14，16μl进样，测定峰面积，绘制标准曲线，计算混合对照品中各对照品的回归方程及线性范围，结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的回归方程分别为：Y=814521X-20442，Y=1110506X-7296，Y=1431202X+4274，Y=1739861X-24381，Y=707106X-26453，其线性范围分别为：0.170～0.339，0

7、.186～0.371，0.176～0.352，0.170～0.339，0.186～0.371μg。2.5精密度实验精密吸取混合对照品溶液10μl，进样，测定各峰峰面积，连续测定5次，求得各峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：芦荟大黄素0.7%，大黄酸1.8%，大黄素0.6%，大黄酚1.1%，大黄素甲醚1.4%。结果表明仪器精密度良好。2.6稳定性实验2.6.1对照品溶液稳定性实验精密吸取混合对照品溶液10μl，进样，分别于0，2，4，8，12，24h后重复进样，计算各成分峰面积值的相对标准偏差（

8、RSD）分别为：芦荟大黄素0.9%，大黄酸0.8%，大黄素0.7%，大黄酚1.2%，大黄素甲醚1.3%。结果表明混合对照品溶液在24h内基本上是稳定的。2.6.2供试品溶液稳定性实验精密吸取供试品溶液10μl，进样，分别于0，2，4，8，12，24h后重复上述操作，计算各成分峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：芦荟大黄素0.6%，大黄酸0.7%，大黄素1.3%，大黄酚0.6%，大黄素甲醚1.7%。结果表明供试品溶液在24h内基本上是稳定的。2.7重现性实验精密称取