高效液相色谱法测定决明子不同清炒品中5种蒽醌类成分的含量

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1、高效液相色谱法测定决明子不同清炒品中5种蒽醌类成分的含量王宾豪，杨荣平，张小梅，龚桥，励娜【摘要】　　目的研究决明子不同清炒品中5种醌类成分含量的变化。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Shim-packCLC-ODSC18柱；流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速1ml/min；波长440nm。结果该方法准确可靠，重复性好。结论清炒温度越高，决明子中游离蒽醌含量有变大趋势，结合蒽醌含量有变小趋势，总蒽醌含量变化不大。【关键词】高效液相色谱法决明子清炒品蒽醌　　Abstract：ObjectiveTostudythecontentvar

2、ietyofanthraquinoneindifferentSemenCassiaefriedethodedonanODScolumnobilephaseofCH3OH-0.1%phosphoricacid.Theflol/minandthedetection.ResultsThismethodperaturethatfriedorehigh,thecontentofthedissociativeanthraquinonesismorerich,thecontentoftheassociativeanthraquinonesisless,bu

3、tthecontentoftheassociativeanthraquinoneschangedlittle.　　KeyenCassiae;Friesg，大黄酸0.58mg，大黄素0.55mg，大黄酚0.53mg，大黄素甲醚0.58mg，加甲醇，超声溶解，分别定容至5ml，为对照品溶液。　　取上述5种对照品溶液各2.0ml，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，即为混合对照品溶液。混合对照品溶液中各对照品的浓度分别为：芦荟大黄素对照品溶液0.0212mg/ml、大黄酸对照品溶液0.0232mg/ml、大黄素对照品溶液0.022mg/ml

4、、大黄酚对照品溶液0.0212mg/ml、大黄素甲醚对照品溶液0.0232mg/ml。　　2.2清炒品的制备称取5份决明子药材各300g，编号，按表1处理。将处理好的决明子粉碎，备用。表1不同清品的制备（略）　　2.3供试品溶液的制备　　2.3.1总蒽醌供试品溶液的制备取生品及各炮制品粉末（过4号筛）约1g，精密称定。置索氏提取器中，加80%乙醇100ml回流提取至无色，合并提取液，定容至100ml，精密吸取25ml提取液，经减压回收后，残渣加浓度为1mol/L盐酸溶液400ml回流水解3h，然后用120ml氯仿分4次回流萃取，30ml/次，

5、合并氯仿萃取液并加适量蒸馏水洗至中性，回收氯仿。残渣加氯仿溶解并转移至10ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，即得〔3，4〕。　　2.3.2游离蒽醌供试品溶液的制备取总蒽醌供试品溶液的制备项下提取液25ml，经减压回收后残渣加120ml氯仿分4次回流提取至无色，合并氯仿萃取液，回收氯仿。残渣加氯仿溶解并转移至10ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，即得。　　2.4色谱条件色谱柱为Shim-packCLC-ODSC18(6.0mm×150mm,5μm)；流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速1ml/min；柱温为室温；检测波长440nm。　　2

6、.5标准曲线的绘制分别精密吸取混合对照品溶液8，10，12，14，16μl进样，测定峰面积，绘制标准曲线，计算混合对照品中各对照品的回归方程及线性范围，结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的回归方程分别为：Y=814521X-20442,Y=1110506X-7296,Y=1431202X+4274，Y=1739861X-24381,Y=707106X-26453，其线性范围分别为：0.170～0.339μg，0.186～0.371μg，0.176～0.352μg,0.186～0.371μg。　　2.6精密度实验精密吸取混合对照

7、品溶液10μl，进样，测定各峰峰面积，连续测定5次，求得各峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：芦荟大黄素0.7%，大黄酸1.8%，大黄素0.6%，大黄酚1.1%，大黄素甲醚1.4%。结果表明仪器精密度良好。　　2.7稳定性实验　　2.7.1对照品溶液稳定性实验精密吸取混合对照品溶液10μl，进样，分别于0，2，4，8，12，24h后重复上述操作，计算各成分峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：芦荟大黄素0.9%，大黄酸0.8%，大黄素0.7%，大黄酚1.2%，大黄素甲醚1.3%。结果表明混合对照品溶液在24h内基本上是稳定的。　　2.7

8、.2供试品溶液稳定性实验精密吸取总蒽醌供试品溶液10μl，进样，分别于0，2，4，8，12，24h后重复上述操作，计算各成分峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：