高效液相色谱法测定三金胶囊中积雪草苷的含量论文

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1、高效液相色谱法测定三金胶囊中积雪草苷的含量论文.freell/min，检测波长205nm。结果积雪草苷的峰与其他色谱峰分离良好，在0.0338～0.5408mg/ml范围内线性良好，回归方程为y=2×106x+1704.7（r=1），平均回收率为98.63%；RSD=0.76%（n=5）。结论该方法简便.freelethodinetheasiaticosideinSanjinsoftgelatincapsule.MethodsUsingC18reversedphasecolumn，mobilephaseasacetonitrilel/min，detection.Results

2、Asiaticosideotheringredients.Itshog/ml，y=2×106x+1704.7（r=1），theaveragerecoveryrateethodpleandaccurateforqualitycontroloftheSanjinsoftgelatincapsule.［KeyadzuUV2100紫外可见分光光度计，Sartorius电子天平；三金胶囊（由广西药物研究所提供）；积雪草苷对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：892200102）；乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。2色谱条件色谱柱：KromasilC18（4.6mm×250

3、mm）；流动相：乙腈水梯度洗脱，程序见表1；柱温：25℃；流速：1.0ml/min；检测波长：205nm；进样量：20μl。表1乙腈水梯度洗脱程序3方法和结果3.1标准曲线的制备精密称取积雪草苷对照品16.90mg，置于25ml量瓶中，用甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准储备液。分别精密量取储备液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0ml于10ml量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，配成浓度为0.0338、0.0676、0.1352、0.2704、0.5408mg/ml的标准溶液。分别吸取上述不同浓度标准溶液20μl，依2项色谱条件进样测定，见表2。表2积雪草苷对照溶液浓度与对

4、应的峰面积由图1可知：积雪草苷在浓度为0.0338～0.5408mg/ml范围内时，浓度与积雪草苷峰面积呈良好的线性关系。3.2对照品溶液及供试品的配制3.2.1对照品溶液的制备精密称取积雪草苷对照品适量，加甲醇制成每1ml各含50μg的溶液，即得（图2）。图2积雪草苷对照品HPLC色谱图3.2.2供试品溶液的制备精密称取本品内容物2.0g，精密加入甲醇50ml，称定重量，置于水浴上加热回流45min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液25ml，蒸干，残渣使用0.05mol/L氢氧化钠溶液30ml，溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20

5、ml，弃去水层，合并正丁醇层，用正丁醇饱和的水溶液洗涤2次，每次10ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加适量甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（图3）。图3三金胶囊样品HPLC色谱图3.3干扰实验取无积雪草的阴性样品，按3.2.1项下的方法提取，测定。结果在积雪草苷相应的保留时间无吸收峰，表明处方中其他成分对测定无影响（图4）。图4积雪草阴性样品HPLC色谱图3.4精密度试验在2项色谱条件下，取3.1项下对照品溶液（0.2704mg/ml）连续测定5次，结果见表3。实验证明，本法的精密度良好。表3精密度试验结果3.5重复性试验对同一供试品溶液（20051

6、115批），在2项色谱条件下平行测定5份，5份的平均值为519264，RSD=0.76%（n=5），见表4。实验证明，本法的重复性良好。表4重复性实验结果3.6加样回收率实验精密称取已知含量为1.642mg/g的三金胶囊（20051115批）内容物约1.2g，共5份，分别精确加0.9480mg/ml积雪草苷对照品溶液2.0ml，按3.2.1项下方法提取，测定，计算回收率，结果积雪草苷的平均回收率为98.63%，RSD=0.76%（n=5），符合定量分析的要求，见表5。3.7样品测定在2项下的色谱条件下，本品3批样品中的积雪草苷含量，见表6。结果为3批样品每粒的平均含量为1.047，

7、根据平均含量的80%拟定该产品的最低含量限度为0.80mg/粒。表5积雪草苷回收率测定结果表6样品测定结果4讨论4.1检测波长积雪草苷紫外吸收很弱，仅在近紫外区有末端吸收，故流动相有机溶剂选择本底紫外吸收相对较弱的乙腈。对积雪草苷标准品溶液在190～400nm进行紫外扫描，其最大吸收峰在197nm处。但检测波长低于200nm，溶剂本身的吸收以及噪音的影响也会加大，综合考虑，以205nm作为检测波长。实验表明在2项下的色谱条件下，检测波长选在205nm，检测灵敏度能达到