高效液相色谱蒸发光散射检测法测定补气养血口服液中黄芪甲苷的含量论文

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1、高效液相色谱蒸发光散射检测法测定补气养血口服液中黄芪甲苷的含量论文易爱玲，周从辉，熊义涛【摘要】目的建立用高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定补气养血口服液中黄芪甲苷的含量测定方法。方法采用KromasilODSC18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱，流动相为乙腈－水（32∶68）；流速为1.0ml·min-1；柱温：40℃；ELSD参数：漂移管温度100℃，氮气流速：2.5ml·min-1。结果黄芪甲苷在2.248～11.240μg范围内线性关系良好，r＝0.9996；平均回收率99.8%，RSD为1.2%。结论该方法简便、准确.freelethodfordeterminationo

2、fastragalosideIVinBuqiyangxueOralLiquor.MethodsThechromatographicconiditionsincludedtheKromasilODS-C18(4.6mm×250mm,5μm)chromatographiccolumnandmobilephaseconsistedofacetonitrile-l·min-1.Columntemperatureeter;drifttubetemperaturel·min-1.ResultsAstragalosideIVsho2.248～11.240μg,r=0.9996;theaveragereco

3、veryethodissimple,reproducible,anditcanbeusedforthequalitycontrolofBuqiyangxueOralLiquour.Keyg），补气养血口服液样品（武汉联合药业有限公司提供，批号20050301；规格10ml/支），实验中所用试剂水为重蒸馏水，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件KromasilODSC18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；Chemstate色谱工作站；流动相为乙腈－水（32∶68）；流速为1.0ml·min-1；柱温：40℃；ELSD蒸发光散射检测器检测参数：漂移管温度100℃，

4、氮气流速：2.5ml·min-1。理论板数按黄芪甲苷峰计应不低于3000［3］。在该色谱条件下对照品、样品和阴性对照品的色谱图分别见图1～3。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h黄芪甲苷对照品适量精密称定，加甲醇制成每毫升含0.5mg的对照品溶液，摇匀，即得。2.2.2供试品溶液精密量取本品25ml，用水饱和的正丁醇振摇提取4次,20ml/次，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，20ml/次，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔树脂柱（内径1.5cm，长12cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，

5、弃去洗脱液，继用70%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。2.2.3阴性（缺黄芪）对照溶液取缺黄芪的阴性样品约25ml，精密称定，按供试品溶液的制备项下的方法操作，得阴性对照液。2.3专属性考察实验按上述仪器和实验条件，将供试品溶液、阴性对照溶液、黄芪甲苷对照品溶液分别注入液相色谱仪测定。结果供试品色谱图中有与对照品相同的保留时间，且基线平稳、分离度好，而阴性对照在此保留时间无色谱峰。2.4标准曲线的制备精密吸取对照品溶液（浓度为0.562mg/ml）4，8，12，16，20μl，分别注入液相色谱仪，依照上述色谱条件测定峰面积，以

6、峰面积的自然对数值为纵坐标，黄芪甲苷进样量的自然对数值为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝1.1317X＋6.3959，r＝0.9996。结果表明，黄芪甲苷在2.248～11.240μg范围内线性关系良好。2.5精密度实验取同一供试品溶液，重复进样6次，结果RSD=0.9%(n=6)。2.6重复性实验取20050301批样品的同一份供试品溶液,按含量测定方法,连续进样6次，以黄芪甲苷的峰面积计算，结果RSD＝1.05%。表明本方法重复性较好。2.7稳定性实验精密量取本品25ml，照供试品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液20μl，分别于0，2，4，6，8h注入液相色谱仪

7、中，分别测定黄芪甲苷的峰面积，结果RSD＝0.96%，表明供试品溶液在8h内稳定。2.8加样回收率实验取已知含量的样品（87.20μg/ml）7份，精密量取15ml，每份分别精密加入对照品溶液（含黄芪甲苷0.562mg/ml）2.0ml，照黄芪甲苷含量测定法分别测定黄芪甲苷的含量，并计算回收率，结果黄芪甲苷的平均回收率为99.8%，RSD为1.2%，表明本法具有良好的回收率。结果见表1。表1回收率实验结果（略