vipmrna在鸡形觉剥夺性近视眼球后壁组织中的表达

《vipmrna在鸡形觉剥夺性近视眼球后壁组织中的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、VIPmRNA在鸡形觉剥夺性近视眼球后壁组织中的表达作者：王平宝，刘双珍，王华，蒋晶晶，吴小影，谭星平，夏朝华【摘要】目的：探讨雏鸡高度近视眼眼球后壁组织血管活性肠肽（vasoactiveintestinalpeptide,VIP）mRNA的动态表达及意义。方法：选择出生1d来亨雏鸡共30只，15只右眼遮盖作为实验组，分别持续遮盖1，2和4RNA的动态表达。结果：实验组由实验前远视眼快速演变为高度近视眼，并随遮盖时间延长，近视度数加深，眼轴延长；两组眼球后壁均有VIPmRNA阳性表达；随出生时间延长两组VIPmRNA表达均逐渐增强。与对照组相比，实验组VIPmRN

2、A表达明显上调（P<0.01）。结论：形觉剥夺可导致高度近视眼；高度近视眼较正常眼VIPmRNA表达明显上调。VIP可能参与了近视眼形成与发展的调控。【关键词】形觉剥夺性近视眼0引言近视眼在普通人群中的患病率很高，全世界平均患病率为10%～40%；我国有3亿以上的近视眼，恶性近视眼约2000万[1]。恶性近视眼是青壮年主要的致盲性眼病之一。由于对近视眼的发病机制不明，因此阐明近视眼的发病机制，从病因上治疗近视眼是眼科工作者亟待解决的关键问题。血管活性肠肽（vasoactiveintestinalpeptide,VIP）是一种特殊的神经肽递质，具有神经递质、神

3、经调质和神经自分泌等多种功能。作为视觉信息分子，VIP在视觉诱导近视眼形成的过程中可能起到视觉信息传递和调控的作用。目前关于VIPmRNA在形觉剥夺性近视眼（formdeprivationmyopia,FDM）中表达及作用如何，尚未见报道。为探讨VIPmRNA在FDM眼球后壁中的表达是否有改变，我们采用RT-PCR方法从核酸信息转录水平检测VIPmRNA在小鸡FDM动物模型中随形觉剥夺时间延长的动态表达。1材料和方法1.1材料随机选择出生1d的健康黄色来亨雏鸡30只，雌雄不拘，眼部无充血及分泌物，裂隙灯及直接眼底镜检查屈光间质清晰。其中15只当日用半透明塑料眼罩（

4、10mL塑料试管底部制作）单眼（右眼）遮盖作为实验组，遮盖时间为1，2，4RNA的RT-PCR半定量检测全部标本常规行眼球后壁组织总RNA的提取与逆转录合成cDNA；雏鸡VIPmRNA序列由美国生物信息中心（NCBI）提供的基因库（Genbank）中查找获得（基因序列号：VIP为NM205366），利用Primer5引物设计软件，根据mRNA序列设计高分值VIP引物序列（上海华大基因有限公司合成）；β-actin引物直接由北京鼎国生物公司提供。引物序列为:VIP引物:Forer5’tagaaatgcaaggcatgctg3’,ReversePrimer5’tttc

5、gaaagcggctgtagtt3’,片段长度177bp;内参照β-actin引物:Forer5’catctcttgctcgaagtcca3’,ReversePrimer5’atcatgtttgagaccttcaaca3’,片段长度310bp。反应条件：94℃5min→[94℃1min→55℃45s→72℃45s]×30cycles→72℃10min；反应体系相应试剂加入完全后，短暂离心，以25μL石蜡油覆盖；去离子亚沸水替代cDNA模板作为PCR扩增反应的空白阴性对照；取雏鸡小肠组织cDNA为模板作为阳性对照；以上均放入PCR热循环仪中进行扩增。1.2.2RT-

6、PCR扩增产物半定量15g/L琼脂糖+0.5×TBE溶液配胶，0.5mg/L溴乙锭显色，6μL扩增产物+1μL6×溴酚兰buffer混匀点样，电压为100V，通电时间为20～30min，紫外线下观察PCR电泳结果。将凝胶放入EagleEyeⅡ图像处理系统摄像并测量产物吸光度值（A值），并计算每个样本在同一个反应体系中与β-actinA值的相对比值，以便作统计分析。统计学处理：采用Statistica统计软件行方差齐性分析，在此基础上,两组之间比较用t检验，多组之间两两比较用q检验,直线相关分析，以P<0.05为差异具有显著性，有统计学意义。2结果2.1眼屈光

7、度数、眼轴长度与形觉剥夺时间相关分析刚出生雏鸡均呈远视状态，眼轴短；随时间延长，对照组远视度数减低，眼轴延长，周龄与远视屈光度数呈负相关（r＝-0.88，P<0.01）；实验组眼屈光度由实验前远视快速演变为高度近视，眼轴明显增长，两者呈负相关（r＝-0.94,P<0.01）；两组之间实验前眼屈光度数、眼轴长度无明显差异（P>0.05）；但实验组形觉剥夺后，两组之间眼屈光度数、眼轴长度进行比较，有统计学差异（P<0.01，表1）。2.2逆转录聚合酶链反应结果全部实验组和对照组雏鸡的眼球后壁组织提取的总RNA经15g/L琼脂糖电泳后，证实有28

8、S，18S